Name: La visualización del Tejido Interrenal androgénica, y su microambiente vascular en el pez cebra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Aprende a detectar células esteroidogénicas diferenciadas en Danio rerio mediante un ensayo enzimático de montaje completo. Este método rápido permite visualizar el microambiente vascular del tejido interrenal en estudios de biología del desarrollo endocrino.

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Agradecemos al Prof. Christoph Englert y el Prof. Didier Stainier para regalar la Tg (wt1b: GFP) LI1 y Tg (kdrl: EGFP) s843 cepas, respectivamente, y el Fondo para el pez cebra Taiwán Core para proporcionar Tg (kdrl: mCherry) CI5. Este estudio fue apoyado por subvenciones del Ministerio de Ciencia y Tecnología (96-2628-B-029-002-MY3, 101-2313-B-029-001, 102-2628-B-029-002-MY3 de Taiwán, 102- 2321-B-400-018).

Ética Declaración: Todos los procedimientos experimentales en el pez cebra fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucional de la Universidad de Tunghai (Aprobación del IRB NO 101-12.) Y llevada a cabo de conformidad con las directrices aprobadas. 1. Soluciones de archivo para 3β-HSD actividad enzimática de tinción <ol><li> Preparar trans-dehydroandrosterone [10 mg / ml en sulfóxido de dimetilo (DMSO)]. </li><li> Preparar β-nicotinamida adenina dinucleótido hidrato (1,2 mg / ml en tampón fosfato 0,1 M, pH 7,2). </li><li> Preparar nicotinamida (vitamina B3, 50 mg / ml en H 2 O). </li><li> Preparar azul tetrazolio 4-nitro (50 mg / ml en 70% de dimetilformamida). </li><li> Alícuotas todos estos componentes en tubos de microcentrífuga y almacenar a -20 ° C. NOTA: En nuestra experiencia, los ciclos de congelación y descongelación de las alícuotas de todas las soluciones mencionadas no afectan a la intensidad de la 3β-HSD actividad de las manchas. </li></ol> 2. Worificio de montaje en 3β-HSD actividad de tinción NOTA: La actividad enzimática 3β-HSD es detectable en embriones de pez cebra tan pronto como 28 horas después de la fertilización (hpf) cuando se cultivan a 28,5 ° C, lo cual es consistente con la aparición de la expresión de ARNm de hsd3b1 2,7. El protocolo de todo el montaje en la actividad tinción 3β-HSD en este estudio se basa en un método descrito previamente 8 y estaba decidido a tener éxito en el pez cebra en desarrollo hasta 7 días después de la fecundación 9. Para analizar el microambiente vascular del tejido steroidogenic interrenal, todo el montaje 3β-HSD actividad tinción se debe aplicar a las líneas transgénicas que expresan fluorescencia de endotelio específica, como la Tg (kdrl: EGFP) s843 14 y Tg (kdrl: mCherry) CI5 15 . Para analizar el tejido androgénica interrenal teniendo en cuenta el desarrollo del riñón pez cebra, 3β-HSD actividad de tinción puede ser aplied a la Tg (wt1b: GFP) pescado LI1 16, donde se delinea la formación de los glomérulos y túbulos pronéfricos. <ol><li> Se trata el pez cebra en desarrollo mediante su incubación en 0,03% feniltiourea en agua de huevo (sal de 0,06 mg / L arrecife en agua desionizada), a partir de una etapa entre 12 y 24 hpf, para inhibir la formación de pigmento. </li><li> Fijar embriones dechorionated o larvas en (A) 4% de paraformaldehído (PFA) en solución salina tamponada con fosfato (PBS) suplementado con 0,1% de Tween 20 (PFAT) durante 1 hora a temperatura ambiente (RT) o (B) 2% PFAT durante la noche a 4 ° C o durante 2 horas a 4 ° C, seguido por 4 horas a RT. Precaución: PFA es tóxico por inhalación y por contacto con la piel. Es destructivo