Name: La aplicación de fluorescencia la transferencia de energía de resonancia (FRET) para examinar la eficiencia de efector por translocación Coxiella burnetii Durante siRNA silenciamiento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Aprende a examinar la translocación de efectores bacterianos mediante silenciamiento de genes con siRNA y ensayos reporteros FRET en Coxiella burnetii. Este método combina técnicas establecidas para estudiar interacciones patógeno-hospedador.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabajo fue apoyado por las subvenciones del Consejo Nacional de Investigación Médica y de Salud (NHMRC) (ID de subvención 1062383 y 1063646) otorgadas a HJN. EAL cuenta con el apoyo de un Premio Australiano de Posgrado.

Los autores no tienen nada que revelar.

sistemas de secreción, y las proteínas efectoras bacterianas estos sistemas de transporte en el citoplasma de células huésped, son un importante componente de la virulencia que muchas bacterias patógenas utilizan para establecer una infección dentro de nichos replicativos únicas. El foco de muchos grupos de investigación ha sido investigar la interacción entre los efectores bacterianos y las proteínas del huésped y la influencia que estos tienen efectores en las vías celulares del huésped. investigación muy limitado, en...

Coxiella burnetii es un patógeno intracelular único que causa la fiebre Q infección humana zoonótica. Esta enfermedad está asociada con un amplio espectro de manifestaciones clínicas que se extienden desde la seroconversión asintomática a la infección crónica que amenaza la vida que a menudo se manifiesta como endocarditis años después de la exposición 1. La infección humana se produce principalmente a través de la inhalación de aerosoles contaminados con rumiantes el principal reservorio de la infección, en particular, las vacas lecheras, ovejas y cabras. Aunque la infección por Coxiella en estos animales suele ser subclínica, la infección puede desencadenar aborto y la carga bacteriana considerable dentro del fluido de parto y la placenta puede contaminar el medio ambiente local 1. Un ejemplo de la enorme carga de dicha contaminación puede tener sobre la salud pública y la industria de la agricultura se observó recientemente en el brote de fiebre Q que se produjo en los Países Bajos 2. Entre 2007 y2010, más de 4.000 casos humanos de fiebre Q fueron diagnosticados y este brote se vinculó a la contaminación significativa de granjas de cabras 3. Además, Coxiella es un arma biológica potencial, según la clasificación de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades, debido a la estabilidad ambiental de las bacterias y de baja dosis infecciosa necesaria para causar morbilidad y mortalidad 4 grave. Coxiella existe en dos fases: Fase I organismos, aislados de fuentes naturales, son extremadamente virulenta y Fase II son organismos altamente atenuados in vivo. Por ejemplo, después de varios pasajes en vitro de Coxiella burnetii Nine Mile Fase I organismos, se producen las bacterias de fase II que contiene una deleción cromosómica irreversible que resulta en lipopolisacárido truncada (LPS) 5. Esta cepa, C. burnetii NMII, es fenotípicamente similar a la Fase I en modelos de cultivo de tejidos y proporciona un modo más segurol para los investigadores estudiar la patogénesis Coxiella en laboratorios 5. En los últimos años varios avances han avanzado rápidamente en el campo de la genética Coxiella. En particular, el desarrollo de los medios axénicos (acidifica medio cisteína citrato - ACCM-2) ha permitido el crecimiento de células libres de Coxiella en tanto líquidos como sólidos en medios de 6,7. Esto dio lugar a mejoras directas de herramientas genéticas disponibles para Coxiella incluyendo un sistema de expresión génica inducible, vectores lanzadera y sistemas de transposón azar 8-11. Más recientemente, dos métodos para la inactivación génica dirigida también se han desarrollado, allanando el camino para el examen de los candidatos de genes de virulencia específicos 12. Después de la internalización por los macrófagos alveolares, Coxiella replica en un número elevado dentro de un compartimiento unido a la membrana denominado el Coxiella- contiene