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DOI: 10.3791/54522-v
Kristin Bösch*1,2, Lamprinos Frantzeskakis*1, Miroslav Vraneš3, Jörg Kämper3, Kerstin Schipper1,2, Vera Göhre1,2,4
1Institute for Microbiology,Heinrich-Heine University Düsseldorf, 2Bioeconomy Science Center (BioSC), 3Department of Genetics, Institute of Applied Biosciences,Karlsruhe Institute of Technology, 4Cluster of Excellence in Plant Sciences (CEPLAS),Heinrich-Heine University Düsseldorf
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This protocol describes a gene replacement strategy for genetically manipulating the smut fungus Ustilago maydis. It allows for the generation of deletion mutants to study infection phenotypes and can be adapted for various genetic modifications.
Se describe una sólida estrategia de sustitución de genes para manipular genéticamente el hongo Ustilago maydis carbón. Este protocolo explica cómo generar mutantes de deleción para investigar fenotipos de infección. Se puede extender para modificar genes de cualquier manera deseada, por ejemplo, mediante la adición de una secuencia que codifica un marcador de proteína fluorescente.
El objetivo general de este protocolo es modificar genéticamente el hongo del carbón, ustilago maydis. Este método de generación de cepas permite la caracterización funcional de genes de diversas maneras. Por ejemplo, podemos eliminar los genes, podemos intercambiar los promotus, o podemos generar construcciones de fusión.
La principal ventaja de este método es que podemos verificar con precisión la modificación, de modo que cualquier fenotipo se puede relacionar directamente con el cambio en el gen de interés. La demostración visual de este método es esencial, porque saber cuándo detener la reacción protoplastiva es fundamental para una transformación exitosa. En preparación, enfríe dos tubos inferiores redondos de mililitros a menos 20 grados centígrados.
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