Name: La infección experimental con Listeria monocytogenes Como un modelo para el estudio de host Respuestas interferón gamma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Aprende a cultivar e inocular ratones C57BL/6J con Listeria monocytogenes EGD y medir respuestas de interferón gamma en células inmunes. Este protocolo permite evaluar carga bacteriana y supervivencia.

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El desarrollo de este protocolo fue apoyado por una subvención operativa de CIHR (MOP97807) a SED.

<ol><li>Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune responses to Listeria monocytogenes.</a> Nat Rev Immunol. 4 (10), 812-823 (2004).</li>
<li>Ranson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+V+alpha+14%2B+NKT+cells+participate+in+the+early+response+to+enteric+Listeria+monocytogenes+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Invariant V alpha 14+ NKT cells participate in the early response to enteric Listeria monocytogenes infection.</a> J Immunol. 175 (2), 1137-1144 (2005).</li>
<li>Bancroft, G. J., Schreiber, R. D., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+immunity%3A+a+T-cell-independent+pathway+of+macrophage+activation%2C+defined+in+the+scid+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Rev%22%5BJournal%5D)">Natural immunity: a T-cell-independent pathway of macrophage activation, defined in the scid mouse.</a> Immunol Rev. 124, 5-24 (1991).</li>
<li>Soudja, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory-T-cell-derived+interferon-gamma+instructs+potent+innate+cell+activation+for+protective+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Memory-T-cell-derived interferon-gamma instructs potent innate cell activation for protective immunity.</a> Immunity. 40 (6), 974-988 (2014).</li>
<li>Schoenborn, J. R., Wilson, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+interferon-gamma+during+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.</a> Adv Immunol. 96, 41-101 (2007).</li>
<li>Filipe-Santos, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inborn+errors+of+IL-12%2F23-+and+IFN-gamma-mediated+immunity%3A+molecular%2C+cellular%2C+and+clinical+features%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inborn errors of IL-12/23- and IFN-gamma-mediated immunity: molecular, cellular, and clinical features.</a> Semin Immunol. 18 (6), 347-361 (2006).</li>
<li>Flynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+essential+role+for+interferon+gamma+in+resistance+to+Mycobacterium+tuberculosis+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">An essential role for interferon gamma in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection.</a> J Exp Med. 178 (6), 2249-2254 (1993).</li>
<li>Cooper, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disseminated+tuberculosis+in+interferon+gamma+gene-disrupted+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Disseminated tuberculosis in interferon gamma gene-disrupted mice.</a> J Exp Med. 178 (6), 2243-2247 (1993).</li>
<li>Dalton, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+defects+of+immune+cell+function+in+mice+with+disrupted+interferon-gamma+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes.</a> Science. 259 (5102), 1739-1742 (1993).</li>
<li>Harty, J. T., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+immunity+to+Listeria+monocytogenes+in+the+absence+of+IFN+gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific immunity to Listeria monocytogenes in the absence of IFN gamma.</a> Immunity. 3 (1), 109-117 (1995).</li>
<li>Huang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+response+in+mice+that+lack+the+interferon-gamma+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Immune response in mice that lack the interferon-gamma receptor.</a> Science. 259 (5102), 1742-1745 (1993).</li>
<li>Wang, Z. E., Reiner, S. L., Zheng, S., Dalton, D. K., Locksley, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+effector+cells+default+to+the+Th2+pathway+in+interferon+gamma-deficient+mice+infected+with+Leishmania+major%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">CD4+ effector cells default to the Th2 pathway in interferon gamma-deficient mice infected with Leishmania major.</a> J Exp Med. 179 (4), 1367-1371 (1994).</li>
<li>Hess, J., Ladel, C., Miko, D., Kaufmann, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+typhimurium+aroA-+infection+in+gene-targeted+immunodeficient+mice%3A+major+role+of+CD4%2B+TCR-alpha+beta+cells+and+IFN-gamma+in+bacterial+clearance+independent+of+intracellular+location%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Salmonella typhimurium aroA- infection in gene-targeted immunodeficient mice: major role of CD4+ TCR-alpha beta cells and IFN-gamma in bacterial clearance independent of intracellular location.</a> J Immunol. 156 (9), 3321-3326 (1996).</li>
<li>Ikeda, H., Old, L. J., Schreiber, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+IFN+gamma+in+protection+against+tumor+development+and+cancer+immunoediting%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine+Growth+Factor+Rev%22%5BJournal%5D)">The roles of IFN gamma in protection against tumor development and cancer immunoediting.</a> Cytokine Growth Factor Rev. 13 (2), 95-109 (2002).</li>
<li>Hodge, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+AU-rich+element+removal+promotes+chronic+IFN-gamma+expression+and+autoimmunity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Autoimmun%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma AU-rich element removal promotes chronic IFN-gamma expression and autoimmunity in mice.</a> J Autoimmun. 53, 33-45 (2014).</li>
<li>Seery, J. P., Carroll, J. M., Cattell, V., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinuclear+autoantibodies+and+lupus+nephritis+in+transgenic+mice+expressing+interferon+gamma+in+the+epidermis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Antinuclear autoantibodies and lupus nephritis in transgenic mice expressing interferon gamma in the epidermis.</a> J Exp Med. 186 (9), 1451-1459 (1997).</li>
<li>Peng, S. L., Moslehi, J., Craft, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+interferon-gamma+and+interleukin-4+in+murine+lupus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Roles of interferon-gamma and interleukin-4 in murine lupus.</a> J Clin Invest. 99 (8), 1936-1946 (1997).</li>
<li>Savinov, A. Y., Wong, F. S., Chervonsky, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+affects+homing+of+diabetogenic+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma affects homing of diabetogenic T cells.</a> J Immunol. 167 (11), 6637-6643 (2001).</li>
<li>Miller, C. H., Maher, S. G., Young, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Use+of+Interferon-gamma%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Clinical Use of Interferon-gamma.</a> Ann N Y Acad Sci. 1182, 69-79 (2009).</li>
<li>Paget, C., Chow, M. T., Duret, H., Mattarollo, S. R., Smyth, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gammadelta+T+cells+in+alpha-galactosylceramide-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Role of gammadelta T cells in alpha-galactosylceramide-mediated immunity.</a> J Immunol. 188 (8), 3928-3939 (2012).</li>
<li>Leonard, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+single-dose+interleukin-12+exposure+on+interleukin-12-associated+toxicity+and+interferon-gamma+production%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Effects of single-dose interleukin-12 exposure on interleukin-12-associated toxicity and interferon-gamma production.</a> Blood. 90 (7), 2541-2548 (1997).</li>
<li>Zenewicz, L. A., Shen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+responses+to+Listeria+monocytogenes%3A+a+short+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune responses to Listeria monocytogenes: a short overview.</a> Microbes Infect. 9 (10), 1208-1215 (2007).</li>
