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JoVE Journal Genetics
Genetic Manipulation of the Plant Pathogen Ustilago maydis to Study Fungal Biology and Plant Microbe Interactions

La manipulación genética del patógeno de la planta Ustilago maydis Estudiar biología de hongos y plantas Microbe Interactions

Full Text
15,166 Views
11:42 min
September 30, 2016

DOI: 10.3791/54522-v

Kristin Bösch*1,2, Lamprinos Frantzeskakis*1, Miroslav Vraneš3, Jörg Kämper3, Kerstin Schipper1,2, Vera Göhre1,2,4

1Institute for Microbiology,Heinrich-Heine University Düsseldorf, 2Bioeconomy Science Center (BioSC), 3Department of Genetics, Institute of Applied Biosciences,Karlsruhe Institute of Technology, 4Cluster of Excellence in Plant Sciences (CEPLAS),Heinrich-Heine University Düsseldorf

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This protocol describes a gene replacement strategy for genetically manipulating the smut fungus Ustilago maydis. It allows for the generation of deletion mutants to study infection phenotypes and can be adapted for various genetic modifications.

Key Study Components

Area of Science

  • Genetic engineering
  • Microbiology
  • Fungal pathogenesis

Background

  • Ustilago maydis is a model organism for studying fungal infections.
  • Gene modification techniques are essential for functional characterization.
  • Precise verification of genetic modifications is crucial for linking phenotypes to specific genes.
  • Visual demonstrations enhance understanding of critical steps in the protocol.

Purpose of Study

  • To develop a reliable method for genetic manipulation of Ustilago maydis.
  • To facilitate the investigation of gene functions and their roles in infection.
  • To provide a framework for creating various genetic constructs.

Methods Used

  • Gene deletion and modification techniques.
  • Protoplasting for transformation.
  • Verification of genetic changes through phenotypic analysis.
  • Use of fluorescent protein tags for visualization.

Main Results

  • Successful generation of deletion mutants.
  • Demonstrated ability to link genetic modifications to specific phenotypes.
  • Visual confirmation of successful transformations.
  • Adaptability of the method for various genetic modifications.

Conclusions

  • The gene replacement strategy is effective for studying Ustilago maydis.
  • This method enhances the understanding of fungal pathogenesis.
  • Future applications could extend to other fungal species.

Frequently Asked Questions

What is Ustilago maydis?
Ustilago maydis is a smut fungus used as a model organism in genetic studies.
How does the gene replacement strategy work?
It involves generating deletion mutants to study the effects of specific gene modifications.
What are the advantages of this method?
The method allows precise verification of modifications and direct links to phenotypes.
What is protoplasting?
Protoplasting is a technique used to create competent cells for transformation.
Can this method be applied to other fungi?
Yes, the protocol can be adapted for genetic modifications in other fungal species.

Se describe una sólida estrategia de sustitución de genes para manipular genéticamente el hongo Ustilago maydis carbón. Este protocolo explica cómo generar mutantes de deleción para investigar fenotipos de infección. Se puede extender para modificar genes de cualquier manera deseada, por ejemplo, mediante la adición de una secuencia que codifica un marcador de proteína fluorescente.

El objetivo general de este protocolo es modificar genéticamente el hongo del carbón, ustilago maydis. Este método de generación de cepas permite la caracterización funcional de genes de diversas maneras. Por ejemplo, podemos eliminar los genes, podemos intercambiar los promotus, o podemos generar construcciones de fusión.

La principal ventaja de este método es que podemos verificar con precisión la modificación, de modo que cualquier fenotipo se puede relacionar directamente con el cambio en el gen de interés. La demostración visual de este método es esencial, porque saber cuándo detener la reacción protoplastiva es fundamental para una transformación exitosa. En preparación, enfríe dos tubos inferiores redondos de mililitros a menos 20 grados centígrados.

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Genética No. 115 Ustilago maydis La ingeniería genética supresión mutante la genética el fenotipo mutante recombinación homóloga hongos modelo de carbón patógenos de plantas la verificación de la tensión inversa

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