Name: Ventana lateral crónica craneal Preparación Activa En Vivo Observación Siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: Aprende a preparar una ventana craneal lateral con oclusión permanente de la arteria cerebral media en ratones para microscopía intravital longitudinal. Este método permite estudiar cambios isquémicos agudos y crónicos post-ictus en vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

VP participa en el Programa de Científicos Clínicos Charité, financiado por la Charité - Universitätsmedizin Berlin y el Instituto de Salud de Berlín. TB es becario de movilidad postdoctoral de SNSF. Los autores reciben una beca de EinsteinStiftung/A-2012-153 para PV.

DECLARACIÓN DE ÉTICA: Los experimentos con seres animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlín, Alemania (G0298 / 13) y los criterios llegar, según sea el caso. Para este estudio, de 10 a 12 semanas de edad, machos C57BL / 6J fueron utilizados. 1. lateral crónica craneal Ventana Preparación <ol><li> Realizar la anestesia con una inyección subcutánea de ketamina (90 mg / kg) y xilazina (10 mg / kg). Prueba para la sedación adecuada con un estímulo doloroso. </li><li> Esterilizar los instrumentos quirúrgicos y campo quirúrgico con 70% de etanol. </li><li> Quitar el pelo del cuero cabelludo del cuello a los ojos usando una máquina de afeitar de roedores. </li><li> Fijar la cabeza en un marco estereotáxico. </li><li> Utilice dexpantenol pomada ocular en ambos ojos para evitar la deshidratación. </li><li> Limpiar el área quirúrgica para eliminar todos los pelos y esterilizarlo con 3 capas de 74,1% de etanol y 10% de 2-propanolol. </li><li> Realizar una línea mediaincisión desde el cuello hasta los ojos utilizando un bisturí. </li><li> Abarcar el colgajo de piel con 4 puntos de sutura tenting. </li><li> Retire cuidadosamente el periostio en el hemisferio izquierdo raspando con un escalpelo hasta el punto donde comienza el músculo temporal. NOTA: Esta preparación también sirve para crear una buena zona de adhesión para que el pegamento dental, que fija la cubierta de vidrio. </li><li> Realizar una craneotomía fronto-parietal con un diámetro de 4 mm por el adelgazamiento del cráneo en el borde del colgajo óseo utilizando un microtaladro. Aplicar una solución salina durante la perforación para evitar lesiones por calor. </li><li> Elevar el colgajo óseo con cánulas y quitarlo usando microforceps. </li><li> Lávense cuidadosamente y extensamente con solución salina. </li><li> Mezclar el pegamento dental hasta que tenga la consistencia adecuada y no es fluido (es decir, el pegamento no debe producir hilos más). Lo coloca en el hueso alrededor de la craneotomía. </li><li> Coloque una cubierta de vidrio con un diámetro de 6 mm en la cola preparada y fijarlo con THe resto del pegamento dental. Asegúrese de que es a prueba de agua. Espere hasta que el pegamento se seca y dura probándola con fórceps. NOTA: Un riego adicional acelera el proceso de curado. </li><li> Retire las suturas tenting y cerrar la herida con suturas de la piel. </li><li> Tire hacia arriba de la piel del costado del ratón. Insertar una aguja por vía subcutánea y sustituir suavemente por vía subcutánea 0,5 ml de solución salina estéril para mantener el equilibrio de líquidos. </li><li> Después de la cirugía, mantener a los animales en la jaula de recuperación se calienta durante 90 minutos. Espere hasta que los animales son completamente despierto antes de dejarlos sin vigilancia. Espere hasta que los animales se recuperaron por completo antes de devolverlos a una jaula con otros animales. </li><li> Repetir la sustitución volumen de solución salina por vía subcutánea después de aproximadamente 12 horas, como se describe en el paso 1.16. </li><li> Siempre aplique analgesia a través de sonda o directamente en la cavidad oral después de la cirugía (por ejemplo, paracetamol (10 mg / ml) u otros fármacos anti-inflamatorios no esteroideos). </li><li> Comprobar el<html> estado de los animales todos los días después de la cirugía, y siempre ofrecen puré de alimentos de origen animal en el suelo en una placa de Petri para que una alimentación sencilla y para evitar la pérdida de peso crítico después de la cirugía. NOTA: La microscopía intravital se puede realizar en el primer día después de la preparación ventana del cráneo. </li><li> Aplicar la anestesia con isoflurano y fijar el animal en un soporte de cabeza. Abra la sutura de la piel y limpiar la ventana con bastoncillos de algodón y una solución salina estéril. Después de 24 horas, la ventana del cráneo debe estar lleno de líquido cefalorraquídeo por ese punto en el tiempo, lo que