para la piel, las mucosas, los ojos y el tracto respiratorio superior. </li><li> Lavar el embriones 4x para 10 min con PBS suplementado con 0,1% de Tween 20 (PBST) a TA. NOTA: Es muy importante no secar las muestras, mientras que el cambio de las soluciones de lavado. </li><li> Recién preparar el stasolución caniza antes de las reacciones (Tabla 1). Preparar, vórtice, y partes de centrifugadoras A y B en tubos separados. NOTA: La adición de todos los componentes directamente en un único tubo provocaría la precipitación severa. </li><li> Añadir la solución de la totalidad de la parte A a la totalidad de la solución de la parte B, mezclar bien para preparar la solución de tinción, e inmediatamente distribuir 1 ml en cada tubo de microcentrífuga que contiene embriones fijos y lavadas. </li><li> Envolver tubos de microcentrífuga con papel de aluminio para protegerlas de la luz y el lugar ya sea en un rotador o una plataforma de agitación durante agitación suave a temperatura ambiente. </li><li> Empíricamente determinar el tiempo de reacción mediante el control de las señales a través de microscopía cromogénicos. precipitaciones ligeras van a desarrollar con el tiempo; sin embargo, que no interfieran con el proceso de reacción. NOTA: Para los embriones fijan en 28 HPF, tinción a 25 ° C durante 4 horas genera una señal clara en el tejido interrenal. </li><li> Detener la reacción lavando 4 veces durante 10 minutos en PBST. yof no se requiere un mayor análisis de inmunohistoquímica (IHC), posterior a fijar los embriones teñidos con 4% PFAT durante 60 minutos a temperatura ambiente. De lo contrario, almacenar los embriones lavados a 4 ° C hasta su uso posterior. </li><li> Para todo el montaje de microscopía, borrar los embriones teñidos, después de la fijada, y se lavó con 50% de glicerol en PBS, orientarlos con el lado dorsal hacia arriba sobre un portaobjetos, y observar el uso de un microscopio vertical bajo iluminación de campo claro. NOTA: Para hacer una imagen de alta resolución de la morfología de los tejidos interrenal, el análisis del embrión teñido con actividad 3β-HSD y deyolked plana de montaje se recomienda. A medida que el tejido androgénica interrenal se coloca justo encima del saco vitelino, un análisis ventral plana de montaje del tejido interrenal permite una observación directa y clara de la morfología interrenal 17. </li></ol> 3. Análisis IHC de 3β-HSD embriones Actividad manchados NOTA: Para analizar el microambiente vascular de la steroidogenic tejido, los embriones de actividad manchados de 3β-HSD con un indicador fluorescente específico del endotelio transgénico se someten a transversal vibratome seccionamiento y posterior análisis IHC 12,18. <ol><li> Posterior a la fijación <ol><li> Post-fijar los embriones teñidos con actividad 3β-HSD y se lavó con 2% PFA suplementado con 1% de Triton X-100 durante 1 hora a 4 ° C y lavar 4x para 10 min en PBS que contenía 1% de Triton X-100 (PBSTx) a TA. </li></ol></li><li> Incorporación <ol><li> Prepare un 4% bajo punto de fusión de agarosa al disolver la agarosa en PBS a 95 ° C, alícuota en tubos de microcentrífuga y se almacena a 4-8 ° C. </li><li> Fundir una parte alícuota del 4% de agarosa de bajo punto de fusión a 70 ° C durante 10 minutos, y luego mantener la alícuota a 47 ° C. Incrustar cada embrión en fundido 4% bajo punto de fusión de agarosa en un casquillo individual de un tubo de microcentrífuga de 1,5 ml que sirve como un molde y se deja enfriar hasta que solidifique. </li></ol></li><li> vibratome Seccionamiento <ol><li> Pegue un trozo de cinta de papel a la p secalatform de la vibratome. </li><li> Retire el bloque de agarosa endurecido del molde por una hoja de afeitar. Aplicar pegamento de la cinta de papel en la plataforma, y ​​fijar el bloque de agarosa en la cinta de papel, con la cara anterior de la muestra hacia arriba. Recorte el bloque de agarosa a una forma trapezoidal del prisma, con aproximadamente 4 mm y 8 mm a cada lado de las facetas superior e inferior, respectivamente. </li><li> Enjuague el bloque de agarosa que contiene la muestra con PBS frío suplementado con 0,5% de Triton X-100 (0,5% PBSTx) mediante el uso de un cuentagotas. </li><li> Cortar el bloque de agarosa en 100 micras secciones de acuerdo con el manual de instrucciones de la vibratome. Constantemente enjuagar el bloque de agarosa para evitar que se seque. A medida que se corta cada rebanada, quitarlo de la vibratome utilizando una aguja de 26 G jeringa, y transferir a una placa que contiene punto frío 0,5% PBSTx (500 l / pocillo). </li><li> Recoger las secciones de tejido de actividad positivos 3ß-HSD marcando con un microscopio de disección, y transferir las secciones por un pipunta pette con su extremo de corte (alrededor de 1 mm de diámetro interior en la apertura) en una placa de 96 pocillos que contenía 0,5% frío PBSTx (150 l / pocillo). Las muestras de tejido generalmente se disocian a partir del bloque de agarosa después de este paso. </li></ol></li><li> Permeabilización y Lavado <ol><li> Lavar las rodajas 6x durante 15 minutos en 0,5% PBSTx a TA, 10 min en PBS, y 4x para 10 min en PBS suplementado con 1% de albúmina de suero bovino / 1% de DMSO / 0,1% de Triton X-100 (PBDTx). </li></ol></li><li> El bloqueo <ol><li> Incubar las rebanadas de suero 1 hr en 2% de ternera fetal (FCS) en PBDTx a TA. </li></ol></li><li> Reacción primaria de anticuerpos <ol><li> Se incuban las rodajas durante 1,5 días en PBDTx que contienen un anticuerpo primario (por ejemplo, policlonal de conejo anti-fibronectina humana y de ratón anti-humano quinasa de adhesión focal) a 4 ° C. </li></ol></li><li> Lavado <ol><li> Lavar las rodajas de 6x para 10 min en PBDTx a TA. </li></ol></li><li> El bloqueo <ol><li> Se incuban las rodajas de 1 hora en 2% de FCS en PBDTX a TA. </li></ol></li><li> Reacción secundaria de anticuerpos <ol><li> Incubar las rebanadas de 1,5 días en PBDTx que contienen un anticuerpo secundario (fluoróforo conjugado de cabra anti-conejo o anti-IgG de ratón) a 4 ° C. </li></ol></li><li> Lavado <ol><li> Lavar las rodajas de 6x para 10 min en PBDTx a TA y 4x para 10 min en PBST a TA. NOTA: Para el análisis microscópico confocal, desactive las muestras con 50% de glicerol en PBS. </li></ol></li></ol> 4. Análisis Confocal <ol><li> Observar todo el embrión de montaje y la sección por un microscopio confocal equipado con 10X / 20X y 0,5 / 0,75 lente objetivo. </li><li> Para la detección simultánea de la fluorescencia y la tinción 3β-HSD, ajuste el modo multipista de la siguiente manera: 488 nm láser de argón y 505 a 530 nm de paso de banda de filtro para la detección de GFP; 543 nm láser helio-neón y 560 a 615 nm de paso de banda de filtro para la detección de mCherry; y transmitida canal de luz para la detección de manchas 3β-HSD.El tamaño del agujero de alfiler es de 1 unidad Airey, y la resolución es de 1.024 x 1.024 píxeles. </li><li> Montar las pilas z (con intervalo de 6 micras) como una proyección en 3D, y combinar la proyección y el campo brillante, utilizando el software incorporado confocal. </li></ol>