vacuolas (CCV). El CCV requiere el tráfico endocítica anfitrión THendosomas tempranos y tardíos en bruto hasta que madura en un orgánulo lisosoma derivados 13. A lo largo de este proceso, el CCV adquiere factores del huésped que, o bien aparecen de forma transitoria o permanecen asociados con la vacuola, incluyendo, pero no limitado a, Rab5, Rab7, CD63 y el indicador LAMP-1 13-15. La replicación de Coxiella dentro de las células huésped es totalmente dependiente de un tipo de sistema completamente funcional Dot / ICM IVB secreción (T4SS) 8,16,17. Este sistema de secreción es una estructura multi-proteína ancestralmente relacionada con los sistemas de conjugación y se extiende por ambas membranas bacterianas y vacuolar para entregar proteínas bacterianas, denominado efectores, en el citoplasma de acogida 18. El Coxiella T4SS es funcionalmente muy similar a la del sistema de secreción bien caracterizado Tipo IVB Dot / Icm de Legionella pneumophila 19,20. Curiosamente, la activación de la translocación efector T4SS y posterior no se produce hasta Coxiella alcanza el lisosoma derivado de ácidoorgánulo, aproximadamente 8 horas después de la infección 17,21. Hasta la fecha, más de 130 efectores Dot / ICM se han identificado 9,17,22-24. Muchos de estos efectores probablemente juegan un papel importante durante la replicación de Coxiella dentro de las células huésped; Sin embargo, sólo unos pocos efectores se han caracterizado funcionalmente 25-29. En este estudio utilizamos un ensayo de translocación basado en la fluorescencia que se basa en la escisión del sustrato CCF2-AM FRET (en lo sucesivo, el sustrato BlaM) a través de la actividad de β-lactamasa en el citoplasma de la célula huésped (Figura 1). El gen de interés se fusiona con TEM-1 β-lactamasa (BlaM) en un plásmido reportero que proporciona la expresión constitutiva. El sustrato BlaM se compone de dos fluoróforos (cumarina y fluoresceína) que forman un par de FRET. La excitación de los resultados de la cumarina en FRET de la fluoresceína y la emisión de fluorescencia verde en la ausencia de la translocación efector; sin embargo, si el Blaproteína de fusión M-efector se transloca al citoplasma de acogida, la resultante β-lactamasa escinde actividad del anillo β-lactámico del sustrato Blam, la separación de la producción de la emisión de fluorescencia azul después de la excitación par de FRET. Este ensayo de translocación se ha probado como un enfoque para identificar las proteínas efectoras de una gama de diferentes bacterias intracelulares y extracelulares, incluyendo C. burnetii, L. pneumophila, L. longbeachae, Chlamydia trachomatis, E. enteropatógena coli, Salmonella y Brucella 17,30-35. Para determinar el papel de los factores del huésped específicas sobre Coxiella translocación efector utilizamos un método bien establecido para el silenciamiento de genes conocido como interferencia de ARN, en particular los pequeños ARN de interferencia (siRNA). Originalmente identificado en Caenorhabditis elegans, la interferencia de ARN es un proceso celular endógeno conservada utilizado para DEFE innataNSE contra los virus, así como la regulación de genes 36,37. Después de la unión de la secuencia específica de siRNA, la degradación de mRNA se produce a través de RISC (complejo de silenciamiento inducido por ARN) que resulta en el silenciamiento de genes específico o desmontables 38. En este estudio, siRNA se utiliza para apuntar dos proteínas del huésped, y Rab5a Rab7A, que son importantes reguladores de la vía endocítica. El impacto de silenciar Rab5a y Rab7A sobre la traslocación efector se determinó usando C. burnetii pBlaM-CBU0077. CBU0077 fue seleccionado como se ha demostrado previamente para ser trasladadas por el sistema de secreción Dot / ICM de Coxiella 17. Utilizando tanto siRNA silenciamiento de los genes y el ensayo de translocación fluorescencebased descrito aquí, estamos empezando a establecer una función de los factores del huésped en la translocación de las proteínas efectoras por Coxiella. Este enfoque se puede aplicar a una amplia gama de bacterias intracelulares y extracelulares que poseen secretio similaresn sistemas responsables de la translocación de las proteínas efectoras.