<li>Viegas, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN-gamma+production+by+CD27%28%2B%29+NK+cells+exacerbates+Listeria+monocytogenes+infection+in+mice+by+inhibiting+granulocyte+mobilization%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN-gamma production by CD27(+) NK cells exacerbates Listeria monocytogenes infection in mice by inhibiting granulocyte mobilization.</a> Eur J Immunol. 43 (10), 2626-2637 (2013).</li>
<li>Selvanantham, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nod1+and+Nod2+enhance+TLR-mediated+invariant+NKT+cell+activation+during+bacterial+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Nod1 and Nod2 enhance TLR-mediated invariant NKT cell activation during bacterial infection.</a> J Immunol. 191 (11), 5646-5654 (2013).</li>
<li>Becavin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+widely+used+Listeria+monocytogenes+strains+EGD%2C+10403S%2C+and+EGD-e+highlights+genomic+variations+underlying+differences+in+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity.</a> MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).</li>
<li>Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unit+9B.2+Listeria+monocytogenes%3A+cultivation+and+laboratory+maintenance%2C+Chapter+31B%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Unit 9B.2 Listeria monocytogenes: cultivation and laboratory maintenance, Chapter 31B.</a> Curr Protoc Microbiol. , (2013).</li>
<li>Conour, L. A., Murray, K. A., Brown, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+animals+for+research--issues+to+consider+for+rodents+and+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Preparation of animals for research--issues to consider for rodents and rabbits.</a> ILAR J. 47 (4), 283-293 (2006).</li>
<li>Obernier, J. A., Baldwin, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+an+appropriate+period+of+acclimatization+following+transportation+of+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Establishing an appropriate period of acclimatization following transportation of laboratory animals.</a> ILAR J. 47 (4), 364-369 (2006).</li>
<li>BD LSR II User's Guide. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf">http://flowcytometry.sysbio.med.harvard.edu/documents/BD%20LSRII%20User's%20Guide.pdf</a> (2007).</li>
<li>Flowjo Tutorial. , download from bdbiosciences.com. 
 <a target="_blank" href="http://www.flowjo.com/tutorials">http://www.flowjo.com/tutorials</a> (2016).</li>
<li>Zhang, M. A., Ahn, J. J., Zhao, F. L., Selvanantham, T., Mallevaey, T., Stock, N., Correa, L., Clark, R., Spaner, D., Dunn, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antagonizing+peroxisome+proliferator-activated+receptor+alpha+%28PPARalpha%29+activity+enhances+Th1+immunity+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Antagonizing peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) activity enhances Th1 immunity in male mice.</a> J. Immunol. , (2015).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric+estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Amer+Stat+Assoc%22%5BJournal%5D)">Nonparametric estimation from incomplete observations.</a> J Amer Stat Assoc. 53, 457-481 (1958).</li>
<li>Brown, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limited+role+of+CD28-mediated+signals+in+T+helper+subset+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Limited role of CD28-mediated signals in T helper subset differentiation.</a> J Exp Med. 184 (3), 803-810 (1996).</li>
<li>Czuprynski, C. J., Brown, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+difference+in+anti-Listeria+resistance+of+C57BL%2F6+and+A%2FJ+mice+is+not+eliminated+by+active+immunization+or+by+transfer+of+Listeria-immune+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">The relative difference in anti-Listeria resistance of C57BL/6 and A/J mice is not eliminated by active immunization or by transfer of Listeria-immune T cells.</a> Immunology. 58 (3), 437-443 (1986).</li>
<li>Busch, D. H., Vijh, S., Pamer, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+infection+with+Listeria+monocytogenes%2C++Chapter+19%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Animal model for infection with Listeria monocytogenes, Chapter 19.</a> Curr Protoc Immunol. , (2001).</li>
<li>Mekada, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+differences+among+C57BL%2F6+substrains%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58 (2), 141-149 (2009).</li>
<li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+microbiota+direct+the+differentiation+of+IL-17-producing+T-helper+cells+in+the+mucosa+of+the+small+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">Specific microbiota direct the differentiation of IL-17-producing T-helper cells in the mucosa of the small intestine.</a> Cell Host Microbe. 4 (4), 337-349 (2008).</li>
<li>Bou Ghanem, N. E., Myers-Morales, T., Jones, G. S., D'Orazio, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+mice+via+ingestion+of+contaminated+food%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Oral transmission of Listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food.</a> J Vis Exp. (75), e50381(2013).</li>
<li>Lecuit, M., Dramsi, S., Gottardi, C., Fedor-Chaiken, M., Gumbiner, B., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+amino+acid+in+E-cadherin+responsible+for+host+specificity+towards+the+human+pathogen+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes.</a> Embo J. 18 (14), 3956-3963 (1999).</li>
<li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129 (5), 891-902 (2007).</li>
<li>Brunt, L. M., Portnoy, D. A., Unanue, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presentation+of+Listeria+monocytogenes+to+CD8%2B+T+cells+requires+secretion+of+hemolysin+and+intracellular+bacterial+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Presentation of Listeria monocytogenes to CD8+ T cells requires secretion of hemolysin and intracellular bacterial growth.</a> J Immunol. 145 (11), 3540-3546 (1990).</li>
<li>Muraille, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+in+vivo+dendritic+cell+activation+by+live+versus+killed+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Distinct in vivo dendritic cell activation by live versus killed Listeria monocytogenes.</a> Eur J Immunol. 35 (5), 1463-1471 (2005).</li>
<li>Datta, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaccination+with+irradiated+Listeria+induces+protective+T+cell+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Vaccination with irradiated Listeria induces protective T cell immunity.</a> Immunity. 25 (1), 143-152 (2006).</li>
<li>Geginat, G., Schenk, S., Skoberne, M., Goebel, W., Hof, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+of+direct+ex+vivo+epitope+mapping+identifies+dominant+and+subdominant+CD4+and+CD8+T+cell+epitopes+from+Listeria+monocytogenes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel approach of direct ex vivo epitope mapping identifies dominant and subdominant CD4 and CD8 T cell epitopes from Listeria monocytogenes.</a> J Immunol. 166 (3), 1877-1884 (2001).</li>
<li>Shen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Listeria+monocytogenes+as+a+live+vaccine+vehicle+for+the+induction+of+protective+anti-viral+cell-mediated+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recombinant Listeria monocytogenes as a live vaccine vehicle for the induction of protective anti-viral cell-mediated immunity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (9), 3987-3991 (1995).</li>
<li>Foulds, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+CD4+and+CD8+T+cells+are+intrinsically+different+in+their+proliferative+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: CD4 and CD8 T cells are intrinsically different in their proliferative responses.</a> J Immunol. 168 (4), 1528-1532 (2002).</li>
</ol>