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<li>Chiu, C. H., Chou, C. W., Takada, S., Liu, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+fibronectin+signaling+requirements+of+the+zebrafish+interrenal+vessel%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and fibronectin signaling requirements of the zebrafish interrenal vessel.</a> PLoS One. 7, e43040(2012).</li>
</ol>

Los autores no tienen intereses financieros contrapuestos que declarar.

La intensidad de la señal de la actividad 3β-HSD aumentó durante el curso de la reacción. se detectaron señales claras de la actividad 3β-HSD después de 4 horas de reacción para las etapas de 28 hpf en adelante. Sin embargo, la duración de la reacción requiere la determinación empírica, dependiendo de la finalidad del ensayo. En los casos en que la tinción requiere procesamiento durante la noche, un fondo ligeramente azulado tiende a desarrollarse en las muestras. Este problema se puede superar mediante el aumento de la...

La glándula suprarrenal, un componente crucial del eje hipotálamo-pituitario-adrenal, segrega esteroides y coordina la homeostasis de esteroides y la respuesta del cuerpo al estrés. La glándula suprarrenal comprende la corteza exterior, que segrega los esteroides de manera-zona específica, y médula interna, que sintetiza las catecolaminas. La glándula interrenal en teleósteos es la contraparte de la glándula suprarrenal en los mamíferos y se compone de células cromafines interrenal y androgénica, que son equivalentes funcionales de la corteza suprarrenal y la médula, respectivamente 1-3. Estudios llevados a cabo utilizando el modelo de pez cebra han informado de que los dos linajes de células esteroidogénicas y cromafines se forman por los mecanismos moleculares y celulares altamente parecidas a las de los mamíferos 1,2. Por lo tanto, el pez cebra es un modelo potencialmente poderosa para el estudio de enfermedades genéticas, el control neuroendocrino, y la biología de sistemas del eje hipotálamo-pituitario-adrenal (interrenal). <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; En la glándula adrenal, 3β-HSD cataliza la conversión de la progesterona a partir de pregnenolona, 17α-hidroxiprogesterona de 17α-hydroxypregnelolone, y la androstenediona de dehidroepiandrosterona 4,5. 3β-HSD es esencial para la biosíntesis de todas las clases de esteroides hormonales, a saber, la progesterona, glucocorticoides, mineralocorticoides, andrógenos y estrógenos. Los dos humana 3β-HSD isoenzimas hsd3b1 y HSD3B2 se expresan diferencialmente 6. Hsd3b1 se expresa en la placenta y en los tejidos periféricos, mientras que HSD3B2 se expresa en la corteza adrenal y las gónadas. Hsd3b1 humana y HSD3B2 son co-orthologs de hsd3b1 pez cebra, que se expresa en el tejido interrenal gónadas y adultos; HSD3B2 pez cebra es un gen expresado maternalmente cuyas transcripciones desaparecer antes de la organogénesis 7. El protocolo de todo el montaje en el ensayo de actividad enzimática 3β-HSD para el pez cebra fue desarrollado modificando el método de Levy,s descrito por Milano et al. , En secciones congeladas de ocho especies de teleósteos 8. Debido a la permeabilidad del tejido y la transparencia óptica del pez cebra en desarrollo, todo el montaje 3β-HSD la histoquímica se puede utilizar con éxito para el embrión del pez cebra fija y larvas y específicamente delinear los tejidos interrenal diferenciadas. Este ensayo sensible y rápido se ha aplicado a diversos mutantes y morphants que demuestran diferentes tipos de dysmorphogenesis interrenal. La actividad 3β-HSD interrenal está ausente en el embrión, donde la especificación del tejido interrenal se interrumpe a través de una caída específica del factor de transcripción ff1b y se disminuyó a medida que la diferenciación interrenal se ve afectada por una caída de la coregulator ff1b Prox1 9,10. En particular, la actividad 3β-HSD se puede detectar en los mutantes con defectos severos en fase inicial, tales como una cabeza de alfiler de ojos y estrabismo, donde el 3β-Hhistoquímica sd delinea cómo la migración de las células se ve afectado interrenal 11. La diferenciación del tejido interrenal no se vea comprometida incluso en ausencia completa de la sangre y la vasculatura. Por lo tanto, cómo las señales derivadas del endotelio forma al órgano interrenal en desarrollo puede ser determinada 12,13. En general, este ensayo histoquímico ha sido utilizado con éxito para el estudio de la especificación, diferenciación y migración de las células esteroidogénicas en el modelo de pez cebra. Por lo tanto, debe ser un una herramienta fiable para todas las pantallas genéticas o químicas dirigidas a trastornos de los órganos suprarrenales y interrenal eficiente y.

<table><tbody><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Carl Zeiss&nbsp;</td><td>LSM510&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D8418&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>USB</td><td>US16374</td><td></td></tr><tr><td>Hyclone Suero de pantorrilla fetal&nbsp;</td><td>GE Healthcare Ciencias de la Vida</td><td>SH30073</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamida</td><td>Sigma</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Nicotinamida adenina dinucleótido hidrato</td><td>Sigma</td><td>N1636</td><td></td></tr><tr><td>4-Nitro azul tetrazolio</td><td>Promega</td><td>S380C</td><td></td></tr><tr><td>Nusieve GTG</td><td>Lonza</td><td>50081</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehído</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Feniltiourea</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Sigma</td><td>P4417-100Tab</td><td></td></tr><tr><td>PYREX Placa puntual</td><td>Corning</td><td>7220-85</td><td></td></tr><tr><td>Sal de arrecife</td><td>AZOO</td><td>AZ28001</td><td></td></tr><tr><td>trans-Dehidroandrosterona</td><td>Sigma</td><td>D4000</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Vibratome</td><td>Leica</td><td>VT1000M</td><td></td></tr></tbody></table>

la visualización del tejido interrenal androgénica, y su microambiente vascular en el pez cebra

