Name: La medición de la discapacidad neurológica progresiva en un modelo de ratón de la esclerosis múltiple (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Aprende a medir la discapacidad neurológica progresiva en ratones infectados con TMEV mediante la prueba de Rotarod optimizada. Este protocolo objetivo evalúa funciones motoras y establece una línea base para probar terapias contra la esclerosis múltiple.

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Los autores agradecen al personal del Centro de Medicina e Investigación Comparativa (CCMR) de Dartmouth por su cuidado experto de los ratones utilizados para estos estudios. Los autores también reconocen a Emily Clough por su excelente apoyo administrativo.

Todo el trabajo con animales utiliza protocolos revisados ​​y aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional (IACUC) de la Escuela Geisel de Medicina de Dartmouth. 1. El modelo de ratón <ol><li> La inducción de la enfermedad desmielinizante inducida por TMEV <ol><li> Mover las jaulas que contienen de 4 a 6 semanas de edad, hembra SJL / JHAN ratones del bastidor a un espacio de trabajo confortable. Marcar los ratones (por ejemplo, con una marca auricular o un punzón oído) para permitir una evaluación individual de la enfermedad clínica e histológica. </li><li> Dibujar 30 l de TMEV Stock infectar (unidades formadoras de 2 x 10 6 placa; UFP) en PBS en una jeringa de insulina de calibre 29 y una aguja. </li><li> Preparar la máquina de anestesia de gas: compruebe el sistema para asegurar la presencia de cantidades adecuadas de oxígeno e isoflurano durante la duración del procedimiento. </li><li> Encienda el medidor de flujo de 1 L / min. Colocar el animal en la cámara de inducción y sellar la parte superior. Encienda el VAporizer a 3,5% y controlar al animal hasta reclinada. </li><li> Retire el animal de la cámara y poner a prueba el ratón pellizcando la almohadilla para asegurar una anestesia adecuada. La falta de respuesta a una pizca fuerte indica una anestesia adecuada. </li><li> Limpiar el sitio de la inyección con alcohol isopropílico al 70%. </li><li> Inyectar los 30 l de TMEV Stock infectando en el hemisferio cerebral derecho por inyección a mano alzada (Figura 1). El sitio de la inyección es aproximadamente a medio camino entre la línea de vista y el oído, y justo al lado de la línea media. </li><li> Vuelva a colocar el puntero del ratón a su jaula de retención una vez completamente alerta y móvil (generalmente de 3 - 5 min). </li><li> La eutanasia a los ratones por exanguinación o perfusión cardíaca 3 a 6 meses después de la infección TMEV, en función de la rapidez del desarrollo de la enfermedad. </li></ol></li></ol> 2. Análisis de Rotarod <ol><li> El Aparato de Rotarod <ol><li> ratones de prueba antes de la infección por TMEV que se familiaricen con elmáquina y para evaluar su coordinación balance de línea de base y el motor de control normal. </li><li> Iniciar el protocolo de adaptación en los días -5 después de la infección (dpi; es decir, 5 días antes de la infección por TMEV). </li><li> Permitir que los ratones se aclimaten a la cámara de ensayo durante al menos 30 minutos antes de la prueba de Rotarod, con el fin de permitir que se ajustan al medio ambiente. </li><li> Asegúrese de que tanto la unidad de Rotarod y el ordenador están conectados y conectados entre sí (Figura 2). </li><li> Programado en el rotarod con los parámetros del protocolo de entrenamiento dpi -5, tal como se describe en la Tabla 1. </li><li> Guarde el archivo de trabajo con la información de la fecha y la identificación. </li><li> Mover la jaula que contiene el equipo a ensayar desde el bastidor a una mesa junto a la rotarod. Los ratones se prueban normalmente