Name: La medición de granulocitos y de monocitos fagocitosis y la actividad de la explosión oxidativa en la sangre humana (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: Aprende a medir la fagocitosis de granulocitos y monocitos y la actividad de explosión oxidativa en sangre humana mediante citometría de flujo. Esta técnica sencilla permite evaluar la función inmune innata en estudios de ejercicio y nutrición.

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Los autores desean reconocer Zack Shue, Casey John y Lynn Cialdella-Kam por su ayuda durante la optimización de este procedimiento.

<ol><li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+pistachios+on+performance+and+exercise-induced+inflammation%2C+oxidative+stress%2C+immune+dysfunction%2C+and+metabolite+shifts+in+cyclists%3A+a+randomized%2C+crossover+trial%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Influence of pistachios on performance and exercise-induced inflammation, oxidative stress, immune dysfunction, and metabolite shifts in cyclists: a randomized, crossover trial.</a> PLoS One. 9, e113725(2014).</li>
<li>Knab, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+freeze-dried+juice+blend+powder+on+exercise-induced+inflammation%2C+oxidative+stress%2C+and+immune+function+in+cyclists%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Physiol+Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">Effects of a freeze-dried juice blend powder on exercise-induced inflammation, oxidative stress, and immune function in cyclists.</a> Appl Physiol Nutr Metab. 39, 381-385 (2014).</li>
<li>Konrad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+effect+of+ingesting+a+quercetin-based+supplement+on+exercise-induced+inflammation+and+immune+changes+in+runners%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sport+Nutr+Exerc+Metab%22%5BJournal%5D)">The acute effect of ingesting a quercetin-based supplement on exercise-induced inflammation and immune changes in runners.</a> Int J Sport Nutr Exerc Metab. 21, 338-346 (2011).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+and+inflammation+responses+to+a+3-day+period+of+intensified+running+versus+cycling%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Immune and inflammation responses to a 3-day period of intensified running versus cycling.</a> Brain Behav Immun. 39, 180-185 (2014).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbohydrate+supplementation+affects+blood+granulocyte+and+monocyte+trafficking+but+not+function+after+2.5+h+of+running%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Carbohydrate supplementation affects blood granulocyte and monocyte trafficking but not function after 2.5 h of running.</a> Am J Clin Nutr. 66, 153-159 (1997).</li>
<li>Tidball, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cell+response+to+acute+muscle+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Sci+Sports+Exerc%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cell response to acute muscle injury.</a> Med Sci Sports Exerc. 27, 1022-1032 (1995).</li>
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<li>Liao, Y., Liu, P., Guo, F., Zhang, Z. Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+burst+of+circulating+neutrophils+following+traumatic+brain+injury+in+human%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Oxidative burst of circulating neutrophils following traumatic brain injury in human.</a> PLoS One. 8, e68963(2013).</li>
<li>McFarlin, B. K., Venable, A. S., Prado, E. A., Henning, A. L., Williams, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+flow+cytometry+technique+to+evaluate+changes+in+granulocyte+function+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Image-based flow cytometry technique to evaluate changes in granulocyte function in vitro.</a> J Vis Exp. , (2014).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+to+obesity+and+moderate+weight+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+Relat+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Immune response to obesity and moderate weight loss.</a> Int J Obes Relat Metab Disord. 20, 353-360 (1996).</li>
<li>Nieman, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+function+in+female+elite+rowers+and+non-athletes%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Immune function in female elite rowers and non-athletes.</a> Br J Sports Med. 34, 181-187 (2000).</li>
<li>Ichii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+sucrose+impairs+phagocytic+function+and+promotes+apoptosis+in+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Iron sucrose impairs phagocytic function and promotes apoptosis in polymorphonuclear leukocytes.</a> Am J Nephrol. 36, 50-57 (2012).</li>
<li>Gomes, A., Fernandes, E., Lima, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+probes+used+for+detection+of+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorescence probes used for detection of reactive oxygen species.</a> J Biochem Biophys Methods. 65, 45-80 (2005).</li>
<li>Gruger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+impact+of+linezolid+on+human+neutrophil+functions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Negative impact of linezolid on human neutrophil functions in vitro.</a> Chemotherapy. 58, 206-211 (2012).</li>
<li>Dementhon, K., El-Kirat-Chatel, S., Noel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+vitro+model+for+the+multi-parametric+quantification+of+the+cellular+interactions+between+Candida+yeasts+and+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of an in vitro model for the multi-parametric quantification of the cellular interactions between Candida yeasts and phagocytes.</a> PLoS One. 7, e32621(2012).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este manuscrito proporciona un protocolo paso a paso para la determinación de dos indicadores de granulocitos y la función de monocitos. Hemos identificado algunos pasos que son críticos para el éxito de este ensayo. Una de estas medidas es la incubación baño de hielo que se produce inmediatamente antes de la adición de bacterias. enfriamiento a fondo de todas las muestras minimizará el efecto de la temperatura sobre la actividad de fagocitosis y OB. Otro paso crítico es la adición de las bacterias a cada muestra. Un 8:...