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Este protocolo presenta cómo detectar células esteroidogénicas interrenales diferenciadas a través de un ensayo simple de actividad enzimática de montaje completo. La identificación de tejidos esteroidogénicos diferenciados mediante tinción histoquímica cromogénica de células con actividad positiva para la 3-β-hidroxiesteroide deshidrogenasa /Δ5-4 isomerasa (3β-Hsd) es fundamental para controlar la morfología y la diferenciación de los tejidos adrenocorticales e interrenales en mamíferos y teleósteos, respectivamente. En el modelo de pez cebra, la transparencia óptica y la permeabilidad de los tejidos de los embriones y larvas en desarrollo permiten la tinción de la actividad 3β-Hsd en todo el montaje. Este protocolo de tinción, que se realiza en líneas reporteras fluorescentes transgénicas que marcan las células pronefricas y endoteliales en desarrollo, permite la detección del tejido interrenal esteroidogénico además del riñón y la vasculatura vecina. En combinación con el corte de vibratome, la inmunohistoquímica y la microscopía confocal, podemos visualizar y analizar el microambiente vascular de los tejidos esteroidogénicos interrenales. El ensayo de actividad 3β-Hsd es esencial para estudiar la biología celular de la glándula interrrenal del pez cebra porque, hasta la fecha, no se dispone de un anticuerpo adecuado para marcar las células esteroidogénicas del pez cebra. Además, este ensayo es rápido y sencillo, lo que proporciona una poderosa herramienta para los cribados de mutantes dirigidos a trastornos genéticos suprarrenales (internos), así como para determinar los efectos de alteración de los productos químicos en la esteroidogénesis en estudios farmacéuticos o toxicológicos.

Para determinar cómo las codevelops tejido interrenal androgénica, con el glomérulo renal pronephric y su naciente sistema vascular, el ensayo de actividad enzimática 3β-HSD se llevó a cabo en el doble transgénico Tg (wt1b: GFP) LI1; Tg (kdrl: mCherry) CI5 embrión en 34 HPF (Figura 1). En esta etapa, el tejido steroidogenic actividad positiva 3β-HSD está situado justo a la línea media y caudal inmediatamente al glomérulo renal pronephric, m...

La glándula interrenal en el pez cebra es la contraparte teleósteos de la glándula adrenal de los mamíferos. Este protocolo presenta cómo realizar la deshidrogenasa 3-β-hidroxiesteroide (Δ 5-4 isomerasa; 3β-HSD) ensayo de actividad enzimática, que detecta las células esteroidogénicas diferenciadas en el pez cebra en desarrollo.

La visualización del Tejido Interrenal androgénica, y su microambiente vascular en el pez cebra

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

El objetivo general de este procedimiento es detectar células esteroidogénicas interrenales diferenciadas en el pez cebra en desarrollo mediante un ensayo sencillo de actividad enzimática en preparación completa. Este procedimiento de tinción puede ayudar a responder preguntas clave sobre los mecanismos moleculares y celulares de la formación y malformación de la glándula interrenal. La principal ventaja de este ensayo de tinción es que es rápido, sencillo y confiable, lo que lo convierte en una herramienta poderosa para cribados genéticos o químicos en el pez cebra.Este procedimiento puede realizarse en líneas transgénicas con reporteros fluorescentes, marcando el riñón y los vasos sanguíneos para que puedan analizarse múltiples tejidos en el mismo embrión. En combinación con seccionado en vibrátomo, inmunohistoquímica y microscopía confocal, también puede visualizarse el microentorno vascular del tejido interrenal. Después de preparar las soluciones stock para la tinción de actividad de beta-Hsd según el protocolo descrito, coloque embriones de pez cebra en desarrollo en agua de huevo con PTU al 0,03 % para inhibir la formación de pigmento.Fije embriones descorionados, o larvas,

visualizing-interrenal-steroidogenic-tissue-its-vascular

Research

Investigación

JoVE Journal

Developmental Biology

Biología del Desarrollo

Aquí te mostramos cómo hacer retro-orbital de la inyección en adultos de pez cebra.

