Detección Molecular rápida y diferenciación de virus gripales A y B
30 de enero de 2017
Se describe un ensayo rápido, a base de molecular Influenza A y B. El ensayo detecta la influenza cada objetivo en los 15 minutos mediante el empleo de amplificación isotérmica con cebadores específicos de la influenza, seguido de la detección de objetivos con sondas de baliza molecular. El ensayo de la gripe A y B es fácil de usar y requiere práctica en un mínimo de tiempo para llevar a cabo.
El objetivo general de este ensayo es diagnosticar o descartar la infección por el virus de la influenza en pacientes que presentan sistemas respiratorios. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del diagnóstico clínico, como el diagnóstico de las causas clave de las infecciones respiratorias. La principal ventaja de esta técnica es que es un método rápido que se puede utilizar en el entorno de la atención designada.
La demostración del procedimiento estará a cargo de Sam Kaplan, un técnico de nuestro laboratorio. Para recolectar una muestra de hisopo nasal, inserte el hisopo en la fosa nasal que tiene el drenaje más visible o que está más congestionado. Con una rotación suave, empuje el hisopo dentro de la fosa nasal hasta que se encuentre resistencia y gire varias veces contra la pared nasal antes de retirarlo lentamente de la fosa nasal.
Posteriormente, almacene el hisopo y transpórtelo en un vial que contenga tres mililitros de medio de transporte viral. A continuación, lleve la muestra y el receptor de muestra azul a temperatura ambiente antes de la prueba. La base de prueba naranja se puede probar sin necesidad de calentarla a temperatura ambiente.
Deje todas las piezas de prueba en el papel de aluminio hasta inmediatamente antes de usarlas. Luego encienda el instrumento, ingrese el ID de usuario y presione OK.To comenzar el proceso de prueba, toque Ejecutar prueba en la pantalla del instrumento. A continuación, introduzca el ID del paciente utilizando el teclado en pantalla o el escáner de código de barras y pulse OK. Después de eso, abra la tapa e inserte el tubo de la base de prueba naranja en el soporte de la base de prueba naranja.
Confirme que se muestra la prueba correcta en la pantalla y presione OK. A continuación, inserte el receptor de muestra azul en el soporte del receptor de muestra azul y espere a que el receptor de muestra se caliente. A continuación, retire el precinto de aluminio colocando dos dedos en el borde del receptor de muestras para asegurarse de que permanezca en su lugar. A continuación, coloque el hisopo del paciente que se va a analizar en el receptor de la muestra.
Mezcle vigorosamente el hisopo y el líquido durante 10 segundos y presione la cabeza del hisopo contra el costado del receptor de la muestra para ayudar a desalojar la muestra del hisopo. Si los hisopos de prueba se almacenan en un medio de transporte viral, agite el medio de transporte viral durante 10 segundos y agregue 200 microlitros al receptor de la muestra. A continuación, pulse OK para continuar.
Después de eso, presione el cartucho de transferencia blanco en el receptor de muestras azul. Continúe presionando el receptor de muestra hasta que suba el indicador naranja. A continuación, levante y conecte el cartucho de transferencia a la base de prueba.
El indicador naranja debe descender una vez que la transferencia del cartucho esté colocada correctamente. Cierre la tapa y no la abra hasta que aparezca la pantalla de resultados. Ahora toque Ejecutar prueba de control de calidad en la pantalla de inicio.
Seleccione la prueba de control de calidad que se va a ejecutar. A continuación, confirme el tipo de prueba para que coincida con la muestra de control de calidad prevista para la prueba haciendo clic en Aceptar y siguiendo las indicaciones en pantalla para completar la prueba. Una vez finalizada la prueba, observe los resultados de la prueba que se muestran en la pantalla con interpretaciones para la presencia de influenza A, B o subtipos desconocidos y repita la prueba para ver si los resultados no son válidos.
Después de eso, limpie el instrumento y el área circundante del banco con una solución de etanol al 70% o lejía al 10%. Esta figura muestra los valores promedio de TC determinados por el ensayo RP para las muestras positivas y negativas para cada subtipo de influenza. Los resultados demuestran que las muestras falsas negativas determinadas por el ensayo de influenza A y B se debieron a muestras de baja carga viral.
Una vez dominada, esta técnica se puede realizar en 15 minutos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar que al configurar inicialmente el ensayo, el cartucho de transferencia debe estar conectado a la base de prueba hasta que encajen en su lugar. Si estas dos piezas no están aseguradas correctamente, la ejecución fallará y deberá repetirse desde el principio.
Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo realizar este ensayo de diagnóstico para la influenza. No olvide que trabajar con muestras de pacientes potencialmente infectados con influenza puede ser extremadamente peligroso y siempre se deben tomar precauciones, como el uso de equipo de protección personal adecuado, al realizar este procedimiento.