El granulocitos y monocitos fagocitosis / explosión oxidativa (OB) ensayo de actividad es una técnica simple y directa que se utiliza con frecuencia para reunir información acerca de la función inmune innata después de un ejercicio prolongado e intensivo. 1-4 Al estudiar la respuesta del sistema inmune a un estímulo, los granulocitos y los monocitos son de particular interés, ya que juegan un papel central en la defensa del huésped y son las primeras células inmunes a acumularse en el sitio de infección. 5 neutrófilos, un tipo de granulocitos, son las primeras células de translocación de en el músculo dañado de tejidos después de un ejercicio intenso. 6 la fagocitosis y la actividad de OB son las medidas más comunes de granulocitos y monocitos función, 7 y se prefieren como indicadores de la función celular inmune innato debido a su papel central tanto en el proceso de infección y el proceso de reparación. El ensayo descrito en este manuscrito utilizes un flujo básico citómetro para proporcionar una determinación cuantitativa de granulocitos y la fagocitosis de monocitos y la actividad OB en la sangre entera. El uso de sangre total en esta técnica es ventajosa porque permite que el ensayo se lleva a cabo sin un procedimiento de purificación que consume tiempo. Este ensayo se puede modificar fácilmente para acomodar una variedad de diseños de investigación y capacidades de laboratorio. Por ejemplo, Liao et al. Utilizó una técnica similar para mostrar que la actividad de neutrófilos OB se incrementa y neutrófilos fagocitosis se disminuye después de una lesión cerebral traumática. 8 En otro ejemplo, McFarlin et al. Describe un elegante modificación de esta técnica que utiliza aloficocianina (APC ) conjugado con CD66b y CD45 etiquetado APC-conjugado tándem de alto rendimiento con la imagen basada en citometría de flujo para clasificar los granulocitos en términos de sus actividades fagocitosis y OB 7,9. Nuestro grupo de investigación ha utilizado diversas adaptaciones de la presente technique como un indicador de la función inmune innata en poblaciones con sobrepeso, obesos, y atléticas durante casi 20 años. 10,11 El texto a continuación proporcionará al lector con instrucciones paso a paso para realizar este ensayo y destacar las áreas que el lector pueda adaptarse para satisfacer las necesidades de sus investigaciones.