No hay conflictos de intereses que divulgar.

Aquí se describe un protocolo sobre cómo llevar a cabo una infección experimental básico con la cepa EGD de L. monocytogenes en 25 ratones C57BL / 6J macho o hembra. Este protocolo se creó con el fin de estudiar el efecto de una novela pequeña molécula IS001 en la producción de IFN-γ por los linfocitos innata y adaptativa in vivo 31. Mediante el control de la eliminación bacteriana y la supervivencia después de la infección, se adquirieron conocimientos sobre cómo estos cambios en...

IFN-γ es una citoquina que es crucial para la mediación de la inmunidad contra los patógenos intracelulares y para controlar el crecimiento del tumor 5. La importancia de esta citocina en la resistencia bacteriana es evidente en la observación de que los seres humanos con mutaciones en la vía de señalización de IFN-γ son altamente susceptibles a la infección por micobacterias y salmonelas 6. De manera similar, los ratones deficientes en IFN-γ o los defectos de exhibición receptor de IFN-γ en la resistencia a las micobacterias 7-9 y otros patógenos intracelulares, incluyendo L. monocytogenes 10,11, Leishmania major 12, Salmonella typhimurium 13, y ciertos virus 11. Además de los agentes patógenos que combaten, IFN-γ juega un papel crucial en la defensa de huésped contra tumores 14. Aunque una mayor producción de IFN-γ es beneficioso en el contexto de la infección o el cáncer, la producción prolongada de esta citocina se ha relacionado to el desarrollo de autoinmunidad sistémica 15-17 y la aceleración de la diabetes tipo I en el modelo de ratón diabético no obeso 18. Las principales fuentes de IFN-γ incluyen células NK, células NKT, delta gamma células T, células T auxiliares 1 (Th1) y linfocitos T citotóxicos (CTL) 5,19,20. IFN-γ aumenta tanto la inmunidad innata y adaptativa por: (1) hasta la regulación de complejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I y II expresión, (2) el aumento de la expresión de moléculas co-estimuladoras en las células presentadoras de antígeno, (3) los macrófagos mejora la fagocitosis y la producción de citoquinas pro-inflamatorias y microbicidas factores (por ejemplo, óxido nítrico y especies reactivas de oxígeno), (4) la promoción de la diferenciación de células T CD4 + vírgenes en células efectoras Th1, (5) la promoción de cambio de clase de anticuerpo a la inmunoglobulina ( Ig) 2a y IgG3 (en el ratón), (6) la inducción de la producción de quimiocinas para reclutar células inmunes a sitios de iNFECCIÓN, y (7) el aumento de células NK y las respuestas de CTL 5,19. Dada la importancia crucial de IFN-γ en la respuesta del huésped a patógenos y tumores, IFN-γ recombinante ha sido probado como tratamiento para diversas infecciones y neoplasias (revisado en 19). Sin embargo, ya que la administración sistémica de IFN-γ o la citoquina Th1 promoción de la interleucina-12 (IL-12) está asociada con efectos secundarios y la toxicidad relacionada con la dosis 19,21, existe un interés en el desarrollo de estrategias alternativas para aumentar la producción de IFN-γ por células inmunes. El desarrollo de nuevos productos biológicos y moléculas pequeñas requiere herramientas de cribado in vivo para probar si tales agentes aumentan la producción de IFN-γ durante una respuesta inmune y si esto se traduce en efectos biológicos significativos tales como el aumento en la supervivencia animal. La infección experimental de ratones con la bacteria L. monocytogenes gram positivas ha sido un modelo Instrumental paradescifrar el papel del IFN-γ en el huésped-inmunidad contra patógenos intracelulares 1,22. La infección de ratones con el patógeno por vía intravenosa o por vía intraperitoneal (ip) conduce a la rápida difusión de las bacterias en el bazo y el hígado, donde quedan internalizadas por los macrófagos residentes y los hepatocitos con cargas bacterianas pico en el bazo se producen entre 3 y 4 días post 1,3,22 infección. La producción de IFN-γ por las células NK es importante para la activación de macrófagos y la resistencia temprana contra el patógeno 3; Sin embargo, a dosis altas infecciosas, producción de IFN-γ también puede ser perjudicial para aclaramiento patógeno 23. Células NKT son también una fuente de IFN-γ en el bazo y el hígado durante el control temprano de patógenos 2,24 y esta producción se ha demostrado para amplificar la producción de IFN-γ por otros tipos de células incluyendo las células NK 2. Por otra parte, después de acción linfocitos T de adaptación, las células T CD8 + en particular, son importantes para mediar en la eliminación del patógeno y proporcionando protección contra 1,4,22 reinfección. Este modelo de infección ha sido atractivo para los investigadores para una serie de razones (revisado en 1). En primer lugar, la infección con el patógeno es altamente reproducible e induce una fuerte respuesta inmune Th1 y celular. En segundo lugar, durante la infección subletal, la carga bacteriana se concentra en el hígado y el bazo en los que se puede medir fácilmente. En tercer lugar, el patógeno puede ser manejado con seguridad bajo nivel de bioseguridad 2 (BSL2) condiciones. En cuarto lugar, el organismo y la respuesta inmune que genera se han caracterizado ampliamente. Por último, una variedad de cepas mutantes y genéticamente modificados han sido desarrollados que están disponibles para su uso. Aquí se describe un protocolo básico para la inoculación de los ratones C57BL / 6J con la cepa EGD de L. monocytogenes y 25 para la medición de IFN - γ rerespuestas por NK, NKT, y los linfocitos de adaptación después de la infección. También se describe cómo medir la carga bacteriana en el bazo y el hígado después de la infección subletal y para llevar a cabo estudios de supervivencia después de la infección con un LD 50 dosis modificada del patógeno. Finalmente, los datos representativos se muestran de cómo este protocolo se puede utilizar para detectar el efecto de los nuevos tratamientos en las respuestas de IFN-gamma y la supervivencia del ratón de L. monocytogenes infección.

