Name: En vitro y en modelos in vivo para estudiar la transición del endotelio corneal-mesenquimal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 5 s
Description: Aprende los métodos in vitro e in vivo para estudiar la transición endotelial-mesenquimal corneal usando cultivos de células bovinas y un modelo de criolesión en rata. Esta técnica facilita el desarrollo de terapias para enfermedades corneales.

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Agradecemos al personal del Segundo Laboratorio Central, Departamento de Investigación Médica, Hospital Universitario Nacional de Taiwán por su apoyo técnico.

Todos los procedimientos seguidos en este estudio estaba de acuerdo con la Asociación para la Investigación en Visión y Oftalmología para el Uso de Animales en Investigación Oftálmica y Visión y fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales institucional del Hospital de la Universidad Nacional de Taiwán. 1. Aislamiento, cultivo primario de preparación, y la inmunotinción de bovino CEC <ol><li> Adquirir nuevos ojos bovinos de un matadero local. </li><li> Desinfectar los ojos en una solución de povidona yodada al 10% w / v durante 3 min. Lavarlas con la solución salina (PBS) tamponada con fosfato. </li><li> Se recoge el botón corneal con un escalpelo y tijeras en condiciones estériles. membrana de la cáscara de la de Descemet con pinzas bajo un microscopio de disección (tenga en cuenta que en este estudio, los ojos bovinos fueron enucleados por un matadero local, por lo tanto, el primer procedimiento del estudio fue la desinfección de los ojos preenucleated en el laboratorio). </li><li> Incubar la membrana de Descemet en 1 ml de trypsin a 37 ° C durante 30 min. Recoge los países de Europa central bovina por centrifugación a 112 xg durante 5 min. Resuspender las células en 1 ml de medio suplementado epitelial hormonal (SHEM) que contiene volúmenes iguales de HEPES-tamponada medio de Dulbecco modificado de Eagle y medio F12 de Ham, suplementado con suero bovino fetal al 5%, 0,5% de sulfóxido de dimetilo, 2 ng / ml de la epidermis humana factor de crecimiento, 5 mg / ml de insulina, 5 mg / ml de transferrina, 5 ng / ml de selenio, 1 nmol / l de la toxina del cólera, 50 mg / ml de gentamicina y 1,25 mg / ml de anfotericina B. </li><li> Sembrar las células (aproximadamente 1 x 10 5 células por ojo) en una placa de 6 cm. Cultura en el Shem. Incubar la placa a 37 ° C en una atmósfera de 5% de CO2 en aire. Cambiar el medio de cultivo cada 3 días. </li><li> Cuando las células alcanzan la confluencia, lavarlos con PBS y se incuban en 1 ml de tripsina a 37 ° C durante 5 min. Recójalas por centrifugación a 112 xg durante 5 min. Vuelva a suspender el sedimento celular en 1 ml de la SHEM. <ol&gt; <li> Contar las células en un hemocitómetro. Sembrar las células en los portaobjetos de cubierta en una densidad de 1 x 10 4 por pocillo en una placa de 24 pocillos, y cultivar las células en la SHEM. Para investigar el efecto de supresión de EnMT marimastat, se incuban las células en SHEM con 10 M de marimastat añadieron al medio de cultivo, y cambiar el medio de cultivo cada 3 días. </li></ol></li><li> Fijar las células en un punto de tiempo indicado con 250 l de paraformaldehído al 4%, pH 7,4, durante 30 minutos a temperatura ambiente. Permeabilizar con 250 l de 0,5% de Triton X-100 para 5 min. Bloque con 10% de albúmina de suero bovino durante 30 min. </li><li> Se incuban las células con anticuerpos primarios contra activa beta-catenina (ABC), caracoles, babosas y una noche a 4 ° C. La dilución de los anticuerpos primarios utilizados es 1: 200. Los anticuerpos se diluyeron en diluyente de anticuerpo compuesto por PBS 10 mM, 1% w / v albúmina de suero bovino, y 0,09% w / v de azida de sodio. </li><li> Lavar las células dos veces con PBS durante 15 min, y se incuba lam con el anticuerpo conjugado con Alexa Fluor-secundario (1: 100 en diluyente de anticuerpo) a temperatura ambiente durante 1 hr. </li><li> Contratinción el núcleo de la célula, cubriendo las células con 2 mg / ml de 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindol, se lavan las células dos veces con PBS durante 15 min, y montarlos con solución de montaje anti-decoloración. </li><li> Obtener imágenes de inmunofluorescencia en las longitudes