<table><tbody><tr><td>12 tubos de 75 mm, con tapón</td><td>VWR</td><td>20170-579</td><td>Necesitará 2 tubos por muestra ("H" y "F") más 3 tubos por lote (para controles de ensayo; "F", "H" y "Solo sangre").</td></tr><tr><td>PBS (10x), pH 7.4</td><td>Life Technologies</td><td>70011-044</td><td></td></tr><tr><td>Tapa de botella 0.2 y micro; m filtro de acetato de celulosa (capacidad de 500 ml)</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-741-07&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glucosa, polvo</td><td>Life Technologies</td><td>15023-021</td><td></td></tr><tr><td>Ácido cítrico (anhidro, cultivo celular probado, cultivo celular vegetal probado)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2404-100G</td><td></td></tr><tr><td>Citrato de sodio tribásico dihidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4641-25G</td><td></td></tr><tr><td>Dihidroetidio (Hidroetidina) (HE)</td><td>Life Technologies</td><td>D11347</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilo sulfóxido (DMSO) Anhydrous</td><td>Life Technologies</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp;( Cepa de madera sin proteína A) Biopartículas, conjugado con fluoresceína (FITC)</td><td>Life Technologies</td><td>S2851</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus&nbsp;( Cepa de madera sin proteína A) Biopartículas, sin etiquetar</td><td>Life</td><td>Technologies S-2859</td><td></td></tr><tr><td>Solución Azul de Tripano, 0,4%</td><td>Life Technologies</td><td>15250-061</td><td></td></tr><tr><td>Vacutainer de 4,0 ml que contiene 7,2 mg de K2EDTA, VWR secado por pulverización</td><td></td><td>BD367861</td><td>Necesitará 1 tubo de extracción de sangre K2EDTA por muestra.</td></tr><tr><td>Vacutainer de 4,0 ml que contiene 68 unidades USP de heparina de litio, VWR recubierta con spray</td><td></td><td>BD367884</td><td>Necesitará 1 tubo de extracción de sangre de heparina de litio por muestra.</td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff CP</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605705</td><td>i.e., analizador de hematología</td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Enjuague</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547167</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff fix</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547171</td><td></td></tr><tr><td>COULTER ac&middot; T 5diff WBC Lyse</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547170</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Hgb Lyse</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547168</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Cal Calibrador</td><td>Beckman Coulter</td><td>7547175</td><td></td></tr><tr><td>COULTER Ac&middot; T 5diff Control Plus</td><td>Beckman Coulter</td><td>7547198</td><td></td></tr><tr><td>AcT 5diff Diluyente</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547169</td><td></td></tr><tr><td>200 &micro; l puntas de pipeta de longitud extendida</td><td>VWR</td><td>37001-526</td><td></td></tr><tr><td>Bandeja de hielo aislada</td><td>VWR</td><td>89198-980</td><td>Para baño de agua helada.</td></tr><tr><td>Gradilla metálica abierta</td><td>para tubos VWR</td><td>60916-702</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Life Technologies</td><td>26140-111</td><td></td></tr><tr><td>Estación de trabajo TQ-Prep</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605429</td><td>i.e., estación de trabajo automatizada de preparación de lisis celular</td></tr><tr><td>ImmunoPrep Sistema de reactivos</td><td>Beckman Coulter</td><td>7546999</td><td>i.e., sistema de reactivos fijos RBC lyse/WBC</td></tr><tr><td>Sistema de citometría de flujo Cytomics FC500 MCL con software CXP</td><td>Beckman Coulter</td><td>626553</td><td></td></tr><tr><td>IsoFlow Sheath Fluid</td><td>Beckman Coulter</td><td>8547008</td><td></td></tr><tr><td>COULTER CLENZ</td><td>Beckman Coulter</td><td>8546929</td><td></td></tr><tr><td>Fluorosferas de control de flujo&nbsp;</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605359</td><td>i.e., alineación y verificación de fluidos fluorosferas</td></tr><tr><td>FlowJo</td><td>Software FlowJo FlowJo FlowJo</td><td></td><td>i.e., software de análisis de citometría de flujo Excel</td></tr><tr><td>Software</td><td>Microsoft</td><td>Microsoft Excel</td><td>i.e., programa de hojas de cálculo electrónicas</td></tr></tbody></table>

la medición de granulocitos y de monocitos fagocitosis y la actividad de la explosión oxidativa en la sangre humana

Measuring Granulocyte and Monocyte Phagocytosis and Oxidative Burst Activity in Human Blood