permite obtener imágenes. Realizar las imágenes mediante el uso de protocolos de microscopía establecidos 18. </li></ol> 2. distal MCAO NOTA: El procedimiento MCAO debe realizarse aproximadamente 5 d después de la preparación de CW. Esto reduce al mínimo la interferencia de la reacción inmune causada por la preparación CW con la reacción inmune inducida por apoplejía. &quot;Src =&quot; / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg &quot;/&gt; Figura 1. Visión general de la MCAO distal. A. Esta es una buena visión general sobre los vasos antes de la operación. B. Los vasos después del primer contacto bipolar. C. Los vasos después de la segunda contacto bipolar. D. La visión general acerca de los buques, que ahora están completamente cerrados. E. resumen final con menor aumento. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54701/54701fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a> <ol><li> Anestesiar a los ratones usando una máscara de anestesia y un régimen anestésico apropiado, en consulta con el personal veterinario (por ejemplo, la inducción con 1,5 - 2%, isoflurano y mantenimiento con 1,0 - 1,5% isoflurano en 2/3 N 2 O y 1/3 O 2 a través un vaporizador). </li><li> Afeitarse y quitar el pelo y la desinfección de la piel y el pelo que rodea con un agente apropiado (por ejemplo, el 70% de alcohol etílico), y secarlo después. </li><li> Mantener la temperatura corporal de los ratones a 36,5 ° C ± 0,5 ° C durante la cirugía. Una almohadilla térmica controlada retroalimentación, calentado según la temperatura rectal del ratón, es muy recomendable. </li><li> Colocar el animal en la posición lateral. Fijar la nariz de la máscara de anestesia y ajustar la concentración de isoflurano al 1,0 - 1,5%. </li><li> Aplique un ungüento húmedo (dexpantenol) para ambos ojos. </li><li> Utilice la incisión de la piel hecha para la preparación de CW. </li><li> separar suavemente la piel e identificar el músculo temporal por debajo. </li><li> Ajustar la energía del generador de alta frecuencia (5-7 W) y utilizar el modo bipolar. </li><li> Utilice las pinzas de electrocoagulación y retirar con cuidado el músculo temporal del cráneo, la creación de un colgajo de músculo, sin eliminar totalmente el músculo. </li><li> Identificar la MCA por debajo del cráneo transparente en la parte rostral del área temporal, dorsal a la retro-orbital sinusal. Si la bifurcación MCA no se puede identificar, tratar de identificar el buque más rostral. </li><li> Delgada del cráneo por encima de la rama de MCA con un microtaladro mientras continua el riego para evitar el daño por calor. </li><li> Levantar el hueso con cánulas y quitarlo con microforceps. </li><li> Disminuir la energía del generador de alta frecuencia a 3-5 W. </li><li> El enfoque de la arteria desde arriba y suavemente tocarlo con las pinzas bipolares en ambos lados sin levantar el vaso. </li><li> Coagular la arteria proximal y distal a la bifurcación del vaso. </li><li> Espere durante 30 segundos, y luego tocar la arteria suavemente para asegurar que el flujo sanguíneo se interrumpe de forma permanente. Repetir la electrocoagulación si se observa una recanalización. </li><li> Fijar el músculo temporal con 1 o 2 puntos de sutura en la inserción del músculo para cubrir el defecto óseo, si es posible. </li><li> Suturar la herida y colocar al animal en el cuadro de recuperación climatizada. En general, la recuperación de los animales rápidamente después anest volátileshesia. </li><li> Para la sustitución de volumen, se aplican por vía subcutánea 0,5 ml de solución salina estéril, como se describe en el paso 1,16. </li><li> Después de la cirugía, permitir que los animales permanecen en la jaula de recuperación se calienta durante 90 minutos. Espere hasta que los animales son conscientes antes de dejarlos sin vigilancia. Sólo devolverlos a una jaula con otros animales cuando están completamente recuperados. </li><li> Repetir la sustitución de volumen, como se explica en el paso 1.16, después de 12 horas. </li><li> Aplicar la analgesia postoperatoria través del agua potable (por ejemplo, paracetamol (10 mg / ml) u otros fármacos anti-inflamatorios no esteroideos). </li><li> Compruebe el estado de salud de los animales todos los días después de la cirugía. Proporcionar alimentos animales puré en una placa de Petri en el suelo para simplificar el comer y para reducir al mínimo la pérdida de peso postoperatorio. </li></ol> 3. Tratamiento Sham <ol><li> Realizar todos los procedimientos de forma idéntica a los pasos 1 y 2 descritos anteriormente, incluyendo CW-preparación-excepto que no coagular el ar cerebral media expuestabatería. </li></ol>

