Name: Un Modelo de tumor y el tumor murino ortotópico de vejiga Sistema de Detección (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Aprenda a generar tumores vesicales ortotópicos no musculoinvasivos en ratones C57BL/6J mediante un método no quirúrgico. Esta técnica permite monitorear el crecimiento tumoral y evaluar terapias intravesicales de manera eficiente.

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Este trabajo fue financiado por una subvención del Consejo Nacional de Investigación Médica de Singapur (NMRC/CIRG/1335/2012) otorgada al profesor Kesavan Esuvaranathan.

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<li>Ninalga, C., Loskog, A., Klevenfeldt, M., Essand, M., Totterman, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CpG+oligonucleotide+therapy+cures+subcutaneous+and+orthotopic+tumors+and+evokes+protective+immunity+in+murine+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">CpG oligonucleotide therapy cures subcutaneous and orthotopic tumors and evokes protective immunity in murine bladder cancer.</a> J Immunother. 28, 20-27 (2005).</li>
<li>Tham, S. M., Ng, K. H., Pook, S. H., Esuvaranathan, K., Mahendran, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+and+Microenvironment+Modification+during+Progression+of+Murine+Orthotopic+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Dev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tumor and Microenvironment Modification during Progression of Murine Orthotopic Bladder Cancer.</a> Clin Dev Immunol. , 865684(2011).</li>
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<li>Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+to+monitor+bladder+cancer+cell+adhesion+in+vivo%3A+a+new+approach+to+optimize+a+syngeneic%2C+orthotopic%2C+murine+bladder+cancer+model%5BTitle%5D)+AND+%22BJU+Int%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model.</a> BJU Int. 101, 120-124 (2008).</li>
<li>Newton, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-interleukin-10R1+monoclonal+antibody+in+combination+with+bacillus+Calmette--Guerin+is+protective+against+bladder+cancer+metastasis+in+a+murine+orthotopic+tumour+model+and+demonstrates+systemic+specific+anti-tumour+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Anti-interleukin-10R1 monoclonal antibody in combination with bacillus Calmette--Guerin is protective against bladder cancer metastasis in a murine orthotopic tumour model and demonstrates systemic specific anti-tumour immunity.</a> Clin Exp Immunol. 177, 261-268 (2014).</li>
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<li>Coralli, C., Cemazar, M., Kanthou, C., Tozer, G. M., Dachs, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+the+reporter+green+fluorescent+protein+under+simulated+tumor+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Limitations of the reporter green fluorescent protein under simulated tumor conditions.</a> Cancer Res. 61, 4784-4790 (2001).</li>
<li>Biot, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preexisting+BCG-specific+T+cells+improve+intravesical+immunotherapy+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Preexisting BCG-specific T cells improve intravesical immunotherapy for bladder cancer.</a> Sci Transl Med. 4 (137), 137ra172(2012).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+near-infrared+cell+tracker+reagent+for+multiscopic+in+vivo+imaging+and+quantification+of+leukocyte+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A near-infrared cell tracker reagent for multiscopic in vivo imaging and quantification of leukocyte immune responses.</a> PLoS One. 2, 1075(2007).</li>
<li>Jozwicki, W., Brozyna, A. A., Siekiera, J., Slominski, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+cells+in+peripheral+blood+in+relation+to+urinary+bladder+cancer+malignancy+indicators+before+and+after+surgical+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Frequency of CD4+CD25+Foxp3+ cells in peripheral blood in relation to urinary bladder cancer malignancy indicators before and after surgical removal.</a> Oncotarget. , (2016).</li>
<li>Walk, E. L., McLaughlin, S. L., Weed, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+Ultrasound+Imaging+of+Mouse+Cervical+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes.</a> J Vis Exp. , e52718(2015).</li>
<li>Rooks, V., Beecken, W. D., Iordanescu, I., Taylor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sonographic+evaluation+of+orthotopic+bladder+tumors+in+mice+treated+with+TNP-470%2C+an+angiogenic+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+radiology%22%5BJournal%5D)">Sonographic evaluation of orthotopic bladder tumors in mice treated with TNP-470, an angiogenic inhibitor.</a> Academic radiology. 8, 121-127 (2001).</li>