en escuadrones de 4. </li><li> Recoger a un ratón por la cola y lo coloca en la barra, de espaldas a la operadora. Repita para el segundo hasta el cuarto ratón. Si un ratón falls o saltos, colocarlo de nuevo en su carril de la rotarod hasta que todos los ratones están en posición. No haga caso de cualquier ratones dan la vuelta para hacer frente al operador. </li><li> Después de cargar todos los ratones, presione el botón &quot;Enter&quot; para iniciar el experimento. Observar los temporizadores se inician automáticamente y las revoluciones por minuto (rpm) en la pantalla para cada carril. <ol><li> Como cada animal se cae de la barra, registrar la velocidad de la varilla en el momento de la caída, así como la duración de tiempo que el animal permanecía en la varilla. La varilla seguirá girando hasta que el último animal ha caído del conjunto de la varilla. </li></ol></li><li> Después de que todos los ratones han caído, utilice un pañuelo de papel para eliminar cualquier bolos fecales y la orina de la varilla. La presencia de orina y la materia fecal puede afectar a la capacidad de los ratones para agarrar la barra. <ol><li> Después de un descanso de 3 minutos, dar a los ratones una segunda y una tercera prueba. El tiempo máximo por solo ensayo es de 240 seg. Administrar un total de 3 pruebas durante cada día de la prueba. </li></ol></li><li> Devolver los ratones a sus jaulas y devolverlos de nuevo al bastidor. Al final de la sesión experimental, limpiar el rotarod con agua y jabón para eliminar toda la materia fecal de la máquina. </li><li> Limpiar la placa base con etanol al 70%. Rocíe toda la máquina con dióxido de cloro para desinfectar. </li><li> En días - 4, - 3, - 2, y - 1 pi, pre-establecer el rotarod con los parámetros del protocolo de entrenamiento apropiadas, tal como se describe en la Tabla 1, y repita los pasos 2.1.2 a 2.1.12. </li><li> Después de obtener las medidas de referencia, infectar a los ratones con TMEV. Permitir un período de recuperación pi a 6 días. </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"> Protocolo </td><td rowspan="2"> Día de la prueba </td><td rowspan="2"> Frecuencia </td><td rowspan="2"> Velocidad de arranque (rpm) </td><td rowspan="2"> MaxVelocidad (rpm) </td><td> Aceleración </td><td> ensayos </td><td> ITI </td></tr><tr><td> (rpm / sec) </td><td> (N x seg) </td><td> (min) </td></tr><tr><td rowspan="4"> Formación </td><td> - 5 dpi </td><td> 1 día </td><td> 1 </td><td> 12 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 seg </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 4 ppp </td><td> 1 día </td><td> 1 </td><td> 13 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 seg </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 3 dpi </td><td> 1 día </td><td> 1 </td><td> 14 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 seg </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 2; - 1 ppp </td><td> 1 día </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 seg </td><td> 3 </td></tr><tr><td rowspan="2"> Experimental </td><td> Entre +7 +50 dpi </td><td> 2 semanas </td><td>5 </td><td> 40 </td><td> 05/30 </td><td> 3x240 seg </td><td> 3 </td></tr><tr><td> De 51 a 150 dpi </td><td> 1 semana </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 05/30 </td><td> 3x240 seg </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> Tabla 1: Parámetros rodillo giratorio en la formación y protocolos experimentales. <ol start="2"><li> El protocolo experimental de Rotarod <ol><li> En 7 dpi, pre-establecer el rotarod con los parámetros de protocolo experimentales apropiados, como se describe en la Tabla 1. Repetir los pasos 2.1.2 a 2.1.10. </li><li> Al final de la prueba # 3, se pesa cada ratón y hacer una