<ol><li>Mukherjee, D., Patil, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+the+global+burden+of+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and the global burden of stroke.</a> World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).</li>
<li>Ebinger, M., Prüss, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+use+of+ambulance-based+thrombolysis+on+time+to+thrombolysis+in+acute+ischemic+stroke%3A+a+randomized+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial.</a> JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).</li>
<li>Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prehospital+thrombolysis%3A+a+manual+from+Berlin%5BTitle%5D)+AND+%22J+vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin.</a> J vis Exp. (81), e50534(2013).</li>
<li>Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lausanne+Stroke+Registry%3A+analysis+of+1%2C000+consecutive+patients+with+first+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke.</a> Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).</li>
<li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li>
<li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li>
<li>Meairs, S., Wahlgren, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stroke+research+priorities+for+the+next+decade--A+representative+view+of+the+European+scientific+community%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community.</a> Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).</li>
<li>Rosamond, W., Flegal, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2007+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).</li>
<li>Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+science+of+stroke%3A+mechanisms+in+search+of+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The science of stroke: mechanisms in search of treatments.</a> Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).</li>
<li>Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathobiology+of+ischaemic+stroke%3A+an+integrated+view%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view.</a> Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).</li>
<li>Dirnagl, U., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Found+in+Translation%3A+Preclinical+Stroke+Research+Predicts+Human+Pathophysiology%2C+Clinical+Phenotypes%2C+and+Therapeutic+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes.</a> Stroke. , (2014).</li>
<li>Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+heralds+secondary+nigral+lesion+after+brain+ischemia+in+mice%3A+a+secondary+time+window+for+neuroprotection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection.</a> J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).</li>
<li>Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+polished+and+reinforced+thinned-skull+window+for+long-term+imaging+of+the+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li>
<li>Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term%2C+high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
<li>Iadecola, C., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microcircualtion--fantastic+voyage%3A+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The microcircualtion--fantastic voyage: introduction.</a> Stroke. 44 (6), Suppl 1 83(2013).</li>
<li>Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cortical+angiome%3A+an+interconnected+vascular+network+with+noncolumnar+patterns+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosc%22%5BJournal%5D)">The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow.</a> Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).</li>
<li>Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+microscopy+as+a+tool+to+study+blood+flow+and+neurovascular+coupling+in+the+rodent+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).</li>
<li>Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy+of+the+mouse+brain+microcirculation+using+a+closed+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window.</a> J Vis Exp. (45), (2010).</li>
<li>Rosell, A., Agin, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+mice%3A+are+we+ready+to+assess+long-term+functional+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome.</a> Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).</li>
<li>Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+intravital+thinned+skull+and+cranial+window+approaches+to+study+CNS+immunobiology+in+the+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Intravital%22%5BJournal%5D)">Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex.</a> Intravital. 3 (2), (2014).</li>
<li>Balkaya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+post-stroke+behavior+in+mouse+models+of+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).</li>
<li>Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+long-term+functional+outcome+in+a+murine+model+of+mild+brain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia.</a> J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).</li>
<li>Freret, T., Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+deficits+after+distal+focal+cerebral+ischemia+in+mice%3A+Usefulness+of+adhesive+removal+test%5BTitle%5D)+AND+%22Beh+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test.</a> Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).</li>
<li>Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RODENT+STROKE+MODEL+GUIDELINES+FOR+PRECLINICAL+STROKE+TRIALS+%281ST+EDITION%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Stroke+Trans+Med%22%5BJournal%5D)">RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION).</a> J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).</li>
<li>Florian, B., Vintilescu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+hypothermia+reduces+infarct+volume+in+aged+rats+after+focal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia.</a> Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).</li>
<li>Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hyperthermia+on+infarct+volume+in+focal+embolic+model+of+cerebral+ischemia+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats.</a> Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).</li>
<li>Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-regulated+model+of+focal+ischemia+in+the+mouse%3A+a+study+with+histopathological+and+behavioral+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes.</a> Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).</li>
<li>Shin, H. K., Nishimura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+induced+hypertension+improves+blood+flow+and+oxygen+metabolism+in+transient+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia.</a> Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).</li>
<li>Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isoflurane+induced+prolonged+protection+against+cerebral+ischemia+in+mice%3A+a+redox+sensitive+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism.</a> Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).</li>
<li>Gertz, K., Priller, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+activity+improves+long-term+stroke+outcome+via+endothelial+nitric+oxide+synthase-dependent+augmentation+of+neovascularization+and+cerebral+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow.</a> Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).</li>
<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+the+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Accidente cerebrovascular es una de las principales causas de discapacidad a largo plazo y la muerte en todo el mundo 1. Más allá de tratamiento agudo, la investigación de nuevos enfoques y mecanismos para acelerar y mejorar la recuperación después del accidente cerebrovascular sigue siendo un objetivo primordial médica 7. investigadores ictus experimentales emplean con frecuencia modelos de roedores de isquemia cerebral focal. De hecho, los modelos que inducen transitoria o permanente MCAO imitan ...