<table><tbody><tr><td>Caldo de infusión Brain Heart, Modificado</td><td>BD</td><td>299070</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214010</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Cloruro de amonio (NH3Cl)</td><td></td><td></td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>KHCO3</td><td></td><td></td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Na2EDTA</td><td></td><td></td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>22400089</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12483</td><td>Antes de usar, inactive el calor a 56 & grados; C durante 30 min</td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Gibco</td><td>25030</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Aminoácidos no esenciales</td><td>Gibco</td><td>11140</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140</td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>GolgiStop Inhibidor del Transporte de Proteínas (que contiene Monensina)</td><td>BD</td><td>554724</td><td>Uso 4 &mu; l en 6 ml de cultivo celular</td></tr><tr><td>16% Paraformaldehye</td><td>Electrónica Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td>Diluido a 4% PFA en ddH2O o 1x PBS</td></tr><tr><td>10x Tampón de permeabilidad/lavado</td><td>BD</td><td>554723</td><td>Diluido 1x en ddH2</td></tr><tr><td>O bloque Fc, Anti-Ratón CD16/CD32 Purificado</td><td>eBioscience</td><td>14-0161</td><td>Diluido 1:50</td></tr><tr><td>Tinte de viabilidad fijable eFluor 506</td><td>eBioscience</td><td>65-0866</td><td>Diluir 1:1.000 (también hemos utilizado tintes de viabilidad de Molecular Probes)</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD4-PE-Cy5 (GK1.5)</td><td>eBioscience</td><td>15-0041</td><td>El fabricante recomienda un cierto tamaño de prueba; sin embargo, esto debe valorarse antes de su uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD8-FITC (53-6.7)</td><td>eBioscience</td><td>11-0081</td><td>El fabricante recomienda un cierto tamaño de prueba; sin embargo, este debe ser valorado antes de su uso.</td></tr><tr><td>PBS57/mCD1d tetrámero-APC</td><td>NIH Tetramer Core Facility</td><td>N/A</td><td>Obtenido como regalo de la instalación</td></tr><tr><td>anti-Mouse TCR&beta;-PE-Cy7 (H56-597)</td><td>eBioscience</td><td>25-5961</td><td>El fabricante recomienda un cierto tamaño de prueba; sin embargo, esto debe valorarse antes de su uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse NKp46-APC-eFluor780 (29A1.4)</td><td>eBioscience</td><td>47-3351</td><td>El fabricante recomienda un cierto tamaño de prueba; sin embargo, este debe ser valorado antes de su uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse CD45 PE-Cyanine7 (30-F11)</td><td>eBioscience</td><td>25-0451</td><td>El fabricante recomienda un cierto tamaño de prueba; sin embargo, este debe ser valorado antes de su uso.</td></tr><tr><td>anti-Mouse IFN gamma-PE (XMG1.2)</td><td>eBioscience</td><td>12-7311</td><td>El fabricante recomienda un cierto tamaño de prueba; sin embargo, este debe ser valorado antes de su uso.</td></tr><tr><td>OneComp eBeads</td><td>eBioscience</td><td>01-1111</td><td>Use una gota por tinción</td></tr><tr><td>Kit de ELISA gamma IFN para ratones</td><td>eBioscience</td><td>88-7314</td><td>Se utiliza para medir el interferón gamma en el sobrenadante</td></tr> de <tr><td>cultivo Tubos ventilados de 50 ml para cultivo</td><td></td><td></td><td>Utilizado para el cultivo de bacterias, cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,5 ml cualquier</td><td></td><td></td><td>marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>placas de Petri</td><td></td><td></td> bacterianas <td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>2 ml de Cyrovials</td><td></td><td></td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Espectrómetro</td><td></td><td></td> UV <td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>agujas de ingeniería de</td><td></td><td></td> seguridad cualquier <td>marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>Laboratorios Jackson</td><td>Stock#000664</td><td>Ordene para llegada a las 7 semanas</td></tr><tr><td>Lejía</td><td></td><td></td><td>Para la descontaminación</td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td></td><td></td><td>Para la descontaminación</td></tr><tr><td>Perlas</td><td></td><td></td> de vidrio de <td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Rotor centrífugo</td><td></td><td></td><td>, cubos, tapas de cubos.</td></tr><tr><td>Microcentrífuga:</td><td></td><td></td><td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td></td><td></td> estéril, <td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr>. <tr><td>Puntas</td><td></td><td></td> de pipeta, <td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr>. <tr><td>Pipeta</td><td></td><td></td><td>: cualquier marca</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>.<tr><td> coladores</td><td></td><td></td>, <td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr><tr><td>jeringa</td><td></td><td></td> de 3 ml, <td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Pistola</td><td></td><td></td> de pipetas, <td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr>. <tr><td>Las unidades</td><td></td><td></td> de filtración, <td>cualquier marca, debe ser apropiada</td></tr>. <tr><td>Azul</td><td></td><td></td> de tripán <td>diluido de 1 a 9 en ddH2O, cualquier marca debe ser apropiada</td></tr>.<tr><td>Hemocitómetro</td><td></td><td></td><td>de cualquier marca debe ser apropiado</td></tr><tr><td>Placas de fondo redondo de</td><td></td><td></td><td>cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Tubos FACs</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>BD LSR II</td><td>BD</td><td></td><td>Cualquier citómetro de flujo puede ser utilizado para la adquisición que tenga una configuración de láser apropiada y un conjunto de filtros para discriminar los fluorocoromas</td></tr><tr><td>Flowjo software</td><td>Treestar</td><td></td><td>Se utiliza para el análisis de datos. Otros tipos de software de análisis de datos también serán apropiados</td></tr><tr><td>Pipeta multicanal (0 - 300 y micro; l)</td> <td>Eppendorf</td><td></td><td>Se utiliza para lavar células y agregar anticuerpos durante la tinción con citometría de flujo</td></tr><tr><td>Ácido</td><td></td><td></td> acético <td>Se utiliza para lavar perlas de vidrio, cualquier marca debe ser apropiada</td></tr><tr><td>Sistema de preservación bacteriana de microbanco</td><td>Diagnóstico</td><td></td> Pro-lab <td>Se utiliza como alternativa a las reservas de glicerol para el almacenamiento a largo plazo de bacterias</td></tr></tbody></table>

la infección experimental con<em&gt; listeria monocytogenes</em&gt; como un modelo para el estudio de host respuestas interferón gamma