nota del peso corporal en la hoja de datos. Limpiar y desinfectar el rotarod según los pasos 2.1.11 y 2.1.12. </li><li> Prueba de los ratones dos veces a la semana para las 6 semanas siguientes, tal como se describe anteriormente. Después de 6 semanas (en el que los ratones propensos han llegado a una fase de meseta) 8,9, prueba los ratones una vez a la semana con el mismo Experimental protocolo. El protocolo de prueba real tiene una duración media de 150 días, dependiendo de la evolución de la enfermedad específica. </li></ol></li><li> Índice funcional neurológica <ol><li> Exportar los datos en bruto en un archivo de hoja de cálculo y analizar los resultados. </li><li> Data Express como correr del tiempo (Figura 3A): este es el tiempo de funcionamiento normal más el tiempo de rotación pasiva menos el tiempo de retardo de rotación (tabla 2) 10. Calcular el tiempo de funcionamiento media de los tres ensayos por día. </li><li> Expresar los datos como un índice funcional neurológica (NFI; Figura 3B). <ol><li> Calcular el umbral de rendimiento de línea de base de cada ratón individual. El umbral de rendimiento de referencia se determina como la media de todos los tiempos de funcionamiento de día + 15 a + 45 pi 6,7. </li><li> Calcular la NFI como la media de los tres tiempos de funcionamiento promedio más recientes dividida por el umbral de rendimiento de línea de base de que 6,7 de ratón específico &lt;/ Sup&gt;. NOTA: Si los tiempos de funcionamiento probado para un ratón en el día +72, +76 y + 79 pi son 55 seg, 45 seg, y 50 segundos, y el tiempo de la línea de base para el mismo ratón fue de 135 segundos, el NFI para ese ratón en 79 dpi será [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 o 0,37. </li></ol></li><li> Expresar los datos como un NFI ajustado (adjNFI; Figura 3C): ajustar los datos de artículos no alimentarios por un valor de la población para el único experimento. <ol><li> Calcular la adjNFI dividiendo el valor NFI por el promedio NFI obtenido por el grupo tratado de referencia en ese día específico. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Término </td><td> Definición </td></tr><tr><td> tiempo de funcionamiento normal </td><td> El tiempo total que el ratón gasta en ejecución activa en la barra giratoria, es decir, la latencia se caiga. </td></tr><tr><td> tiempo de rotación pasiva </td><td> La Amontaje de tiempo que el ratón se ha mantenido en la varilla en el modo de rotación pasiva. </td></tr><tr><td> tiempo de retardo de rotación </td><td> La cantidad de tiempo que el ratón permanece en la varilla durante el modo de rotación pasiva </td></tr><tr><td> modo de rotación pasiva </td><td> Cuando el ratón agarra la varilla y gira sin tener que deambular. </td></tr><tr><td> El tiempo total de la sesión </td><td> La cantidad total de tiempo que el ratón permanece en la barra giratoria durante la sesión. </td></tr><tr><td> el rendimiento de referencia </td><td> Pre-daños rendimiento del motor evaluado para determinar el umbral mínimo de rendimiento. </td></tr><tr><td> índice de la función neurológica (NFI) </td><td> Índice clínico, que compara cada ratón el rendimiento del motor, es decir, el tiempo de funcionamiento, en cualquier momento para su máximo rendimiento. </td></tr><tr><td> índice de la función neurológica ajustado (adjNFI) </td><td> Cuando se aplica un proceso de normalización para ajustar los datos NFI por un valor de la población parael experimento sencillo. </td></tr><tr><td> valor de la población </td><td> NFI valor medio obtenido por el grupo de tratamiento simulado-tratado en un día específico. </td></tr></tbody></table> Tabla 2: Definición de los parámetros adoptados para cuantificar el cilindro giratorio Neurológica deterioro.