accidente cerebrovascular se encuentra entre las principales causas de discapacidad y muerte a largo plazo en todo el mundo1, ocupando el segundo lugar después de la enfermedad coronaria. Además, el accidente cerebrovascular es la principal causa de discapacidad a largo plazo, lo que subraya su tremendo impacto socioeconómico6-8. Más allá del tratamiento agudo, la investigación de nuevos enfoques y mecanismos para acelerar y mejorar la recuperación después de un accidente cerebrovascular sigue siendo un objetivo médico primordial7. 
En las últimas décadas, los datos de la investigación experimental sobre el ictus han contribuido sustancialmente a la comprensión de las complejas cascadas fisiopatológicas desencadenadas por la isquemia9,10. La excitotoxicidad, la apoptosis, la despolarización periinfarto y la inflamación han sido identificadas como los mediadores más relevantes de la muerte celular tras la isquemia cerebral focal. Además, utilizando modelos animales de isquemia cerebral, se han desarrollado y validado conceptos importantes, modalidades diagnósticas y enfoques terapéuticos (por ejemplo, "penumbra" y trombólisis)11.
La disponibilidad de modelos experimentales de accidente cerebrovascular, combinados con modalidades de imagen no invasivas (por ejemplo, imágenes por resonancia magnética (RM), tomografía computarizada o análisis de contraste de moteado láser), permite al investigador investigar los cambios fisiopatológicos hiperagudos y crónicos inducidos por la agresión isquémica de manera longitudinal12. Junto con el estudio del perfil espacio-temporal de la lesión en evolución, se pueden investigar los cambios que se asemejan a la plasticidad neuronal y correlacionarlos con los resultados funcionales y los hallazgos histológicos. En los últimos años se han producido nuevos avances metodológicos utilizando la combinación de modelos de isquemia cerebral y microscopía in vivo mediante ventanas craneales13. Estas nuevas técnicas permiten a los investigadores analizar la unidad neurovascular a nivel celular y molecular, con gran poder analítico en las fases aguda, subaguda y crónica tras la isquemia cerebral focal14. Además, la microscopía in vivo de la dinámica microcirculatoria ha revelado nuevos aspectos de la función de la microvasculatura cerebral y la angioarquitectura, con una importante relevancia fisiopatológica15-17. 
En este protocolo, presentamos cómo realizar una preparación de CW crónica lateral al seno sagital y cómo inducir quirúrgicamente un accidente cerebrovascular distal debajo de la ventana. Este modelo de ratón se puede aplicar a la obtención de imágenes secuenciales de cambios agudos, subagudos y crónicos después de la isquemia cerebral focal mediante epiiluminación, escaneo láser confocal y microscopía intravital de dos fotones.