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Descripción general
Este artículo describe un ensayo rápido basado en métodos moleculares para detectar los virus de la influenza A y B. El ensayo utiliza amplificación isotérmica y sondas moleculares tipo baliza, lo que permite obtener resultados en solo 15 minutos.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Diagnóstico clínico
- Biología molecular
- Enfermedades infecciosas
Antecedentes
- Los virus de la influenza son causas importantes de infecciones respiratorias.
- El diagnóstico rápido es crucial para una gestión eficaz del paciente.
- Los métodos actuales pueden requerir tiempos de procesamiento más largos.
- Este ensayo tiene como objetivo proporcionar resultados rápidos en un formato fácil de usar.
Objetivo del estudio
- Desarrollar un ensayo rápido para diagnosticar infecciones por el virus de la influenza.
- Mejorar la eficiencia de los diagnósticos clínicos en enfermedades respiratorias.
- Facilitar decisiones oportunas de tratamiento en entornos sanitarios.
Métodos Utilizados
- Amplificación isotérmica con cebadores específicos para la influenza.
- Detección de los objetivos mediante sondas de baliza molecular.
- Recolección de muestras mediante hisopo nasal.
- Se requiere un tiempo mínimo de manipulación para el ensayo.
Resultados principales
- El ensayo proporciona resultados en 15 minutos.
- Procedimiento fácil de usar, adecuado para entornos clínicos.
- Detecta eficazmente ambos virus de la influenza A y B.
- Mostrado por un técnico de laboratorio.
Conclusiones
- El ensayo es una herramienta rápida y eficiente para el diagnóstico de la influenza.
- Puede mejorar significativamente la atención al paciente en infecciones respiratorias.
- Estudios futuros podrían ampliar su aplicación en diagnósticos clínicos.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
La detección molecular rápida de virus de la influenza apoya la toma temprana de decisiones diagnósticas en el manejo de enfermedades respiratorias. El tiempo de respuesta del ensayo de 15 minutos permite una triage oportuna en entornos de atención inmediata, reduciendo la latencia diagnóstica. Esta capacidad ayuda a reducir los riesgos en la fase inicial del desarrollo de antivirales al proporcionar datos confiables sobre el estado de infección.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Valor científico: Permite confirmar el estado de infección por influenza en modelos preclínicos, apoyando estudios de validación de objetivos.
- Valor operativo: Proporciona un resultado rápido en un sistema cerrado que reduce el tiempo de manipulación y el riesgo de contaminación.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Valor científico: Genera señales de detección cuantitativas mediante sondas de baliza molecular para la optimización del ensayo.
- Valor operativo: Proporciona resultados reproducibles en especímenes nasofaríngeos congelados y archivados, lo que respalda la robustez del ensayo.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Valor científico: Facilita el monitoreo longitudinal de la carga viral en sistemas relevantes para la enfermedad, ayudando a reducir los riesgos mecanicistas.
- Valor operativo: Permite la alineación entre equipos de virología y toxicología mediante resultados estandarizados.
Integración de la tubería y flujo de trabajo
El ensayo se integra en los flujos de trabajo de descubrimiento temprano donde se requiere una confirmación rápida del estado de infección antes de avanzar hacia la optimización del fármaco líder.
- Biología del Descubrimiento: Apoya la comprobación de hipótesis al distinguir la infección por influenza A y B en cohortes experimentales.
- Detección: Permite la preparación de muestras biológicas estandarizadas para ensayos antivirales posteriores.
- Análisis: Proporciona resultados cualitativos y semicuantitativos que ayudan a comparar la eficacia antiviral en distintas condiciones.
- Investigación Traducional: Conecta la detección temprana de infecciones con la continuidad preclínica mediante una detección viral constante.
- Reutilización Empresarial: Representa un módulo diagnóstico reutilizable para estudios de virus respiratorios en múltiples proyectos.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Reduce la ambigüedad mecanicista en los modelos de infección al proporcionar una diferenciación clara entre subtipos de influenza.
- Valor operativo: Asegura la estandarización y reproducibilidad mediante un funcionamiento sin pipetas y en sistema cerrado.
- Valor estratégico: Mejora las decisiones de avance o interrupción en programas antivirales al permitir una confirmación rápida de la infección.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo de compuestos basándose en datos oportunos de interacción con el blanco.
Consideraciones de Implementación
- Requiere capacitación en la recolección de hisopados nasofaríngeos y manejo de muestras en medio de transporte viral.
- Depende del mantenimiento del instrumento y de la estabilidad de los reactivos para un rendimiento constante.
- Necesita la alineación de protocolos entre equipos para el seguimiento de muestras y la interpretación de resultados.
- Debe tener en cuenta la sensibilidad reducida en muestras con baja carga viral, como se ha observado en comparaciones con especímenes congelados.
- Se beneficia de controles ambientales para prevenir la contaminación por amplicones en entornos de alto rendimiento.