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

A pesar de algunas limitaciones, la prueba de rendimiento de Rotarod representa una herramienta importante para la evaluación de la función motora y disfunción en TMEV-IDD, así como el efecto de las intervenciones farmacológicas en la progresión de la discapacidad en los ratones. La prueba de Rotarod fue descrita por primera vez en 1957 como una herramienta para medir los déficits neurológicos en los roedores 11. Los roedores tienen que caminar sobre una barra giratoria, al aument...

Virus Murino encefalomielitis de Theiler (TMEV) es un virus de ARN de cadena simple neurotrópico que persistentemente infecta el sistema nervioso central murino (CNS). En ratones susceptibles, la infección con TMEV causa una, enfermedad desmielinizante crónica progresiva inmunomediada, conocida como enfermedad desmielinizante inducida por TMEV (TMEV-IDD). La infección experimental de ratones toma un curso de la enfermedad se asemeja a la observada en las formas progresivas de la esclerosis múltiple (MS). TMEV-IDD se caracteriza por dos fases distintas: la fase aguda y la fase crónica. La fase aguda es una, 1,2 encefalitis generalmente subclínica leve. La segunda fase, crónica, que comienza alrededor de un mes después de la infección, se compone de una discapacidad aumento que se caracteriza por la desmielinización, la inflamación y el daño axonal 1,2. La debilidad observada en ratones se asocia con la espasticidad y, en ocasiones, graves espasmos tónicos. Debido a que hay actualmente ningún medicamenns para mejorar la discapacidad progresiva en los pacientes, los investigadores se sienten especialmente atraídos por TMEV-DDI, lo que representa un modelo animal óptimo para el seguimiento del impacto de los fármacos modificadores de la enfermedad en la progresión de la enfermedad. Sin embargo, en ratones, así como en pacientes con EM, la monitorización de la progresión de la discapacidad requiere una observación clínica continua durante largos períodos de tiempo. En ratones, el seguimiento a largo plazo para la progresión de la discapacidad se puede lograr con la prueba de rendimiento de Rotarod. La prueba de rendimiento de Rotarod es una prueba de comportamiento estándar que evalúa las funciones motoras asociadas a tales como la coordinación, el equilibrio y la fatiga en los roedores. Los ratones tienen que mantener el equilibrio sobre una varilla giratoria, que está girando en aceleración continua; la latencia de tiempo para caer de esta barra se registra. Los animales con disfunción neurológica no pueden permanecer en la barra giratoria, siempre que los controles, y que normalmente entrega cuando la velocidad de rotación es superior a sula capacidad del motor. El deterioro neurológico más los animales tienen, más pronto se caiga la varilla, y el más corto es el tiempo de latencia es. La ventaja de la prueba de rotarod en los sistemas tradicionales de puntuación visual es que genera un objetivo, medible variable el tiempo de latencia-que en última instancia puede ser utilizado para los análisis estadísticos para cuantificar los efectos de las terapias y procedimientos experimentales 3. En el Laboratorio de Neuroinmunología (LONI) en Dartmouth, los ratones son sometidos a un protocolo de adaptación, en el que se prueban antes de la infección por TMEV con el fin de que se familiaricen con la máquina y para evaluar su normal &quot;línea de base&quot; equilibrio coordinación y el control motor 4, 5. Una vez que se estableció la línea de base y los ratones están infectados con TMEV, que se ponen a prueba una vez o dos veces a la semana durante un período de varios meses. El protocolo de prueba real tiene una duración media de 150 días, lo que permite una evaluación dela disminución de equilibrio, coordinación, y control del motor durante todo el curso de la enfermedad desmielinizante. Varios cientos de TMEV-IDD y tratada simulacro que los ratones se han probado hasta el momento para la disfunción neurológica en Dartmouth. Estos ratones habían recibido varios tratamientos inmunomoduladores, pero ningún agente farmacológico ha demostrado ser eficaz en la mejora de progresión de la discapacidad 6,7. El presente artículo y el protocolo relacionado describen cómo caracterizar el deterioro neurológico progresivo mostrada por los ratones TMEV-IDD. En particular, el protocolo ofrece recomendaciones de parámetros de prueba específicos que se consideran generalmente adecuados para el estudio de la discapacidad neurológica en ratones TMEV-IDD utilizando la prueba de Rotarod. Este procedimiento proporciona una línea de base que sirve para evaluar (1) la relevancia de este modelo de ratón para la EM progresiva y (2) su utilidad para probar terapias destinadas al tratamiento de enfermedades neurológicas progresivas como la esclerosis múltiple. Claramente, laprueba de rendimiento de Rotarod y el protocolo de parámetros de prueba optimizados y actual no sólo son útiles en la detección de la discapacidad neurológica progresiva en el modelo de ratón TMEV-IDD, pero también son útiles en el descubrimiento de las deficiencias en otros modelos de virus inducida y / o de ratón genético de las enfermedades neurodegenerativas.

<table><tbody><tr><td>Ratones SJL/JCrHsd de 4 a 6 semanas de edad</td><td>Envigo</td><td>#052</td><td></td></tr><tr><td>Stock</td><td></td><td></td><td></td>de virus TMEV</tr><tr><td>Vaporizador de isoflurano</td><td>Harvard Apparatus</td><td>#340471</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas de Insulina U- 100 29 g x 0.5 cc</td><td>BD</td><td>#328203</td><td></td></tr><tr><td>Rotamex-5 4 Carriles Rota-Rod para Ratones con RS-232 y Software</td><td>Columbus Instruments</td><td>#0890M</td><td></td></tr></tbody></table>

la medición de la discapacidad neurológica progresiva en un modelo de ratón de la esclerosis múltiple