El ensayo de fagocitosis de granulocitos y monocitos y actividad de estallido oxidativo (OB) se puede utilizar para estudiar el sistema inmune innato. Este manuscrito proporciona la metodología necesaria para añadir este ensayo a un arsenal de inmunología del ejercicio. El primer paso en este ensayo es preparar dos alícuotas ("H" y "F") de sangre total (heparina). Luego, se agrega dihidroetidio a la alícuota de H, y ambas alícuotas se incuban en un baño de agua tibia seguido de un baño de agua fría. A continuación, se añade Staphylococcus aureus (S. aureus) a la alícuota H y S. aureus marcado con isotiocianato de fluoresceína a la alícuota F (bacteria:fagocito = 8:1), y ambas alícuotas se incuban en un baño de agua tibia seguido de un baño de agua fría. Luego, se agrega azul de tripano a cada alícuota para apagar la fluorescencia extracelular y las células se lavan con solución salina tamponada con fosfato. A continuación, se lisan los glóbulos rojos y se fijan los glóbulos blancos. Por último, se utiliza un citómetro de flujo y un software de análisis adecuado para medir la fagocitosis de granulocitos y monocitos y la actividad de OB. Este ensayo se ha utilizado durante más de 20 años. Después de un esfuerzo intenso y prolongado, los atletas experimentan un aumento significativo pero transitorio de la fagocitosis y una disminución prolongada de la actividad obstétrica. El aumento de la fagocitosis después del ejercicio se correlaciona con la inflamación. A diferencia de los individuos de peso normal, la fagocitosis de granulocitos y monocitos está crónicamente elevada en los participantes con sobrepeso y obesidad, y se correlaciona modestamente con la proteína C reactiva. En resumen, este ensayo basado en citometría de flujo mide la fagocitosis y la actividad OB de los fagocitos y se puede utilizar como una medida adicional de la inflamación inducida por el ejercicio y la obesidad.

ejercicio prolongado e intensivo tiene profundos efectos en la función inmune innata, incluyendo función natural killer celular, la respuesta de macrófagos mediada por citoquinas a la infección viral, y de granulocitos y la fagocitosis de monocitos y la actividad OB. Múltiples estudios indican que los granulocitos y monocitos fagocitosis aumenta significativamente después del ejercicio, lo que refleja la inflamación inducida por el daño muscular y las demandas metabólicas. En contraste, ...

El propósito de este manuscrito es presentar un método para medir la fagocitosis de monocitos y granulocitos y la actividad de estallido oxidativo en muestras de sangre humana.

La medición de granulocitos y de monocitos fagocitosis y la actividad de la explosión oxidativa en la sangre humana

The granulocyte and monocyte phagocytosis and oxidative burst (OB) activity assay can be used to study the innate immune system. This manuscript provides ...