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

L. monocytogenes es una bacteria gram-positiva que es una causa de enfermedad transmitida por alimentos en seres humanos. La infección experimental de ratones con este patógeno ha sido altamente informativo sobre el papel de las células inmunes innatas y adaptativas y citocinas específicas en la inmunidad del huésped contra los patógenos intracelulares. La producción de IFN-γ por las células innatas durante la infección subletal con L. monocytogenes es importante para la activación de los macrófagos y el control temprano del patógeno 1-3. Además, la producción de IFN-γ por los linfocitos de memoria de adaptación es importante para la imprimación de la activación de las células innatas a la reinfección 4. La L. monocytogenes modelo de infección por lo tanto sirve como una gran herramienta para investigar si las nuevas terapias que están diseñados para aumentar la producción de IFN-γ tener un impacto en las respuestas de IFN-γ in vivo y tienen efectos biológicos productivos, tales como el aumento de la eliminación de bacterias o la mejora de la supervivencia del ratón deinfección. Se describe aquí es un protocolo básico para cómo llevar a cabo las infecciones intraperitoneales de ratones C57BL / 6J con la cepa EGD de L. monocytogenes y para medir la producción de IFN-γ por las células NK, células NKT, y linfocitos de adaptación por citometría de flujo. Además, los procedimientos se describen a: (1) crecer y preparar las bacterias para la inoculación, (2) medir la carga bacteriana en el bazo y el hígado, y (3) la supervivencia medida de los animales a los puntos finales. También se proporcionan datos representativos para ilustrar cómo este modelo de infección se puede utilizar para probar el efecto de agentes específicos en las respuestas de IFN-gamma a L. monocytogenes y la supervivencia de los ratones de esta infección.

La Figura 3 presenta un poco de flujo típico de citometría de tinción de IFN-γ en las células NK y NKT esplénicas a las 24 horas después de la infección con 10 5 CFU del patógeno. Esta figura también ilustra la estrategia de gating para el panel de tinción descrito en la Tabla 2. La Figura 4 muestra algunos datos representativos que se obtuvieron en un experimento donde los ratones macho se trataron con el antagonista de PPAR ...

Este protocolo describe cómo inocular ratones C57BL / 6J con la cepa EGD de Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) y para medir el interferón-γ (IFN-γ) las respuestas de las células asesinas naturales (NK), células T asesinas naturales (NKT), y adaptativa linfocitos T después de la infección. Este protocolo también describe cómo llevar a cabo estudios de supervivencia en ratones después de la infección con una dosis DL50 modificada del patógeno.

La infección experimental con<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Como un modelo para el estudio de host Respuestas interferón gamma