de onda de excitación de 405 y 488 nm mediante el uso de un microscopio confocal de barrido láser con 20X aumento del objetivo. </li></ol> 2. Modelo de rata de la córnea del endotelio lesión criogénica y intracameral Inyección <ol><li> Anestesie 12 semanas de edad ratas Sprague-Dawley macho con inyecciones intramusculares de 2% de xilazina (5,6 mg / kg) y tiletamina más zolazepam (18 mg / kg). pellizcar suavemente la piel de los animales para confirmar la anestesia adecuada en ausencia de contracciones de la piel. </li><li> Inculcar una gota de clorhidrato de proparacaína 0,5% en el ojo derecho de cada rata para minimizar el dolor ojo y el reflejo de parpadeo. Instilartetraciclina pomada para el ojo izquierdo para evitar la sequedad de la córnea. </li><li> Se enfría una sonda de acero inoxidable (diámetro = 3 mm) en nitrógeno líquido. Aplicar la sonda de acero inoxidable a la córnea central del ojo derecho durante 30 segundos. inculcar frecuentes PBS para el ojo derecho durante el procedimiento para evitar la sequedad de la córnea. </li><li> Inculcar 0,1% atropina y 0,3% de sulfato de gentamicina inmediatamente después de criolesión y una vez al día para aliviar el dolor ocular resultante de espasmo ciliar y para prevenir la infección. <ol><li> Después del procedimiento, mantienen las ratas caliente usando una lámpara de calor, y observar su recuperación cada 15 minutos después de la anestesia hasta recuperar el control del motor. Además, aplique una pomada de tetraciclina en el ojo derecho para evitar la sequedad de la córnea durante el período de recuperación. </li></ol></li><li> Repetir la lesión criogénica de la córnea durante 3 días consecutivos. </li><li> Para la entrega de marimastat o bFGF en la cámara anterior de los ojos de rata, anestesiar las ratas como se describió anteriormente. Inculcar una gotade clorhidrato de proparacaına 0,5% en el ojo derecho para minimizar el dolor de los ojos y el reflejo de parpadeo. </li><li> El riego de la superficie ocular con PBS estéril. Realizar paracentesis de la cámara anterior con un microscopio de operación mediante la inserción de una aguja 30 G unida a una jeringa de 1 ml en la córnea clara paralimbales en un plano por encima y paralelo al iris. </li><li> Girar la aguja de bisel hacia arriba y presione ligeramente la herida corneal para drenar un poco de humor acuoso y reducir la presión intraocular. Inyectar 0,02 ml de la droga intracameral. comprimir suavemente el trayecto de la aguja con una punta de algodón durante la retirada de la aguja. </li><li> Fotografiar la parte externa del ojo en un punto de tiempo indicado bajo el microscopio quirúrgico. </li></ol> 3. Explotación del Rat botón corneal y Inmunoticción <ol><li> Para practicar la eutanasia a las ratas, los coloca en una cámara de la eutanasia y de infundir 100% de CO 2 a una velocidad de llenado del 10-30% del volumen de la cámara por minuto. Mantener CO 2 de infusión para unaminuto adicional después de falta de respiración y color de los ojos se desvaneció. </li><li> Penetrar en el ojo de la rata en el limbo con una cuchilla afilada. Cortar las córneas con tijeras corneales a lo largo del limbo. Aplanar las córneas en una diapositiva. Hacer incisiones radiales adicionales si las córneas se encogen. </li><li> Fijar las córneas con 250 l de paraformaldehído al 4%, pH 7,4, durante 30 minutos a temperatura ambiente. Permeabilizar con 250 l de 0,5% de Triton X-100 durante 5 min, y se bloquea con 10% de albúmina de suero bovino durante 30 min. </li><li> Incubar las córneas con anticuerpos primarios contra ABC durante la noche a 4 ° C con una dilución de 1: 200 en diluyente de anticuerpo. Lavar las córneas dos veces con PBS durante 15 min, y se incuba con el anticuerpo secundario (1: 100 en diluyente de anticuerpo) a temperatura ambiente durante 1 hr. Contratinción el núcleo de la célula, cubriendo las células con 2 mg / ml de 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindol, y lavar las células dos veces con PBS durante 15 min. </li><li> Montar las córneas en la solución de montaje protectora de la fluorescencia. Transmisión exteriorner las imágenes de inmunofluorescencia en longitudes de onda de excitación de 405 nm y 561 con un microscopio confocal de barrido láser de 20 aumentos objetivo. </li></ol>