<table><tbody><tr><td><fuerte>Reactivos</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico</td><td>Sigma</td><td>C0759</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Citrato de sodio</td><td>Sigma</td><td>S4641</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Fosfato de potasio</td><td>Sigma</td><td>60218</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio</td><td>Calbiochem</td><td>442611</td><td>medio ACCM-2 componente</td></tr><tr><td>Cloruro de calcio</td><td>Sigma</td><td>C5080</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Sulfato de hierro</td><td>Fisher</td><td>S93248</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td>ACCM-2 componente</td></tr><tr><td>medio L-cisteína</td><td>Sigma</td><td>C6852</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Bacto-neopeptona</td><td>BD</td><td>211681</td><td>medio ACCM-2 componente</td></tr><tr><td>Ácidos Casamino</td><td>Fisher</td><td>BP1424</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Metil beta ciclodextrina</td><td>Sigma</td><td>C4555</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>RPMI + Glutamax</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>61870-036</td><td>ACCM-2 componente medio</td></tr><tr><td>Cloranfenicol</td><td>Sigma</td><td>C0378</td><td>Para cultivo bacteriano</td></tr><tr><td>ON-TARGETplus Control no focalizado Pool (OTP)</td><td>Dharmacon</td><td>D-001810-10-05</td><td>Control no dirigido</td></tr><tr><td>siGENOME Human PLK1 (5347) siRNA - SMARTpool Dharmacon</td><td></td><td>M-003290-01-005</td><td>Causa la muerte celular; medida de la eficiencia de la transfección</td></tr><tr><td>siGENOME Human RAB5A (5968) siRNA - SMARTpool</td><td>Dharmacon</td><td>M-004009-00-0005</td><td></td></tr><tr><td>siGENOME Human RAB7A (7879) siRNA - SMARTpool</td><td>Dharmacon</td><td>M-010388-00-0005</td><td></td></tr><tr><td>5x tampón de siRNA</td><td>Dharmacon</td><td>B-002000-UB-100</td><td>Utilice agua estéril sin RNasa para diluir 5x tampón de siRNA a 1x tampón de siRNA</td></tr><tr><td>DharmaFECT-1 Reactivo de transfección Dharmacon</td><td></td><td>T-2001-01</td><td>Para transfección</td></tr><tr><td>Opti-MEM + GlutaMAX</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>51985-034</td><td>Medio de suero reducido utilizado para la transfección</td></tr><tr><td>DMEM + GlutaMAX</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10567-014</td><td>Para cultivo celular e infección</td></tr><tr><td>Suero fetal de ternera inactivado por calor (FCS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>SH30071.03</td><td>Puede utilizar un producto equivalente alternativo</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D8418</td><td>Para el almacenamiento de la cepa de Coxiella</td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td>Para cultivo celular</td></tr><tr><td>0,05% Tripsina + EDTA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25300-054</td><td>Para cultivo celular</td></tr><tr><td>dH2O</td><td></td><td></td><td>Para la dilución de muestras y estándares para qPCR</td></tr><tr><td>Quick-gDNA Mini Prep</td><td>ZYMO Research</td><td>D3007</td><td>Puede usar un producto equivalente alternativo para extraer gDNA</td></tr><tr><td>SensiFAST SYBR No-ROX Kit</td><td>Bioline</td><td>BIO-98020</td><td>Puede usar un producto de mezcla maestra de qPCR equivalente alternativo para la reacción de qPCR</td></tr><tr><td>LiveBLAzer FRET-B/G Kit de carga con CCF2-AM</td><td>Invitrogen</td><td>K1032</td><td>Para la medición de la translocación mediante fluorescencia y generación de la solución de carga 6X (contiene solución A, B, C y DMSO)</td></tr><tr><td>Hidróxido de sodio</td><td>Merck</td><td>106469</td><td>Componente de la solución Probenicida</td></tr><tr><td>Fosfato de sodio monobásico</td><td>Sigma</td><td>71505</td><td>Componente de la solución probenicida</td></tr><tr><td>Ortofosfato de hidrógeno di-Sódico</td><td>Merck</td><td>106586</td><td>Solución Probenicida componente</td></tr><tr><td>Probenicid</td><td>Sigma</td><td>P8761</td><td>Componente de solución probenicida</td></tr><tr><td>DRAQ5 Solución de sonda fluorescente (5 mM)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62251</td><td>Tinción de núcleos para determinar la viabilidad celular. Use 1:4000 diluido en PBS.</td></tr><tr><td>Solución de PFA (paraformaldehído) al 4% en PBS</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td>Solución de fijación para células HeLa 229</td></tr><tr><td>Matraz de cultivo de tejidos de 25 cm2 con tapón ventilado</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Para el crecimiento de la cepa bacteriana</td></tr><tr><td>96 Well Flat Clear bottom Poliestireno negro Tratado con TC, envueltos individualmente, con tapa, estériles</td><td>Corning</td><td>3603</td><td></td></tr><tr><td>Matraz de cultivo de tejidos de 75 cm2 con tapón ventilado</td><td>Corning</td><td></td><td>430641 Para el crecimiento de células HeLa 229</td></tr><tr><td>Matraz de cultivo de tejidos de 175 cm2 con tapón ventilado</td><td>Corning</td><td>431080</td><td>Para el crecimiento de células HeLa 229</td></tr><tr><td>Hemocitómetro</td><td></td><td></td><td>Para la cuantificación de células HeLa 229 Placas de</td></tr><tr><td>PCR Tear-A-Way 96 Well</td><td>4titude 4titude 4ti-0750</td><td>/TA</td><td>Para qPCR reacción</td></tr><tr><td>Cadena de 8 tapas,</td><td>plana Sarstedt</td><td>65.989.002</td><td>Para qPCR reacción</td></tr><tr><td><fuerte>Nombre</fuerte></td><td><fuerte>Empresa</fuerte</td><td>><fuerte>Número de catálogo</fuerte</td><td>><fuerte>Comentarios</fuerte</td></tr><tr><td>><fuerte>Equipo</fuerte></td>Microfuge <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>de <td>sobremesa</td></tr><tr><td>Vórtice</td><td></td><td></td><td></td>de sobremesa</tr><tr><td>Mezclador</td><td></td><td></td><td></td>orbital</tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5810 R</td><td>Para la peletización de cultivos bacterianos</td></tr><tr><td>Nanodrop</td><td></td><td></td><td>Para la cuantificación de ADNg</td></tr><tr><td>Mx3005P Máquina QPCR</td><td>Aligent Technologies</td><td>401456</td><td>Para la cuantificación de genomas de Coxiella en cultivo de 7 días</td></tr><tr><td>Microplaca ClarioSTAR lector</td><td>BMG LabTech</td><td></td><td>Para la medición de fluorescencia</td></tr></tbody></table>