<table><tbody><tr><td>Microscopio quirúrgico binocular</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Fuente de luz para microscopio</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 LED</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica con sonda rectal</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Marco estereotáctico</td><td>Kopf</td><td>Modelo 930</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de anaethesia para isoflurano</td><td>Draeger</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Pinzas Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas Dumont #7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas bipolares</td><td>Erbe</td><td>20195-501</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas bipolares&nbsp;</td><td>Erbe&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 20195-022</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microdrill</td><td>FST&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 18000-17&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>5-0 sutura de seda</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7-0 sutura de seda</td><td>Feuerstein,Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-0 sutura de seda</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cámara de recuperación veterinaria</td><td>Peco Services</td><td>V1200</td><td></td></tr></tbody></table>

ventana lateral crónica craneal preparación activa en vivo observación siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Isquemia cerebral focal (es decir, accidente cerebrovascular isquémico) puede causar lesión cerebral importante, lo que lleva a una pérdida grave de la función neuronal y por lo tanto a un anfitrión de motor y discapacidades cognitivas. Su alta prevalencia supone una grave carga para la salud, como accidente cerebrovascular es una de las principales causas de discapacidad a largo plazo y la muerte en todo el mundo 1. Recuperación de la función neuronal es, en la mayoría de los casos, sólo parcial. Hasta ahora, las opciones de tratamiento son muy limitadas, en particular, debido a la estrecha ventana de tiempo para la trombólisis 2,3. La determinación de métodos para acelerar la recuperación del accidente cerebrovascular sigue siendo un objetivo primordial médica; sin embargo, esto se ha visto obstaculizada por la insuficiencia de conocimientos mecánicos en el proceso de recuperación. investigadores ictus experimentales emplean con frecuencia modelos de roedores de isquemia cerebral focal. Más allá de la fase aguda, investigación del accidente cerebrovascular se centra cada vez más en la fase subaguda y crónica después de una isquemia cerebral. La mayoría de investigadores aplican ictus permanente o tranoclusión de la MCA sient en ratones o ratas. En los pacientes, las oclusiones de la MCA se encuentran entre las causas más frecuentes de accidente cerebrovascular isquémico 4. Además de la oclusión proximal de la MCA mediante el modelo de filamento, oclusión quirúrgica de la MCA distal es probablemente el modelo más utilizado en la investigación del accidente cerebrovascular experimental 5. La oclusión de una distal (a la ramificación de las arterias lenticulo-estriados) rama MCA normalmente detiene el cuerpo estriado y afecta principalmente a la neocorteza. oclusión de los vasos puede ser permanente o transitoria. Alta reproducibilidad del volumen de la lesión y muy bajas tasas de mortalidad con respecto a los resultados a largo plazo son las principales ventajas de este modelo. Aquí, demostramos cómo llevar a cabo una preparación lateral crónica ventana del cráneo (CW) al seno sagital, y después cómo quirúrgicamente inducir un accidente cerebrovascular distal debajo de la ventana usando un enfoque craneotomía. Este enfoque se puede aplicar para la imagen secuencial de los cambios agudos y crónicos después de la isquemia a través deepi-iluminación, láser confocal de barrido, y de dos fotones microscopía intravital.