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Los autores no tienen intereses financieros contrapuestos que declarar.

CECs son conocidos por su propensión a sufrir EnMT durante la proliferación celular. Para desarrollar estrategias para suprimir el proceso EnMT con fines terapéuticos, es necesario un conocimiento profundo del mecanismo EnMT. Describimos 2 modelos para investigar EnMT, a saber, la CCA bovina en el modelo de cultivo in vitro y la rata modelo de lesión criogénica endotelio corneal. Nuestros resultados demuestran el proceso EnMT en ambos modelos. Además, el efecto de supresión de EnMT de marimast...

Las células endoteliales corneales (CECs) desempeñan un papel vital en el mantenimiento de la claridad corneal y, por lo tanto, de la agudeza visual al regular el estado de hidratación del estroma corneal a través de un bombeo activo1. Debido al limitado potencial proliferativo de las CEC humanas, el número de células disminuye con la edad, y la reparación de las heridas endoteliales corneales después de una lesión generalmente se logra a través del agrandamiento y la migración celular, en lugar de la mitosis celular2. Cuando el recuento de CIC disminuye por debajo de un umbral de aproximadamente 500 células/mm2, el estado de deshidratación del estroma corneal no puede mantenerse, lo que conduce a queratopatía ampollosa y deterioro de la visión3,4.
El limitado potencial proliferativo de las CECs humanas se ha atribuido a varios factores, incluyendo la reducción de la expresión del factor de crecimiento epidérmico y su receptor en las células envejecidas5, el TGFβ2 antiproliferativo en el humor acuoso6 y la inhibición de contacto2,7. Aunque algunos factores de crecimiento, como el factor de crecimiento básico de fibroblastos (bFGF), pueden aumentar la proliferación en un endotelio corneal humano cultivado, la eficiencia del cultivo sigue siendo limitada8,9. Además, las CECs pueden sufrir un cambio fenotípico durante la expansión ex vivo, parecido a la transición epitelio-mesenquimal (EMT)10-13. La transición endotelio-mesenquimal (EnMT) se caracteriza por desestabilización de la unión celular, pérdida de polaridad apical-basal, reordenamiento del citoesqueleto, expresión de actina del músculo liso alfa y secreción de colágeno tipo I14. Todas estas características pueden anular la función normal de las CECs, dificultando el uso de CECs cultivadas ex vivo en la ingeniería de tejidos. Además, la EnMT se ha asociado con la patogénesis de varias enfermedades endoteliales corneales, incluyendo la distrofia corneal endotelial de Fuchs y la formación de membrana retrocorneal15,16. Por lo tanto, la comprensión del mecanismo de EnMT puede ayudar a manipular el proceso de EnMT y facilitar la regeneración de las CEC para permitir una función competente. 
En este estudio, describimos un método para aislar las CEC bovinas del botón corneal. En el cultivo primario in vitro, se observó el proceso de EnMT, incluyendo un cambio fenotípico, la translocación nuclear de β-catenina y los reguladores de EMT caracol y. Además, describimos un método para demostrar EnMT in vivo mediante el uso de un modelo de criolesión del endotelio corneal de rata. Usando estos 2 modelos, demostramos que marimastat, un inhibidor de la metaloproteinasa de matriz (MMP) de amplio espectro, puede suprimir el proceso de EnMT. Los protocolos descritos facilitan el análisis detallado del mecanismo de EnMT y el desarrollo de estrategias para manipular el proceso de EnMT para su posterior aplicación clínica.