la aplicación de fluorescencia la transferencia de energía de resonancia (fret) para examinar la eficiencia de efector por translocación<em&gt; coxiella burnetii</em&gt; durante sirna silenciamiento

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

Coxiella burnetii, el agente causante de la fiebre Q, es un patógeno intracelular que se basa en un punto IV / ICM sistema de secreción tipo para establecer un nicho replicativo. Una cohorte de efectores se translocan a través de este sistema en la célula huésped a manipular los procesos de acogida y permitir el establecimiento de una vacuola lisosoma derivado único para la replicación. El método que aquí se presenta implica la combinación de dos técnicas bien establecidas: el silenciamiento de genes específico utilizando siRNA y la medición de la translocación efector utilizando un sustrato a base de FRET que se basa en la actividad β-lactamasa. La aplicación de estos dos enfoques, podemos empezar a entender el papel de los factores del huésped en la función del sistema de secreción bacteriana y translocación efector. En este estudio se examinó el papel de Rab5a y Rab7A, ambos importantes reguladores del tráfico de la vía endocítica. Demostramos que el silenciamiento de la expresión de cualquiera de los resultados de proteínas en una disminución de la translocatio efectorn eficiencia. Estos métodos pueden ser fácilmente modificados para examinar otros patógenos intracelulares y extracelulares que también utilizan sistemas de secreción. De esta manera, una visión global de los factores del huésped implicados en la translocación bacteriana efector puede ser revelada.