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<li>Dykman, L. A., Bogatyrev, V. A., Khlebtsov, B. N., Khlebtsov, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+assay+based+on+colloidal+gold+conjugates+with+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A protein assay based on colloidal gold conjugates with trypsin.</a> Anal Biochem. 341, 16-21 (2005).</li>
<li>Shi, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Joint+enhancement+strategy+applied+in+ECL+biosensor+based+on+closed+bipolar+electrodes+for+the+detection+of+PSA%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Joint enhancement strategy applied in ECL biosensor based on closed bipolar electrodes for the detection of PSA.</a> Talanta. 154, 169-174 (2016).</li>
<li>Ma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrochemiluminescent+immunosensing+of+prostate-specific+antigen+based+on+silver+nanoparticles-doped+Pb+%28II%29+metal-organic+framework%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Electrochemiluminescent immunosensing of prostate-specific antigen based on silver nanoparticles-doped Pb (II) metal-organic framework.</a> Biosensors & bioelectronics. 79, 379-385 (2016).</li>
<li>Kavosi, B., Salimi, A., Hallaj, R., Moradi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+electrochemical+immunosensor+for+PSA+biomarker+detection+in+prostate+cancer+cells+using+gold+nanoparticles%2FPAMAM+dendrimer+loaded+with+enzyme+linked+aptamer+as+integrated+triple+signal+amplification+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22Biosensors+%26+bioelectronics%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive electrochemical immunosensor for PSA biomarker detection in prostate cancer cells using gold nanoparticles/PAMAM dendrimer loaded with enzyme linked aptamer as integrated triple signal amplification strategy.</a> Biosensors & bioelectronics. 74, 915-923 (2015).</li>
<li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-species+comparison+of+orthologous+gene+expression+in+human+bladder+cancer+and+carcinogen-induced+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Cross-species comparison of orthologous gene expression in human bladder cancer and carcinogen-induced rodent models.</a> Am J Transl Res. 3, 8-27 (2010).</li>
<li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+Novel+Bladder+Cancer+Xenograft+Model+in+Humanized+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+physiology+and+biochemistry+%3A+international+journal+of+experimental+cellular+physiology%2C+biochemistry%2C+and+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Establishment of a Novel Bladder Cancer Xenograft Model in Humanized Immunodeficient Mice.</a> Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 37, 1355-1368 (2015).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Los pasos más críticos en el protocolo son 1) el mantenimiento con éxito la tumorigenicidad de la línea celular; 2) asegurar la secreción de PSA medible antes de la implantación de células tumorales en ratones; 3) la generación de una suspensión de una sola célula para la implantación con el fin de reducir la variación en el tamaño del tumor; y 4) infundir células a una velocidad lenta para prevenir el reflujo vesico-ureteral, lo que resulta en la implantación de células tumorales en el riñón. <p class="jove_content...

El objetivo de este método es generar tumores de vejiga murino ortotópico y para controlar los tumores implantados con la mayor precisión posible, de manera que los ratones sin la implantación del tumor no se cree que se han curado a análisis de punto final. En general, el método que se muestra reducirá la necesidad de un gran número de ratones para el análisis experimental y garantizar una mayor precisión en la determinación de los resultados terapéuticos. El desarrollo de un modelo ortotópico de cáncer es importante, ya que la implantación de las células tumorales por vía subcutánea no recapitula el medio ambiente de la enfermedad clínica o permiten el desarrollo de estrategias terapéuticas. La arquitectura de la vejiga permite la instilación de las terapias de cáncer de vejiga directamente en la vejiga con efectos sistémicos mínimos. Por lo tanto, los modelos animales que recapitular este entorno, tales como un modelo ortotópico, son importantes para evaluar nuevas terapias. Las conclusiones extraídas de cualquier montaje experimental se dependent sobre las limitaciones del modelo. Varias técnicas han sido desarrolladas para la producción de los tumores de vejiga ortotópico en