<table><tbody><tr><td>tripsina</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12604-013</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s medio Eagle modificado y medio F12 de</td><td>Ham ThermoFisher Scientific</td><td>11330</td><td></td></tr><tr><td>suero fetal bovino</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>dimetilsulfóxido</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>factor de crecimiento epidérmico humano</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PHG0311</td><td></td></tr><tr><td>insulina, transferrina, selenio&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>toxina del cólera</td><td>Sigma</td><td>C8052-1MG</td><td></td></tr><tr><td>gentamicina</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15750-060</td><td></td></tr><tr><td>anfotericina B</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15290-026</td><td></td></tr><tr><td>paraformaldehído</td><td>Microscopía electrónica Ciencias 111219</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>albúmina sérica bovina</td><td>Sigma</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>marimastat</td><td>Sigma</td><td>M2699-25MG</td><td></td></tr><tr><td>anticuerpo anti-catenina antiactivo</td><td>Millpore</td><td>05-665</td><td></td></tr><tr><td>anti-caracol</td><td>Santa cruz</td><td>sc28199</td><td></td></tr><tr><td>anti-</td><td>santa cruz</td><td>sc15391</td><td></td></tr> cabra <tr><td>anti-ratón IgG (H+L) secundaria anticuerpo</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>para la tinción del ABC de las CEC bovinas</td></tr><tr><td>anticuerpo secundario IgG (H+L) anti-ratón</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11003</td><td>para la tinción del ABC del endotelio corneal de rata</td></tr><tr><td>anti-conejo anti-conejo anticuerpo secundario</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>para la tinción de caracoles y de CECs bovinos</td></tr><tr><td>diluyente de anticuerpos</td><td>Genemed Biotechnologies</td><td>10-0001</td><td></td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-fenilindol</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>medio de montaje</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>microscopio confocal de barrido láser</td><td>ZEISS</td><td>LSM510</td><td></td></tr><tr><td>xilacina&nbsp;</td><td>Bayer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>tiletamina más zolazepam</td><td>Virbac</td><td>N/A medicamento</td><td>veterinario</td></tr><tr><td>clorhidrato de proparacaína solución oftálmica</td><td>Alcon</td><td>N/A</td><td>medicamento veterinario</td></tr><tr><td>0.1% atropina</td><td>Wu-Fu Laboratories Co., Ltd</td><td>N/A</td><td>medicamento clínico&nbsp;</td></tr><tr><td>0,3% gentamicina sulfato</td><td>Sinphar Group</td><td>N/A</td><td>fármaco clínico&nbsp;</td></tr><tr><td>factor de crecimiento básico de fibroblastos</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>PHG0024</td><td>fármaco clínico&nbsp;</td></tr></tbody></table>

en vitro y en modelos in vivo para estudiar la transición del endotelio corneal-mesenquimal

In Vitro and In Vivo Models to Study Corneal Endothelial-mesenchymal Transition

Las células endoteliales de la córnea (CECs) desempeñan un papel crucial en el mantenimiento de la claridad corneal a través del bombeo activo. Un recuento reducido de CEC puede provocar edema corneal y disminución de la agudeza visual. Sin embargo, los CECs humanos son propensos a comprometer su potencial proliferativo. Además, la estimulación del crecimiento celular a menudo se complica por la transición gradual endotelio-mesenquimal (EnMT). Por lo tanto, es necesario comprender el mecanismo de la EnMT para facilitar la regeneración de las CEC con una función competente. En este estudio, preparamos un cultivo primario de CECs bovinas pelando las CECs con la membrana de Descemet del botón corneal y demostramos que las CECs bovinas exhibieron el proceso EnMT, incluyendo cambio fenotípico, translocación nuclear de β-catenina y reguladores de EMT caracol y, en el cultivo in vitro. Además, utilizamos un modelo de criolesión del endotelio corneal de rata para demostrar el proceso de EnMT in vivo. En conjunto, el cultivo primario in vitro de CECs bovinas y los modelos de criolesión del endotelio corneal de rata in vivo ofrecen plataformas útiles para investigar el mecanismo de la EnMT.

