El examen de la Asamblea proteasoma con recombinante arqueano Proteasomas y desnaturalizante PÁGINA: El Caso de un enfoque combinado

El objetivo general de este experimento es analizar el ensamblaje de un complejo multiproteico como el proteasoma, utilizando subunidades recombinantes y electroforesis en gel de poliacrilamida no desnaturalizante, o PAGE. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del proteasoma, como qué especies intermedias se encuentran a lo largo de la vía de ensamblaje de este complejo de proteínas. La principal ventaja de esta técnica es que permite un cribado rápido del ensamblaje mediante dos enfoques paralelos, lo que permite la detección de intermediarios de vía activa y desactivada. Este procedimiento comienza con la expresión bacteriana como se describe en el protocolo de texto. Para realizar la lisis bacteriana, descongele la paleta celular inducida que coexpresa la combinación deseada de subunidades de proteasoma, en hielo durante cinco minutos. Una vez descongelado, vuelva a suspender el palet en 600 microlitros de tampón Lysis.Incubar la suspensión a 30