Para este estudio, la C. Se seleccionó la cepa burnetii pBlaM-CBU0077 como CBU0077 se ha demostrado previamente para ser un efector translocado del sistema de secreción de Coxiella Dot / ICM 17. Antes de la infección, el número total de genomas / ml en los siete día C. cultura burnetii pBlaM-CBU0077 se enumeró utilizando qPCR. La figura 4 muestra un ejemplo del ciclo umbral valores (Ct) que se espera de ambos patron...

La investigación de las interacciones entre los patógenos bacterianos y sus anfitriones es un área importante de la investigación biológica. A continuación, describimos las técnicas necesarias para medir la translocación efector por Coxiella burnetii durante siRNA silenciamiento de genes utilizando sustrato Blam.

La aplicación de fluorescencia la transferencia de energía de resonancia (FRET) para examinar la eficiencia de efector por translocación<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Durante siRNA silenciamiento

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

El objetivo general de este procedimiento experimental es examinar el impacto de procesos específicos del huésped sobre la capacidad de los patógenos bacterianos para translocar proteínas efectoras. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la microbiología celular. Concretamente, cómo participa el huésped en bloquear o promover la entrega de efectores de virulencia bacteriana dentro de la célula huésped.La principal ventaja de esta técnica es que combina dos métodos establecidos: a saber, la silenciación génica mediante ARNip y el ensayo de proteínas reporteras para medir la translocación de proteínas bacterianas. Para investigar la interacción entre patógenos y la célula eucariota.Este método proporciona información sobre la patogénesis de Coxiella y también puede aplicarse para investigar las interacciones huésped-patógeno de otras bacterias que dependen de una translocación eficiente de proteínas. Por ejemplo, Chlamydia, Salmonella y Escherichia coli adherente y efusogénica. Después de cultivar C. burnetii que expresa CBU0077, fusione la betalactamasa según el protocolo descrito en un matraz de cultivo de 25 centímetros cuadrados con tapa ventilada.Ino

applying-fluorescence-resonance-energy-transfer-fret-to-examine

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Fuente: Shi, J., et al. Cribado e identificación de supresores silenciadores de ARN a partir de efectores secretados de patógenos vegetales. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo muestra un ensayo de coinfiltración para identificar proteínas efectoras de patógenos que suprimen el silenciamiento de ARN en Nicotiana benthamiana 16c. Un reportero fluorescente y un gen efector candidato se introducen en las hojas de las plantas a través de Agrobacterium. Normalmente, el silenciamiento de ARN degrada los...

Ensayo de coinfiltración para detectar efectores de patógenos que suprimen el silenciamiento del ARN vegetal

Aquí se describe un método para visualizar retículo endoplasmático asociados mRNAs en células de cultivo de tejidos de mamíferos. Esta técnica implica la permeabilización selectiva de la membrana plasmática con digitonina para eliminar el contenido citoplásmico seguido por...

La visualización de los ARNm retículo endoplásmico localizados en células de mamíferos

Los estudios de biomoléculas in vivo son cruciales para comprender la función molecular en un contexto biológico. Aquí describimos un método novedoso que permite la internalización de biomoléculas fluorescentes, como el ADN o las proteínas, en microorganismos vivos. También se presenta y discute el análisis de datos in vivo registrados por microscopía de fluorescencia.

Internalización y Observación de fluorescente Biomoléculas en microorganismos que viven a través de electroporación

La translocación del efector a las células huésped a través de un sistema de secreción de tipo III es una estrategia de virulencia común entre las bacterias gramnegativas. Se aplicó un ensayo basado en fusión de efectores betalactamasas para el análisis cuantitativo de la translocación. En las células infectadas por Yersinia, la conversión de un indicador FRET por la betalactamasa se controla mediante microscopía de barrido láser.