Después del aislamiento de CECs de la especie bovina, las células se cultivaron in vitro. La Figura 1 presenta las imágenes de contraste de fase de los países de Europa central de la especie bovina. La forma hexagonal de las células en confluencia indica que las células no estaban contaminadas por los fibroblastos del estroma corneal durante el aislamiento celular. Figura 2 representa la inmunotinción que se realizó utilizando anticuerpos contra...

Un cultivo primario de células endoteliales corneales bovinas se utilizó para investigar el mecanismo de la transición endotelial-mesenquimal corneal. Además, se utilizó un modelo de endotelio corneal criolesión rata para demostrar transición endotelial-mesenquimal corneal in vivo.

En vitro y en modelos in vivo para estudiar la transición del endotelio corneal-mesenquimal

Corneal endothelial cells (CECs) play a crucial role in maintaining corneal clarity through active pumping. A reduced CEC count may lead to corneal edema ...

El objetivo general de este procedimiento es investigar el mecanismo de la transición mesenquimatosa del endotelio corneal in vitro e in vivo. Este método puede ayudar a responder preguntas sobre la transición mesenquimatosa del endotelio corneal en el campo de la regeneración del endotelio corneal. La ventaja de esta técnica es que puede aplicarse tanto a modelos in vitro como in vivo.Y es fácil de manipular. Las implicaciones de esta técnica tienden hacia la terapia de enfermedades relacionadas con la transición mesenquimal endotelial corneal. Como la formación, porque los modelos pueden utilizarse para seleccionar aquellos que inhiben el proceso de transición mesenquimal endotelial corneal.El procedimiento lo realizará Jung-Shen Chang, una técnica de un laboratorio. Para comenzar este procedimiento, desinfecte ojos bovinos frescos en una solución de povidona-yodo al 10% peso por volumen durante tres minutos. Luego, lávenlos con PBS.Recolecte el botón corneal con un escalpelo y tijeras y lávelo con PBS. Bajo un microscopio estereoscópico, desprenda la membrana de Descemet con pinzas. A continuación, incube la membrana de Descemet en un mililitro de tripsina a 37 grados Celsius durante 30 minutos. Luego, recoja las CEC bovinas mediante centrifugación a 112 veces g durante cinco minutos.Después de la centrifugación, re-suspenda las células en un mililitro de SHEM. Siembre las células en un plato de seis centímetros y cultívelas en SHEM. Posteriormente, incube las células a 37 grados Celsius en 5%CO2 y cambie el medio de cultivo cada tres días.Cuando las células alcancen confluencia, lávese con PBS. A continuación, incúbese en un milímetro de tripsina a 37 grados Celsius durante cinco minutos. Recójanse por centrifugación a 112 veces g durante cinco minutos.Después de cinco minutos, volver a suspender el sedimento celular en un milímetro de SHEM. A continuación, contar las células en un hemocitómetro. Después de eso, sembrar las células en cubreobjetos en una placa de 24 pocillos y cultivar las células en SHEM.Para investigar el efecto supresor del Maramastat sobre la ENMT, incube las células en SHEM con 10 micromolar de Maramastat en el medio de cultivo y cambie el medio de cultivo cada tres días. Luego, fije las células en un punto de tiempo indicado con 250 microlitros de paraformaldehído al 4% durante 30 minutos a temperatura ambiente. Posteriormente, permeabilícelas con 250 microlitros de Triton X-100 al 0,5% durante cinco minutos.Y bloquéelos con BSA al 10 % durante 30 minutos. Posteriormente, incube las células con anticuerpos primarios contra ABC, snail y slug durante la noche a cuatro grados Celsius. Al día siguiente, lave las células dos veces con PBS durante 15 minutos cada vez.Y incubarlos con el anticuerpo secundario conjugado con Alexa Fluor a temperatura ambiente durante una hora. Después, contratiñir el núcleo celular cubriendo las células con DAPI a dos microgramos por mililitro. Lavar las células dos veces con PBS durante 15 minutos