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

Los objetivos generales de este protocolo son cultivar e infectar ratones C57 blacksix con la cepa EGG de Listeria monocytogenes y medir la carga bacteriana, las respuestas de interferón gamma, así como la supervivencia y la respuesta a la infección por este patógeno. Este protocolo puede ayudar a los investigadores a detectar agentes o genes que afecten las respuestas de interferón gamma y la supervivencia de los animales tras una infección bacteriana. La principal ventaja de esta técnica es que es relativamente sencilla de implementar en el laboratorio.Incluso para aquellos con poca experiencia en el cultivo de bacterias. También demostrará el procedimiento Jennifer Ahn, una estudiante de posgrado de mi laboratorio. Comience sumergiendo una punta de pipeta estéril en el stock de glicerol descongelado a temperatura ambiente de la cepa L monocytogenes EGG.Y enseguida raye la punta de ida y vuelta a través de una sección de un medio de infusión de cerebro y corazón o placa BHI. Este es el rayado primario. Gire la placa 90 grados y arrastre una punta de pipeta nueva a través del primer rayado, extendiendo el inóculo al siguiente cuarto de la placa.Este es el trazo secundario. A continuación, gire y extienda el trazo secundario hacia un tercer cuarto de la placa para realizar el trazo terciario. Ahora, invierta la placa y colóquela boca abajo a 37 grados celsius durante una incubación nocturna.Deben ser visibles colonias individuales y uniformes en la última serie de estrías entre 16 y 24 horas. Cuando aparezcan las colonias, dispense 10 mililitros de caldo BHI estéril en un tubo estéril de 50 mililitros con ventilación y utilice la punta estéril de una pipeta para transferir una colonia de L. monocytogenes de la placa al caldo. Incube el caldo inoculado durante la noche en un incubador con agitación orbital a 37 grados Celsius y 225 rotaciones por minuto, hasta que la DO600 sea igual a uno.Para la preparación del inóculo experimental de infección por L. monocytogenes, en una cabina de seguridad biológica, inocule un tubo de medio BHI con 100 microlitros de la cultura de crecimiento nocturno. Después de otra incubación a 37 grados Celsius, con agitación hasta alcanzar la DO600 deseada, transfiera el contenido de la cultura a un tubo de centrífuga estéril para la centrifugación. Utilice un vacío conectado a un frasco trampa que contenga lejía para aspirar el sobrenadante.Lave el sedimento dos veces con PBS bajo las mismas condiciones de centrifugación. Después del segundo lavado, re suspenda las bacterias en PBS y dilúyalas a la concentración adecuada. Para administrar la UFC de interés a cada ratón en un volumen de 200 microlitros.A continuación, mezcle bien la suspensión con una punta de pipeta estéril para asegurar que las bacterias estén distribuidas homogéneamente. Luego, aspire 200 microlitros de inóculo en una jeringa de un mililitro con sistema de seguridad, equipada con una aguja de calibre 25. Ahora, sujete al ratón por la piel suelta alrededor de los hombros con la mano menos dominante.Y administre los 200 microlitros completos del inóculo en el cuadrante inferior del abdomen, justo lateral a la línea media para evitar la vejiga, utilizando una aguja y jeringa nuevas para cada animal. Para medir la carga bacteriana máxima durante la infección, al tercer día posterior a la infección, sujete las extremidades de un animal experimental en posición supina sobre una tabla de disección. Y desinfecte la piel con etanol al 70 por ciento.Con tijeras estériles de corte fuerte, realice una incisión desde el pecho hasta la ingle. Luego, haga una incisión desde la ingle media hacia cada rodilla y desde el pecho medio hacia cada codo. Diseque por separación y refleje la piel, fijándola con agujas de calibre 25.Desinfecte la capa muscular con más etanol al 70 por ciento. Luego, utilizando tijeras finas estériles, realice una incisión media en la pared peritoneal. Utilice pinzas para sujetar el proceso xifoides.Realice incisiones en la pared peritoneal comenzando en el proceso xifoides y avanzando lateralmente hacia cada lado. Siga la caja torácica hasta justo debajo del diafragma. Esto revelará el hígado.A continuación, utilice tijeras estériles para cortar un fragmento de aproximadamente 100 miligramos de uno de los lóbulos. Coloque el tejido en un tubo microcentrífugo de 1,5 mililitros