El objetivo general de este ensayo es medir la fagocitosis y la actividad del estallido oxidativo de granulocitos y monocitos en sangre completa. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la inmunología, como cómo afecta una intervención dietética determinada a la respuesta inmunitaria al ejercicio. La principal ventaja de esta técnica es que se trata de un ensayo sencillo y directo que puede modificarse fácilmente según los recursos disponibles en el laboratorio y los intereses de investigación.Estamos utilizando esta medida de la función inmunitaria innata desde hace dos décadas en muchos de nuestros ensayos de ejercicio, y compartiremos algunos de estos datos más adelante en el video. Antes de comenzar el procedimiento, utilice un analizador hematológico para realizar un recuento sanguíneo completo con análisis diferencial de glóbulos blancos en las muestras de sangre según las instrucciones del fabricante. Anote el recuento de glóbulos blancos en células por mililitro y los valores porcentuales de neutrófilos y monocitos para las muestras.Luego, para cada tubo experimental y de control, utilice una punta de pipeta de longitud extendida para transferir 100 microlitros de cada muestra de sangre completa desde el tubo de recolección de sangre con heparina de litio hasta el fondo de un tubo de 12 por 75 milímetros adecuadamente etiquetado. Una vez que se haya transferido toda la sangre, agregue 10 microlitros de la solución trabajo de HE a los tubos etiquetados con tinta roja y una H, incluyendo el tubo control de HE. Retire las tapas de los tubos.Vortex los muestras brevemente y transfiera los tubos a un baño de agua a 37 grados Celsius en una rejilla metálica abierta con agitación suave cada cinco minutos. Después de 15 minutos, transfiera rápidamente la rejilla y los tubos a un baño de agua con hielo durante 12 minutos con agitación suave cada cinco minutos. Al final de la incubación, agregue el volumen apropiado de solución de trabajo de S.aureus sin marca a los tubos etiquetados con tinta roja y una H, incluyendo el tubo control HE.Vortexe brevemente los tubos con las tapas. Luego, agregue el volumen apropiado de la solución de trabajo de S. aureus marcada con FITC a los tubos etiquetados con tinta negra y una F, incluyendo el tubo control de FITC, y vortexe brevemente las muestras. A continuación, incube todos los tubos en baño de agua a 37 grados Celsius durante 20 minutos, agitando cada cinco minutos, seguido de un enfriamiento de un minuto en agua con hielo.Después de colocar las muestras a temperatura ambiente, utilice una pipeta repetidora para añadir 100 microlitros de solución de enfriamiento fría a todas las tubos y vortexee las muestras. Devuelva las muestras al baño de hielo. Después de un minuto, utilice la pipeta repetidora para añadir un mililitro de PBS frío a cada uno de los tubos.Luego, agite los tubos en vórtex y añada dos mililitros adicionales de PBS a las muestras. Ahora, centrifugue las células y aspire el sobrenadante. Utilizando la pipeta repetidora, añada 50 microlitros de FBS frío con hielo a los tubos.Después de agitar mediante vortex, transfiera todos los tubos a un carrusel. Utilice una estación de trabajo automatizada para la preparación de la lisis celular con el fin de lisar los glóbulos rojos y fijar los glóbulos blancos según las instrucciones del fabricante. Para analizar los resultados del ensayo mediante citometría de flujo, abra el software de adquisición del sistema de citometría de flujo y cree un nuevo protocolo.Elige FITC para el parámetro FL1 en el ensayo de fagocitosis y HE para el parámetro FL2 en el ensayo de actividad de estallido oxidativo. Crea un diagrama de dispersión de dispersión hacia adelante frente a dispersión lateral, un histograma FL1 y un histograma FL2. Luego, crea regiones poligonales para las poblaciones de glóbulos blancos, granulocitos y monocitos en el diagrama de dispersión hacia adelante frente a dispersión lateral, y crea regiones lineales en los histogramas.Ahora ejecute la muestra de control negativo solo con sangre, seguida de las muestras de control positivo HE y FITC, revise los histogramas y ajuste los voltajes del tubo fotomultiplicador de los canales FITC y PE según sea necesario. Luego, inicie la adquisición de datos para las muestras de control. Después de un período de equilibrio de 15 minutos, cargue las muestras experimentales en el carrusel según el orden de la lista de trabajo e inicie el análisis de las muestras de estudio.Para evaluar la actividad fagocítica de las muestras, primero consolide todos los archivos de muestras marcadas con F y los archivos de datos en modo lista de control en una sola carpeta y arrastre los archivos al espacio de muestras en el software de análisis de citometría de flujo. Haga doble clic en una muestra de control y utilice el selector de puerta poligonal para establecer una puerta para la población total de glóbulos blancos, teniendo cuidado de incluir todas las células en los bordes del gráfico. Etiquete esta puerta como WBC.Haga doble clic en la compuerta de GB y utilice el selector de compuerta elíptica para establecer la compuerta de linfocitos. Etiquete la