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

Después de la infección intracerebral con el Virus de la Encefalomielitis Murina de Theiler (TMEV), los ratones SJL susceptibles desarrollan una enfermedad desmielinizante crónica-progresiva, con características clínicas similares a las formas progresivas de la esclerosis múltiple (EM). Los ratones muestran una discapacidad progresiva con pérdida de las funciones motoras y sensoriales, que puede ser evaluada con múltiples aparatos y protocolos. Entre ellos, la prueba de rendimiento Rotarod es una prueba de comportamiento muy común, su ventaja es que proporciona mediciones objetivas, pero a menudo se usa asumiendo que es directa y simple. A diferencia de los sistemas de puntuación visual utilizados en algunos modelos de EM, que son muy subjetivos, la prueba de Rotarod genera una variable objetiva, medible y continua (es decir, la duración del tiempo), lo que permite concordancias casi perfectas entre evaluadores. Sin embargo, la fiabilidad entre laboratorios solo se logra si se replican los distintos parámetros de prueba. En este manuscrito, recomendaciones de parámetros de prueba específicos, como el tamaño, la velocidad y la aceleración de la varilla; la cantidad de adiestramiento impartido a los animales; y procesamiento de datos, se presentan para la prueba Rotarod.

El objetivo de este experimento representativo fue comparar la discapacidad neurológica inducida por la cepa Daniels (DA) y la tensión de la haba de TMEV. Para los propósitos del presente estudio, un grupo de 32 ratones SJL hembra fueron infectados por vía intracraneal con TMEV, ya sea la cepa DA (n = 16) o de la cepa de frijol (n = 16), y sus signos clínicos se monitorizaron con el tiempo. Un grupo adicional de 20 ratones se aplicó el tratamiento simulado (es decir, solución sa...

En este artículo se presenta un protocolo de prueba optimizado para la prueba de rendimiento Rotarod, utilizada para medir la discapacidad neurológica progresiva en ratones infectados con TMEV.

La medición de la discapacidad neurológica progresiva en un modelo de ratón de la esclerosis múltiple

