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DOI: 10.3791/54880-v
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This protocol presents an efficient method for recovering the morphology of neurons patched during electrophysiological recordings using biocytin filling and immunostaining. This technique allows for the identification of neurochemical markers in neurons, enhancing the understanding of their structural and functional diversity.
Este protocolo presenta un método para la recuperación morfológica de las neuronas parcheado durante registros electrofisiológicos usando llenado biocitina y posterior procesamiento posterior inmunohistoquímico. Se demuestra que las secciones biocitina llenas de gruesos que se tiñeron y se pueden coverslipped restained con un segundo anticuerpo primario días o meses más tarde.
El objetivo de este protocolo es presentar un método eficiente para la identificación de neuronas parcheadas durante los registros electrofisiológicos utilizando biocitina e inmunotinción para la recuperación de la morfología antes de volver a teñir con anticuerpos específicos para determinar la identidad neuroquímica. Por lo tanto, este método describe un paso importante necesario para estudiar la diversidad en la estructura y función neuronal. Esto es esencial para entender su papel en las redes cerebrales.
La principal ventaja de utilizar técnicas de procesamiento secuencial, es que elimina la pérdida de datos debido a la imposibilidad de recuperar la morfología. Por lo tanto, esto también ayuda a guiar los marcadores neuroquímicos que se analizarán en estas células. Aunque este método está descrito para la recuperación morfológica de células en secciones gruesas, también se puede aplicar en secciones delgadas y en muestras previamente teñidas y montadas.
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