previamente pesado que contenga de 0,2 a 0,3 gramos de perlas de vidrio estériles, lavadas con ácido, de 1,5 a 2 milímetros. Y use la pinza para desplazar suavemente los órganos del lado izquierdo de la cavidad peritoneal con el fin de visualizar el bazo.Use las pinzas para sujetar suavemente el bazo, cortando el tejido conectivo circundante para liberar el órgano de la cavidad peritoneal. Coloque el bazo en un tubo diferente al hígado y transfiera los tejidos al laboratorio en un recipiente hermético que contenga hielo. Agite los tubos utilizando un homogenizador de bolas durante tres minutos a una frecuencia de 30 hertz.Luego, prepare una serie de diluciones decimales de los homogenizados en PBS con triton X-100 al 0,1 por ciento. A continuación, use un espátula estéril para distribuir 100 microlitros de cada homogenizado diluido sobre una placa de agar BHI. Y transfiera las placas a un incubador a 37 grados centígrados para una incubación nocturna.Mantenga las placas que contengan hasta 300 colonias por placa. Cuente las colonias en cada placa. Para medir CD4 en las respuestas de interferón gamma de las células T CT8, recolecte los bazo de ratones infectados con dos décimas partes en la cuarta potencia de UFC del patógeno, tal como se acaba de demostrar.Procese los bazo para obtener una suspensión única de glóbulos rojos vivos. Y resuspenda el precipitado a una concentración de cuatro por diez elevado a seis células por mililitro en medio RPMI completo que contenga FCS. A continuación, siembre un mililitro de células por pocillo en una placa de 24 pocillos con un volumen igual de *Listeria monocytogenes* descongelada e inactivada por calor, y coloque las cultivos frías en un incubador a 37 grados celsius.Después de 20 horas, agregue 0,66 microlitros por mililitro de inhibidor del transporte de proteínas a los pocillos. Y devuelva la placa al incubador. Cuatro horas después, en una cabina de seguridad biológica, recolecte 500 microlitros de sobrenadante de cultivo y congele las muestras a menos 80 grados centígrados para la medición posterior de interferón gamma mediante ELISA.Luego transfiera las células a un solo tubo estéril de 15 mililitros, lavando los pocillos con PBS y reuniendo el lavado con las células recolectadas para la tinción y análisis citométrico de flujo. El pico de carga bacteriana ocurre en el bazo dos o tres días después de la infección y se reduce drásticamente mediante la adición de un antagonista de PPAR Alpha antes de la infección.A los siete días posteriores a la infección, la restimulación *ex vivo* de linfocitos T del bazo positivos para CD4 y positivos para CD8 con el patógeno inactivado por calor induce una respuesta positiva de interferón gamma en células positivas para CD4 y positivas para CD8, tal como se detecta mediante citometría de flujo. El tratamiento con el antagonista de PPAR alfa antes de la infección potencia las respuestas de interferón gamma en células CD4 y CD8. Además, el tratamiento con el antagonista de PPAR alfa incrementa en gran medida la supervivencia tras la infección con la dosis LD50 del patógeno, lo que muestra la utilidad de este modelo para investigar el impacto de nuevos fármacos que modulan las respuestas de interferón gamma sobre la supervivencia animal tras la infección.Una vez dominados, todos los procedimientos de este protocolo pueden generar los datos deseados en varias semanas, si se realizan adecuadamente. La técnica puede adaptarse aún más infectando ratones con cepas de Listeria monocytogenes que expresan antígenos modelo y utilizando reactivos tetraméricos de clase I y II del MAC específicos para estos antígenos. Esto permitirá medir la expansión de linfocitos T tras la infección.Tras su desarrollo, esta técnica se convirtió en un modelo fundamental para descifrar el papel del interferón gamma en la inmunidad del huésped frente a patógenos intracelulares. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo cultivar e infectar ratones C57 blacksix con listeria monocytogenes, y cómo medir la carga bacteriana y las respuestas de interferón gamma frente a la infección.No olvide que trabajar con Listeria monocytogenes puede ser peligroso para individuos inmunocomprometidos, como mujeres embarazadas, niños muy pequeños o ancianos. Por lo tanto, el patógeno solo debe manipularse por personas inmunocompetentes bajo condiciones de nivel de bioseguridad dos.