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

El objetivo general de este procedimiento es evaluar el deterioro neurológico progresivo en ratones con enfermedades desmielinizantes crónicas. Logramos esto ofreciendo recomendaciones sobre parámetros de prueba adecuados para estudiar la discapacidad neurológica a largo plazo en el modelo de esclerosis múltiple progresiva inducida por el virus de Theiler, utilizando la prueba del rotarod. Este procedimiento proporciona una línea base frente a la cual se puede evaluar la relevancia del modelo murino para la desmielinización progresiva y su utilidad para probar terapias dirigidas al tratamiento de condiciones neurológicas progresivas como la esclerosis múltiple.La ventaja de esta prueba optimizada frente al sistema tradicional de puntuación visual es que genera una variable objetiva para cuantificar el efecto a largo plazo de las terapias y procedimientos experimentales sobre las funciones motoras. Esta técnica será demostrada por Darlene Royce, una técnica del laboratorio de neuroinmunología en Dartmouth. Con el fin de evaluar la coordinación del equilibrio basal y el control motor, inicie el protocolo de adaptación cinco días antes de la infección con TMEV, permitiendo primero que los ratones se aclimaten a la sala de pruebas durante al menos 30 minutos.Mientras los ratones se están aclimatando, configure previamente el Rotarod con los parámetros de entrenamiento de menos cinco DPI. Luego, tome un ratón por la cola y colóquelo sobre el cilindro orientado en dirección opuesta al operador. Si el ratón cae o salta, colóquelo nuevamente en su carril en el Rotarod hasta que todos los ratones estén en posición.Después de colocar los cuatro ratones, presione el botón de entrada para iniciar el experimento. Asegúrese de que los temporizadores comiencen automáticamente y observe las rotaciones por minuto mostradas en la pantalla para cada carril. Luego, cuando cada animal caiga del cilindro, registre la velocidad del cilindro en el momento de la caída, así como la duración del tiempo que el animal permaneció sobre el cilindro.Después de que todos los ratones hayan caído, use un hisopo para eliminar cualquier bolo fecal y orina de la barra, ya que la presencia de orina y material fecal puede afectar la capacidad de los ratones para agarrarse adecuadamente a la barra. Después de un descanso de tres minutos, realice un segundo y luego un tercer ensayo, en los que el tiempo máximo por ensayo individual sea de 240 segundos. Realice un total de tres ensayos durante cada día de prueba.Finalmente, devuelva los ratones a su jaula de alojamiento. En los días menos cuatro, menos tres, menos dos y menos uno PI, configure el Rotarod con los parámetros adecuados del protocolo de entrenamiento y repita el experimento del Rotarod. Comience moviendo las jaulas que contienen ratones SJL hembras de cuatro a seis semanas de edad desde el rack hasta un espacio de trabajo cómodo.Utilice perforaciones en las orejas para marcar a los ratones y permitir la evaluación individual de la enfermedad clínica e histológica. A continuación, aspire 30 microlitros de la solución infecciosa de TMEV en PBS hacia una jeringa de insulina con aguja de 29 gauge. Prepare la máquina de anestesia con gas asegurándose de que haya cantidades adecuadas de oxígeno e isoflurano para toda la duración del procedimiento.Coloque el animal en la cámara de inducción y cierre la tapa. Después de unos minutos, retire el animal de la cámara y compruebe el estado de anestesia pellizcando la almohadilla del pie para asegurar una anestesia adecuada. A continuación, limpie el sitio de inyección con alcohol isopropílico al 70 % e inyecte los 30 microlitros del stock infeccioso de TMEV en el hemisferio cerebral derecho mediante inyección manual.Finalmente, devuelva al ratón a su jaula de contención una vez que esté completamente despierto y móvil. En el día siete posterior a la infección, configure previamente el Rotarod con los parámetros experimentales adecuados y repita el ejercicio completo de entrenamiento en el Rotarod con los parámetros del protocolo experimental apropiados. Después del tercer ensayo de cada día, pese a cada ratón y anote el peso corporal en la hoja de datos.Someta a los ratones a pruebas dos veces por semana durante las siguientes seis semanas de la misma manera. Después de seis semanas, realice pruebas a los ratones una vez por semana con el mismo protocolo experimental durante un promedio de 150 días experimentales. A continuación, analice los datos brutos y expréselos como un índice funcional neurológico, o NFI.Para determinar el valor individual de NFI, calcule el umbral de rendimiento basal de cada ratón como la media de todos los tiempos de carrera desde los 15 hasta los 45 días posteriores a la infección. Esto permite evaluar el rendimiento motor como resultado de la desmielinización progresiva y excluir cualquier déficit contribuyente debido a la encefalitis temprana. Luego, calcule el valor de NFI como la media de los tres tiempos de carrera promedio más recientes dividida por el umbral de rendimiento basal del ratón.Finalmente, calcule un NFI ajustado dividiendo el valor del NFI por el valor promedio del NFI obtenido por el grupo tratado con placebo en ese día específico. Esta figura muestra que los ratones infectados con TMEV presentan déficits neurológicos significativamente aumentados a lo largo del tiempo en comparación con los ratones control. La infección crónica con dos cepas diferentes de TMEV afectó negativamente los tiempos de carrera de los ratones.Ambos grupos de ratones infectados con TMEV presentaron valores de NFI significativamente más bajos que los de los ratones sham. Además, no hubo diferencias al comparar la progresión de la discapacidad en ratones infectados con la cepa BeAn y aquellos infectados con la cepa DA en todos los puntos temporales. Tras este procedimiento, se pueden realizar métodos de puntuación visual tradicionales, como la prueba del reflejo de enderezamiento, para evaluar rápidamente la salud general en ratones.Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la esclerosis múltiple y las enfermedades neurodegenerativas probaran la eficacia de terapias y otras intervenciones para retrasar la discapacidad progresiva. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo evaluar la discapacidad progresiva a largo plazo en ratones. Este procedimiento no solo es útil para detectar la discapacidad neurológica progresiva en el modelo del virus de Theiler, sino que también es útil para descubrir alteraciones en otros modelos de ratón de enfermedades neurodegenerativas.

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Investigación

JoVE Journal

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Neurociencia

Los protocolos se presentan establecidas dos tareas de coordinación motora, la barra de rodillo giratorio horizontal y la aceleración, también dos pruebas desarrolladas en Oxford recientemente, las barras estáticas y barras paralelas. Estas pruebas pueden detectar deficiencias motoras potencialmente de interés en su propio derecho, así como que son posibles variables en las pruebas de otras áreas de la conducta.

Medición de Coordinación motora en ratones

Un modelo de ratón para la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es un examen clínico y de comportamiento. Como un requisito previo para un análisis inmunohistoquímico acompaña la preparación de la médula espinal se representa en detalle.