Retro-orbital de inyección en adultos de pez cebra

El riñón del pez cebra es el hogar de los renales y hematopoyéticas adultas células madre / progenitoras, y representa una oportunidad excepcional para estudiar estos tipos de células y su progenie en un organismo modelo de vertebrados. En este sentido, demostrar un procedimiento de disección detallada que permite al investigador identificar y extirpar el riñón del pez cebra adulto, que puede ser utilizado para aplicaciones tales como el aislamiento de células, los trasplantes, y los estudios...

La disección del riñón adultos de pez cebra

Imágenes del desarrollo cerebrovascular en larvas de pez cebra se describe. También se proporcionan técnicas para facilitar la proyección de imagen 3D y modificar desarrollo cerebrovascular el uso de tratamientos químicos.

Imágenes y Reconstrucción 3D de Estructuras Embrionarias cerebrovasculares en pez cebra

El embrión de pez cebra es un excelente modelo para la investigación de la biología del desarrollo. Durante la embriogénesis, el desarrollo de pez cebra con una masa de yema, que presenta retos en tres dimensiones para la observación de muestras y análisis. Este protocolo se describe cómo crear dos dimensiones planas montar preparaciones de todo el montaje in situ (WISH), teñidas muestras de embriones de pez cebra.

Preparativos Piso en observación y análisis de embrión de pez cebra muestras teñidas por todo el montaje<em&gt; In situ</em&gt; La hibridación

El método aquí descrito permite realizar un análisis cronológico del desarrollo de órganos en embriones de pez cebra mediante el uso de un microscopio de fluorescencia de disección capaces de realizar seccionamiento óptico y estrategias simples de reajuste para corregir la deriva focal y plana.

Análisis para el Desarrollo de riñón de pez cebra con time-lapse de uso de un microscopio de disección equipado para seccionamiento óptico

Este protocolo demuestra un método basado en la fluorescencia para visualizar la vasculatura y para cuantificar su complejidad en Xenopus tropicalis . Los vasos sanguíneos pueden visualizarse minutos después de la inyección de un colorante fluorescente en el corazón de un embrión después de manipulaciones genéticas y / o farmacológicas para estudiar el desarrollo cardiovascular in vivo .

Visualización y análisis cuantitativo de la angiogénesis embrionaria<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Desarrollo de cilios es vital para la correcta organogénesis. Este protocolo describe un método optimizado para la etiqueta y visualizar las células ciliadas del pez cebra.

Visualización de las células Multiciliated en el pez cebra a través de un protocolo combinado de todo Monte fluorescente In Situ hibridación e inmunofluorescencia

Aquí, discutimos un protocolo de método que permita un fácil análisis de la vasculatura retiniana del pez cebra adulto tg(fli:EGFP) como una lectura rápida en entornos de patologías vasculares a largo plazo vinculados a la neoangiogénesis y cambios estructurales.

Estudiar la Diabetes a través de los ojos de un pez: Microdissection, visualización y análisis de la vasculatura de retina de pez cebra de adulto tg(fli:EGFP)

Aquí, Describimos 3 modelos de lesión del pez cebra adulto y su uso combinado con tratamiento inmunosupresor. Proporcionamos orientación en proyección de imagen de regenerar los tejidos y en la detección de la mineralización ósea en esto.

Pez cebra adulto lesión modelos para estudiar los efectos de la prednisolona en regeneración de tejido óseo

Aquí demostramos un método para cuantificar el tamaño del hígado en el pez cebra larval, proporcionando una manera de evaluar los efectos de las manipulaciones genéticas y farmacológicas en el crecimiento y desarrollo del hígado.

Cuantificación del tamaño del hígado en el pez cebra larvario mediante la microscopía Brightfield

Aprende a detectar células esteroidogénicas diferenciadas en Danio rerio mediante un ensayo enzimático de montaje completo. Este método rápido permite visualizar el microambiente vascular del tejido interrenal en estudios de biología del desarrollo endocrino.

La visualización del Tejido Interrenal androgénica, y su microambiente vascular en el pez cebra

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