experimental-infection-with-listeria-monocytogenes-as-model-for

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Listeria monocytogenes es un organismo modelo para estudiar la respuesta inmune y la susceptibilidad genética a las bacterias intracelulares en ratones. Este método permite medir la carga bacteriana y generar una sola célula suspensiones de hígado y el bazo de los ratones para el análisis de FACS para determinar los cambios en las células inmunes, debido a la infección por Listeria.

La medición de la carga bacteriana y la respuesta inmune en ratones infectados con Listeria monocytogenes</em

Fuente: Seman, B. G., et al. Un modelo de imagen neonatal de sepsis bacteriana gramnegativa. J. Vis. Exp. (2020)El vídeo muestra un modelo neonatal murino para estudiar la infección sistémica utilizando bacterias bioluminiscentes encapsuladas. A los cachorros neonatales se les inyectan suspensiones bacterianas de dosis altas o bajas y se les devuelven a su madre para cuidados postnatales. Las bacterias encapsuladas evaden la detección inmunitaria temprana, se propagan sistémicamente y se...

Modelado de la infección en ratones neonatales utilizando bacterias bioluminiscentes encapsuladas

Fuente: Radulovic, K., et al. Inyecciones de lipopolisacáridos en ratones para simular la entrada de productos de origen microbiano tras la ruptura de la barrera intestinal. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo muestra un procedimiento paso a paso para inyectar lipopolisacáridos (LPS) en ratones de forma intraperitoneal para inducir inflamación sistémica.

Inyección intraperitoneal de lipopolisacáridos bacterianos en ratones para estudiar las respuestas inmunitarias sistémicas

Source: Ahn, J. J., et al., Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-γ Responses. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the preparation of mouse splenocyte cultures from Listeria monocytogenes-infected mice for downstream cytokine analysis. It includes ex vivo bacteria-derived antigen stimulation and sample processing to study T cell responses.

In Vitro Stimulation of Mouse Splenocytes with Heat-Killed Listeria monocytogenes

Este video muestra un método de imagen para visualizar in situ la secreción de interferón-gamma (IFN-γ) en el bazo del ratón. Después de la infección bacteriana y la inducción de la acumulación de IFN-γ dentro de las células T y las células asesinas naturales, el bazo se extrae del ratón. Al obtener secciones de tejido, se realiza una inmunotinción para visualizar el IFN-γ dentro de las células.

Ensayo para la identificación de la secreción de interferón gamma en órganos linfoides murinos

Este video muestra la cuantificación de la carga bacteriana infecciosa del cerebro de ratón perfundido infectado con Listeria monocytogenes.

Evaluación de la colonización bacteriana en el cerebro de un ratón después de una infección por Listeria monocytogenes

Este documento describe un nuevo método para la infección oral de ratones...

La transmisión oral de<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; En ratones a través de la ingestión de alimentos contaminados

Listeria monocytogenes es un patógeno bacteriano Gram positiva utilizado frecuentemente como un modelo importante para el estudio de parasitismo intracelular. Imágenes tardías L. monocytogenes etapas de infección en el contexto de los pequeños ARN de interferencia pantallas permite el estudio global de las vías celulares requeridos para la infección bacteriana de las células huésped diana.

Imaging InlC secreción de investigar la infección celular por el patógeno bacteriano<em&gt; Listeria monocytogenes</em

Se describen dos ensayos de infección in vitro e in vivo que pueden utilizarse para analizar las actividades de codificación de host factores.

Usando un patógeno bacteriano a punta de prueba para las respuestas celular y organísmica nivel Host

Aquí, describimos un método de imagen confocal simple para visualizar la localización in situ de las células que secretan la citoquina Interferón gamma en órganos linfoides secundarios murinos. Este protocolo se puede extender para la visualización de otras citoquinas en diversos tejidos.

Imagen de la producción de interferón gamma in situ en el bazo de ratón después de la infección por Listeria monocytogenes

Aprende a cultivar e inocular ratones C57BL/6J con Listeria monocytogenes EGD y medir respuestas de interferón gamma en células inmunes. Este protocolo permite evaluar carga bacteriana y supervivencia.

La infección experimental con

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