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La medición precisa de la deficiencia y la discapacidad neurológica y neuropsicológica en la esclerosis múltiple es un reto. Presentamos los detalles metodológicos de una nueva prueba, la Prueba Múltiple Sclerosis Rendimiento (MSPT). Este nuevo enfoque al objetivo de la cuantificación de la discapacidad relacionada con la EM proporciona una plataforma basada en la computadora para la medición precisa, válida de MS severidad.

La prueba de la esclerosis múltiple de rendimiento (MSPT): Una Herramienta de Evaluación de Discapacidad Basado iPad

Este protocolo de video describe un método sensible, confiable y rápido para evaluar los déficits neuromusculares en un modelo de ratón transgénico de esclerosis lateral amiotrófica.

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Mostramos una técnica para la bioluminiscencia in vivo en vivo y en el infrarrojo cercano de formación de imágenes de la neuritis óptica y la encefalitis en el modelo de encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) para la esclerosis múltiple en ratones SJL / J.

La bioluminiscencia e infrarrojo cercano de imagen de la neuritis óptica y la inflamación cerebral en el modelo de EAE de esclerosis múltiple en ratones

Análisis de la cinemática de la marcha en el plano sagital obtiene información muy precisa acerca de cómo se ejecuta el movimiento. Se describe la aplicación de estas técnicas para identificar los déficits de marcha para los ratones sometidos a desmielinización autoinmune mediada. Estos métodos pueden usarse para caracterizar los déficits de paso para otros modelos de ratón con locomoción deteriorada.

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La medición de la conducción nerviosa es una herramienta útil para evaluar modelos de neurodegeneración ratón pero es con frecuencia sólo se aplica para estimular el nervio ciático en miembros posteriores. Aquí, describimos una técnica para medir compuestos musculares potencial de acción (CMAP) en vivo en el ratón miembro anterior músculos inervados por el plexo braquial.

En Vivo Medición electrofisiológica de potencial de acción compuesto del músculo de las extremidades anteriores en modelos de ratón de la degeneración de la motoneurona

Se proporciona una tubería experimental para describir cuantitativamente el patrón locomotor de ratones que caminan libremente utilizando la caja de herramientas MouseWalker (MW), que va desde grabaciones de video iniciales y seguimiento hasta análisis posteriores a la cuantificación. Se emplea un modelo de lesión por contusión de la médula espinal en ratones para demostrar la utilidad del sistema MW.

Uso del MouseWalker para cuantificar la disfunción locomotora en un modelo de ratón de lesión de la médula espinal

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) sirve como modelo animal de esclerosis múltiple. En este artículo se describe un enfoque para la puntuación de la inflamación, desmielinización y lesión axonal de la médula espinal en EAE. Además, se presenta un método para cuantificar los niveles de luz de neurofilamentos solubles en el suero de ratones, lo que facilita la evaluación de la lesión axonal en ratones vivos.

Puntuación de la inflamación del sistema nervioso central, la desmielinización y la lesión axonal en la encefalomielitis autoinmune experimental

La encefalomielitis autoinmune experimental es uno de los modelos murinos de esclerosis múltiple más utilizados. En el protocolo actual, los ratones C57BL/6J de ambos sexos son inmunizados con el péptido glicoproteico de los oligodendrocitos de mielina, lo que resulta principalmente en paresia ascendente de la cola y las extremidades. Aquí discutimos el protocolo de inducción y evaluación de EAE.

Modelización de la esclerosis múltiple en los dos sexos: encefalomielitis autoinmune experimental inducida por MOG35-55

Este artículo presenta un protocolo para ejecutar el concepto de unidad de accidente cerebrovascular (mSU) altamente traslacional y probado de forma independiente en ratones de gran carrera. También proporciona un protocolo estandarizado para la ejecución de la escala focal experimental de ictus en ratones, que evalúa los déficits focales de ictus detectados incluso a largo plazo.

El protocolo de la Unidad de Accidente Cerebrovascular del Ratón con puntuación neurológica estandarizada para estudios traslacionales de accidente cerebrovascular del ratón

Aprende a medir la discapacidad neurológica progresiva en ratones infectados con TMEV mediante la prueba de Rotarod optimizada. Este protocolo objetivo evalúa funciones motoras y establece una línea base para probar terapias contra la esclerosis múltiple.

La medición de la discapacidad neurológica progresiva en un modelo de ratón de la esclerosis múltiple

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