cada vez.Y monte las muestras con una solución de montaje antidesvanecimiento antes de obtener las imágenes de inmunofluorescencia. Después de anestesiar una rata SD macho de 12 semanas de edad, pellizque suavemente la piel del animal para confirmar una anestesia adecuada en ausencia de contracciones cutáneas. Luego, aplique una gota de hidrocloruro de proparacaína al 0,5 % en el ojo derecho de la rata para minimizar el dolor y el reflejo de parpadeo.Posteriormente, aplique pomada de tetraciclina en el ojo izquierdo para prevenir la sequedad corneal. A continuación, enfríe una sonda de acero inoxidable en nitrógeno líquido. Aplique la sonda de acero inoxidable en la cornea central del ojo derecho durante 30 segundos.Instile con frecuencia PBS en el ojo derecho durante el procedimiento para prevenir la sequedad corneal y aplique 0.1% Atropina y 0.3% Sulfato de Gentamicina inmediatamente después de la criolesión una vez al día para aliviar el dolor ocular resultante del espasmo ciliar y prevenir infecciones. Después del procedimiento, mantenga al ratón caliente utilizando una lámpara de calor y observe su recuperación hasta que recupere el control motor. Aplique pomada de Tetraciclina en el ojo derecho para prevenir la sequedad corneal durante el período de recuperación y repita el procedimiento de criolesión corneal durante tres días consecutivos.Para administrar Maramastat o FGF básico en la cámara interior de los ojos de rata, aplique una gota de clorhidrato de proparacaína al 0,5 % en el ojo derecho de la rata anestesiada para minimizar el dolor y el reflejo de parpadeo. A continuación, irriague la superficie ocular con PBS estéril. Bajo un microscopio operatorio, realice una paracentesis de la cámara anterior insertando una aguja de calibre 30 conectada a una jeringa de un mililitro en la córnea clara paralimbial, en un plano por encima y paralelo al iris. Luego, gire la bisel de la aguja hacia arriba y deprese ligeramente la herida corneal para drenar algo de humor acuoso y reducir la presión intraocular.Inyecte 0,02 mililitros del fármaco por vía intracameral y comprima suavemente el trayecto de la aguja con la punta de un algodón durante la retirada de la aguja. Esta figura muestra las imágenes de contraste de fase de las CEC bovinas y sus cultivos. La forma hexagonal de las células en estado de confluencia indica que las células no están contaminadas por fibroblastos del estroma corneal durante el aislamiento celular.Durante el cultivo in vitro de CEC bovinos, se detectó la translocación nuclear de ABC, snail y slug hasta el día 14. Esta figura ilustra el efecto de Maramastat, un inhibidor amplio de MMP, sobre el proceso de ENMT en los CEC bovinos cultivados in vitro. Aquí se muestran fotografías del ojo externo de ratas tras una criolesión, seguida de inyección intracameral.Las fotografías muestran una reducción del edema corneal tras la inyección de FGF básico. Mientras que la marimastat redujo aún más el edema corneal en comparación con el FGF básico solo. Y esta figura muestra la inmunotinción del botón corneal de rata utilizando un anticuerpo contra ABC tras una criolesión seguida de inyección intracameral.Se observa la translocación nuclear de ABC en el grupo PBS y aumenta significativamente en el grupo de FGF básico, lo que indica la activación de la señalización de Wnt Beta-catenina y del proceso de ENMT. Tras la inyección intracameral de FGF básico seguida de Maramastat, la tinción nuclear de ABC se reduce, lo que sugiere el efecto inhibidor de Maramastat sobre la ENMT. Tras su desarrollo, esta técnica allana el camino para los investigadores en el campo de la Transición Mesenquimal Endotelial Corneal, In Vitro y la In Vivo.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo aislar células endoteliales corneales bovinas y realizar una criolesión corneal, así como una inyección intracameral.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

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