compuerta adecuadamente y arrastre el porcentaje de datos de la compuerta hacia un costado para que las células sean fácilmente visibles. Luego, utilice el selector de compuerta poligonal para establecer la compuerta de granulocitos y la compuerta de monocitos.Etiquete cada compuerta de manera correspondiente y arrastre el porcentaje de datos de la compuerta hacia un costado. Haga doble clic en la muestra de control FITC seguida por la compuerta de granulocitos y utilice los menús desplegables para establecer el eje X en FL1 y el eje Y en dispersión lateral, o SS. Utilice el selector de compuerta cuadrada para definir una compuerta negativa de fagocitosis y una compuerta positiva de fagocitosis. Resalte la compuerta positiva de fagocitosis de la población de granulocitos.Luego, haga clic en Espacio de trabajo y Agregar estadístico. Seleccione Media geométrica y FL1 para generar la intensidad de fluorescencia de los granulocitos positivos para fagocitosis y haga clic en Agregar. A continuación, elija la frecuencia del estadístico principal y haga clic en Agregar para generar el porcentaje de granulocitos que son positivos para fagocitosis.Para aplicar estas configuraciones a todas las muestras del estudio, seleccione todas las compuertas y estadísticas creadas en la muestra de control FITC y arrástrelas al área de Todas las muestras en el panel de grupos. Guarde el trabajo como un archivo WSP en la misma carpeta que contiene la carpeta de datos en modo de lista. A continuación, haga clic en la primera muestra experimental del conjunto de datos y confirme que la compuerta de los glóbulos blancos se ajusta adecuadamente a la distribución celular en cada una de las muestras, ajustando los bordes de la compuerta según sea necesario.Ahora haga clic en la puerta de las células blancas en la primera muestra experimental y confirme que las puertas de granulocitos, monocitos y linfocitos se ajustan a la distribución celular en cada una de las muestras, ajustando las puertas según sea necesario. Después de guardar el archivo, haga clic en el icono del editor de tablas y arrastre cada estadístico de interés a la tabla. Haga clic en Crear tabla para mostrar los datos en formato de hoja de cálculo y guarde el trabajo como un archivo XLSX.Luego repita el análisis para las muestras de actividad de estallido oxidativo marcadas con H y los archivos de datos en modo de lista de control, tal como se acaba de demostrar. Como se muestra en este experimento representativo, la fagocitosis mediada por granulocitos de S. aureus aumenta inmediatamente y a las 1,5 horas después de una sesión de ciclismo de 75 kilómetros, volviendo a niveles normales a la mañana siguiente. La actividad del estallido oxidativo de los granulocitos disminuye durante al menos 21 horas después de este nivel de actividad.Además, existe una correlación moderada entre la fagocitosis de granulocitos y los niveles séricos de proteína C reactiva, tal como se observó en este análisis de 106 mujeres con sobrepeso u obesas, lo que indica que una fagocitosis elevada de granulocitos y monocitos en sujetos en reposo podría ser indicativa de inflamación sistémica. Una vez dominada, esta técnica puede completarse para aproximadamente 30 muestras en siete horas si se realiza adecuadamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar enfriar completamente las muestras antes de añadir las bacterias, con el fin de minimizar cualquier variabilidad inexplicada entre muestras.Tras seguir este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la cuantificación de citoquinas, para determinar el efecto de su intervención sobre la respuesta inflamatoria. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la inmunología exploraran los efectos de una variedad de cambios en el estilo de vida y la función inmune innata en humanos. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo medir la fagocitosis y la actividad del estallido oxidativo de granulocitos y monocitos mediante citometría de flujo.No olvide que trabajar con sangre humana puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones, como usar el EPP adecuado, al realizar este procedimiento.

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Inmunología e Infección

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Medición cuantitativa por citometría de flujo de la fagocitosis de esporas fúngicas por fagocitos humanos

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Este trabajo describe un protocolo estandarizado in vitro para cuantificar y comparar las tasas de fagocitosis de glóbulos rojos xenogénicos (humanos) y alogénicos (rata) por macrófagos de rata aislados.

Una evaluación cuantitativa de la fagocitosis de eritrocitos alogénicos y xenogénicos por macrófagos de rata in vitro

Aprende a medir la fagocitosis de granulocitos y monocitos y la actividad de explosión oxidativa en sangre humana mediante citometría de flujo. Esta técnica sencilla permite evaluar la función inmune innata en estudios de ejercicio y nutrición.

La medición de granulocitos y de monocitos fagocitosis y la actividad de la explosión oxidativa en la sangre humana

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