La línea de tiempo y los resultados representativos se muestran en las figuras 2 y 3. La preparación de ventana del cráneo, con una pequeña ventana lateral craneal al seno sagital superior (Figura 2 B, C, D) se traduce en una tasa de mortalidad y morbilidad muy baja cuando se lleva a cabo por un cirujano experimentado. Todos los 10 animales sobrevivieron, y todos CW crónica se podría utilizar para obtener imágenes de alta calidad, inclus...

oclusión quirúrgica de una rama distal de la arteria cerebral media (MCAO) es un modelo frecuentemente usado en investigación del accidente cerebrovascular experimental. Este manuscrito describe la técnica básica de la MCAO permanente, combinado con la inserción de una ventana craneal lateral, que ofrece la oportunidad para microscopía intravital longitudinal en ratones.

Ventana lateral crónica craneal Preparación Activa En Vivo Observación Siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

El objetivo general de este procedimiento es la preparación de una ventana craneal lateral combinada con una oclusión permanente de la arteria cerebral media. Facilitar la microscopía intravital longitudinal en ratones. Este método puede ayudar a investigar y responder preguntas clave en el campo de la investigación de la isquemia cerebelosa.La principal ventaja de esta técnica es que ofrece imágenes in vivo de los cambios agudos y crónicos después de un accidente cerebrovascular. Comience administrando anestesia de acuerdo con un protocolo aprobado para animales. Asegúrese de que se haya alcanzado un plano quirúrgico de anestesia administrando un estímulo de dolor, como un pellizco en el dedo del pie, y notando la ausencia de una reacción.A continuación, use una afeitadora para roedores para quitar el pelaje desde el cuello hasta los ojos. Fije la cabeza del ratón en un marco estereotáxico. A continuación, cubra los ojos con un ungüento oftálmico para evitar la deshidratación.Limpie el área afeitada para eliminar todos los vellos y esterilice el cuero cabelludo con tres aplicaciones de 74,1% de etanol y 10% de propranolol en tubo. Con un bisturí estéril, haga una incisión en la línea media desde el cuello hasta los ojos. A continuación, cubra el colgajo de piel con cuatro suturas de carpa.A continuación, raspe con cuidado el periostio del lado izquierdo del cráneo. Y retíralo hasta el punto donde comienza el músculo temporal. Ahora use un micro taladro para adelgazar el cráneo en el borde del colgajo de hueso.Crear una craneotomía frontoparietal de cuatro milímetros de diámetro. Aplique solución salina mientras perfora para evitar lesiones por calor. Una vez perforado, elevar el colgajo óseo con cánulas y retirarlo con micropinzas.Riegue el área cuidadosa y abundantemente con solución salina. Mezcle el pegamento dental hasta que tenga la consistencia adecuada. Luego aplíquelo en el hueso alrededor de la craneotomía.Coloque un cubreobjetos de seis milímetros de diámetro sobre el pegamento preparado. Y fíjalo con el resto del pegamento dental. El riego acelera el proceso de curado y garantiza que el sellado sea hermético.Pruebe el pegamento dental con pinzas para asegurarse de que esté seco y duro. Una vez que el pegamento se haya curado, retire las suturas de la carpa y cierre la herida con suturas cutáneas. Administrar 0,5 mililitros de solución salina estéril por vía subcutánea para el equilibrio de líquidos.Después de la cirugía, monitoree al animal en una jaula de recuperación con calefacción hasta que se recupere de la anestesia. Asegúrese de que el animal esté completamente recuperado antes de devolverlo a una jaula con otros animales. Administrar siempre analgesia después de la cirugía.Aquí, se agregan 10 miligramos por mililitro de acetaminofén al agua potable. Siempre proporcione puré de comida para animales en una placa de Petri colocada en el piso para que comer sea simple y para evitar la pérdida de peso crítica después de la cirugía. La microscopía intravital se puede realizar el primer día después de la preparación de la