Análisis de<em&gt; Yersinia enterocolitica</em&gt; Efector translocación en las células huésped Usando beta-lactamasa Efector fusiones

Este manuscrito describe un método para etiquetar las transcripciones de los ARN mensajero (ARNm) con sonda de ADN marcada con fluorescencia, para el uso en experimentos de fluorescencia de una sola molécula en situ hibridación (smFISH) en e. coli. smFISH es un método de visualización que permite la detección simultánea, localización y cuantificación de moléculas individuales de ARNm en células individuales fijas.

Método para el etiquetado de las transcripciones en los Escherichia coli las células para una sola molécula de la fluorescencia In Situ hibridación experimentos

Enfoques basados en proteína fluorescentes para monitorear efectores secretados por las bacterias en las células del huésped son desafiantes. Esto es debido a la incompatibilidad entre proteínas fluorescentes y el sistema de secreción tipo III. Aquí, un optimizado superfolder GFP sistema se utiliza para la visualización de efectores secretados por las bacterias en la célula de la planta huésped.

Sistema proteína verde fluorescente para visualizar efectores entregado de las bacterias durante una infección

Este protocolo demuestra el uso del ensayo de ligadura de proximidad para sondear las interacciones proteína-proteína in situ en la línea germinal de C. elegans.

Detección en situ del conjunto del complejo de ribonucleoproteína en la línea germinal de C. elegans utilizando el ensayo de ligadura de proximidad

La hibridación in situ de fluorescencia de ARN de molécula única (smFISH) es un método para cuantificar con precisión los niveles y la localización de ARN específicos a nivel de una sola célula. Aquí, informamos nuestros protocolos de laboratorio validados para el procesamiento de bancos húmedos, imágenes y análisis de imágenes para la cuantificación de células individuales de ARN específicos.

Análisis unicelular de alelos transcripcionalmente activos por FISH de molécula única

La transferencia de energía de fluorescencia de molécula única es un método que rastrea la dinámica del ARNt durante la síntesis de proteínas ribosómicas. Al rastrear ribosomas individuales, se identifican poblaciones no homogéneas, lo que arroja luz sobre los mecanismos. Este método se puede utilizar para rastrear cambios biológicos conformacionales en general para revelar relaciones de función dinámica en muchos otros biosistemas complejados. Los métodos de molécula única pueden observar...

Estudio de transferencia de energía de fluorescencia de molécula única de síntesis de proteínas ribosómicas

La transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) es una técnica de imagen para detectar interacciones de proteínas en células vivas. Aquí, se presenta un protocolo FRET para estudiar la asociación de enzimas modificadoras de histonas con factores de transcripción que las reclutan a los promotores objetivo para la regulación epigenética de la expresión génica en tejidos vegetales.

Investigación de las interacciones entre las enzimas modificadoras de histonas y los factores de transcripción in vivo mediante la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia

Este artículo describe el marcaje de doble color de ARN largos en posiciones terminales y su inmovilización superficial mediante encapsulación en vesículas de fosfolípidos para aplicaciones de microscopía FRET TIRF de molécula única. La combinación de estas técnicas permite una visualización y un análisis precisos de la dinámica del ARN a nivel de una sola molécula.

Marcaje final fluorescente y encapsulación de ARN largos para microscopía FRET-TIRF de molécula única

Aprende a examinar la translocación de efectores bacterianos mediante silenciamiento de genes con siRNA y ensayos reporteros FRET en Coxiella burnetii. Este método combina técnicas establecidas para estudiar interacciones patógeno-hospedador.

La aplicación de fluorescencia la transferencia de energía de resonancia (FRET) para examinar la eficiencia de efector por translocación Coxiella burnetii Durante siRNA silenciamiento (Video) | JoVE Journal

La aplicación de fluorescencia la transferencia de energía de resonancia (FRET) para examinar la eficiencia de efector por translocación

Explorar más videos