ventana craneal.Aplique la anestesia isoflurano de acuerdo con un protocolo aprobado. Fije al animal en un soporte para la cabeza y asegúrese de que el cono de la nariz esté bien ajustado. Abra la sutura cutánea y limpie la ventana con bastoncillos de algodón y solución salina estéril.Después de 24 horas, la ventana craneal debe llenarse con líquido cefalorraquídeo, lo que permite la obtención de imágenes. Realizar el procedimiento de oclusión de la arteria cerebral media cinco días después de la preparación de la ventana craneal, cuando la respuesta inmunitaria al procedimiento haya disminuido. Aquí se muestra una descripción general después de la craneotomía para la inducción de MCAO.La foto intraoperatoria muestra los vasos después del primer y segundo contacto bipolar. El ACM distal aparece completamente ocluido. Esta imagen proporciona una visión general final utilizando un aumento más bajo.Después de inducir la anestesia quirúrgica con isoflurano como antes, afeite el pelaje en el área entre el ojo y la oreja, aplique ungüento oftálmico en ambos ojos y desinfecte la piel y el pelaje circundante con una solución de alcohol, como antes. Coloque el mouse sobre una almohadilla térmica controlada por retroalimentación para mantener la temperatura corporal. Coloque al animal en posición lateral y fije la nariz en la máscara de anestesia.Separe suavemente la piel de la incisión hecha para la preparación de la ventana craneal e identifique el músculo temporal que se encuentra debajo. A continuación, ajuste la energía del generador de alta frecuencia y use el modo bipolar. Use pinzas de electrocoagulación para levantar cuidadosamente el músculo temporal del cráneo, creando un colgajo muscular sin extirpar totalmente el músculo.A continuación, identifique la arteria cerebral media por debajo del cráneo transparente en la parte rostral del área temporal. Dorsal al seno retroorbitario. Adelgace el cráneo por encima de la rama MCA con un micro taladro, mientras riega continuamente para evitar daños por calor.A continuación, levanta el hueso y retíralo con micropinzas. Disminuya la energía del generador de alta frecuencia a tres a cinco vatios. Luego, acérquese a la arteria desde arriba y tóquela suavemente con las pinzas bipolares en ambos lados sin levantar el vaso.Espere treinta segundos y luego toque suavemente la arteria con la punta de las pinzas bipolares para asegurarse de que el flujo sanguíneo se interrumpa permanentemente. Después de la oclusión de MCA, fije el músculo temporal con uno o dos puntos en la inserción del músculo para cubrir el defecto óseo. Luego, sutura la herida y coloca al animal en la jaula caliente hasta que se recupere.Esta resonancia magnética se realizó 24 horas después de la cirugía simulada y no muestra ningún tejido cortical lesionado. Mientras que esta resonancia magnética, realizada 24 horas después de la isquemia, muestra claramente la lesión isquémica indicada por un asterisco, ubicada debajo de la ventana craneal crónica. Esta imagen muestra imágenes de epifluorescense intravital e imágenes de dos fotones de la vasculatura cortical para monitorear los cambios en la microcirculación.El volumen del infarto evaluado mediante resonancia magnética a las 24 y 96 horas después de la isquemia, muestra un volumen medio de la lesión de 13,16 milímetros cúbicos a las 24 horas, y de 12,2 milímetros cúbicos a las 96 horas. Una vez dominado, la preparación de la ventana craneal se puede realizar en unos 30 minutos. Y el MCAO en unos 15 minutos.Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la resonancia magnética o la microscopía de doble fotón para responder preguntas adicionales. Estas nuevas técnicas permiten a los investigadores investigar una unidad neurovascular a nivel molecular y celular. Y muy particularmente, en el cerebro vivo.

lateral-chronic-cranial-window-preparation-enables-vivo-observation

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

En este material de vídeo y complementaria, se muestra un protocolo para la...

Imagen crónica de la corteza visual del ratón usando una preparación de Diluido-cráneo

Microscopia intravital para seguir los acontecimientos hemodinámicos e inflamatorios temporal y espacial en la microcirculación pial.

Microscopia intravital de la microcirculación del cerebro del ratón con una ventana craneal cerrado

El intraluminal de arteria cerebral media oclusión (MCAO) es el modelo más empleado entre los modelos experimentales de ictus isquémico. Aquí vamos a demostrar todo el modelo en detalle con la guía de la flujometría láser Doppler, y sus resultados representativos.

Intraluminal la arteria cerebral media de oclusión (MCAO) Modelo para el ictus isquémico con Orientación flujometría láser Doppler en ratones

Este artículo describe un método para la visualización de las arterias cerebrales de rata a través de una ventana craneal mediante craniectomía temporal con el fin de ver las partes proximales de la arteria cerebral media...

Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

Con el fin de entender la fisiopatología del accidente cerebrovascular, es importante utilizar modelos fiables. En este trabajo se va a describir uno de los modelos de accidente cerebrovascular de uso más frecuente en los ratones, llamado el medio modelo de oclusión de la arteria cerebral (MCAO) (también llamado el filamento de sutura intraluminal o modelo) con reperfusión.

Técnica quirúrgica para la oclusión de la arteria cerebral media y la reperfusión del movimiento inducidos en ratones

Aquí se presenta un protocolo para la implantación de una ventana craneal crónica para la obtención de imágenes longitudinales de células cerebrales en ratones despiertos y con la cabeza restringida.

Implantación de una ventana craneal para imágenes repetidas in vivo en ratones despiertos

Este protocolo demuestra un modelo único de brazada de ratón con un infarto de tamaño medio y una excelente tasa de supervivencia. Este modelo permite a los investigadores preclínicos de accidentes cerebrovasculares extender la duración de la isquemia, utilizar ratones de edad avanzada y evaluar los resultados funcionales a largo plazo.

Un modelo de oclusión transcraneal modificado de la arteria cerebral media para estudiar los resultados del accidente cerebrovascular en ratones ancianos

En este trabajo, presentamos un protocolo para establecer un modelo de oclusión distal de la arteria cerebral media (dMCAO) mediante electrocoagulación transcraneal en ratones C57BL/6J y evaluamos el comportamiento neurológico y las características histopatológicas posteriores.

Inducción de ictus isquémico agudo en ratones mediante la técnica de oclusión de la arteria media distal

Este protocolo describe un método quirúrgico en dos fases para crear una ventana craneal grande, resellable y que salve la duramadre en ratones. Esta técnica permite registros electrofisiológicos crónicos y multimodales de redes profundas del cerebro distribuido, como la Red de Modos Predeterminados, durante varias semanas.

Protocolo quirúrgico para una ventana craneal grande y resellable que permite grabaciones electrofisiológicas longitudinales y multimodales de la red de modo predeterminado del ratón

El objetivo de este estudio fue establecer un método reproducible para realizar una craneectomía seguida de una oclusión permanente y selectiva de la arteria cerebral media en ratas, para su aplicación en estudios experimentales de déficits de memoria motora y espacial.

Oclusión selectiva y permanente de la arteria cerebral media en ratas: un enfoque experimental para estudiar déficits de memoria motora y espacial

Aprende a preparar una ventana craneal lateral con oclusión permanente de la arteria cerebral media en ratones para microscopía intravital longitudinal. Este método permite estudiar cambios isquémicos agudos y crónicos post-ictus en vivo.

Ventana lateral crónica craneal Preparación Activa En Vivo Observación Siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones (Video) | JoVE Journal

Ventana lateral crónica craneal Preparación Activa En Vivo Observación Siguiendo distal de la arteria cerebral media oclusión en ratones

Explorar más videos