ratones. Estos dependen de dañar la capa de glicosaminoglicano de la vejiga, lo que permite las células tumorales para ser implantado. Las técnicas utilizadas incluyen la electrocauterización, que resulta en un único punto de daño en la pared de la vejiga, lo que lleva al desarrollo de tumores en un sitio en la vejiga 1,2. Sin embargo, la tasa de éxito de la implantación del tumor usando electrocauterización es dependiente del operador que varía de 10 - 90%, y que incluye el peligro de que la pared de la vejiga se punza, lo que lleva a los tumores en desarrollo en la cavidad peritoneal. Cauterización química se lleva a cabo utilizando nitrato de plata, lo que daña la pared de la vejiga 3. Del mismo modo, el ácido se ha utilizado para dañar la pared de la vejiga 4. La tripsina también se ha utilizado para dañar la vejiga, así 5. Estos métodos pueden resultar en el desarrollo de más de un tumor en la vejiga.Además, existe el peligro de un daño severo a la vejiga si los productos químicos se dejan en contacto con la pared de la vejiga durante demasiado tiempo. El método desarrollado por Ninalga et al. utiliza el poli-L-lisina cargada positivamente (PLL) 6 moléculas para recubrir la pared de la vejiga; esto permite que las células tumorales con carga negativa a pegarse a la capa de glicosaminoglicano de la vejiga. Este método da como resultado en general en más de un tumor en desarrollo en la vejiga, pero la implantación del tumor es a 80 - 100% de 4,7. Técnicamente, también es el procedimiento más fácil de realizar. Para asegurarse de que los tumores que se desarrollan son bastante uniforme en tamaño, es importante que las células tumorales no se agrupan en grupos grandes antes de la implantación. Con el fin de evaluar la eficacia terapéutica, lo mejor es llevar a cabo este estudio en ratones con tumores bastante de tamaño similar. Por lo tanto, un buen sistema de detección que puede cuantificar el tamaño del tumor pronto después de la implantación es importante. Varias estrategias han de abejasn utiliza para evaluar tumores. Estos incluyen imágenes por resonancia magnética (IRM) 8-10, 11 de fluorescencia, bioluminiscencia 12,13, ultrasonido 14, y el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) 15,16. Mientras que la RM y la ecografía no requieren modificaciones de las células tumorales, hay una necesidad de equipos y agentes de contraste para resonancia magnética sensibles. Los ensayos por fluorescencia, luminiscencia, y basados ​​en ELISA requieren modificación de las células tumorales para expresar proteínas marcadoras que se pueden detectar por estos métodos. Por luminiscencia, se requiere un sustrato para la detección de la actividad de la luciferasa; Por lo tanto, hay un paso adicional y aumento del coste. Tanto la luminiscencia y fluorescencia requieren equipo especializado. Para producir fluorescencia, proteína fluorescente verde (GFP) de ciclación, que es catalizada por el oxígeno molecular, se requiere. Por lo tanto, la expresión de GFP puede ser variable dentro de una masa tumoral en función de acceso al oxígeno, haciendo de este un marcador más fiable <sup&gt; 17. La modificación de la línea celular de cáncer de vejiga murino MB49 para secretar próstata humana Antígeno Específico (PSA) 15,16 como un marcador sustituto es otra estrategia. Estos marcadores también proporcionan un medio alternativo para confirmar la presencia del tumor en la terminación del experimento, por lo que una alternativa a la inmunohistoquímica. Este estudio reporta el método PLL de la implantación del tumor ortotópico y presenta una comparación de los sistemas de detección de tumores, a saber, ELISA, fluorescencia, y las imágenes por ultrasonido.

<table><tbody><tr><td>Celdas MB49-PSA</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>ref (Wu QH, 2004)</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medios</td><td>HyClone</td><td>SH30027.01&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Medios Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)</td><td>Biowest</td><td>L0102</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino (FBS) Sudamericano</td><td>Biowest</td><td>S1810</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino (FBS) Sudamericano, Premium</td><td>Biowest</td><td>S181B</td><td></td></tr><tr><td>Suero Fetal Bovino (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH30088.03&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Biowest</td><td>X0550</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Biowest</td><td>L0022</td><td></td></tr><tr><td>Higromicina B</td><td>Invitrogen</td><td>10687-010</td><td></td></tr><tr><td>PSA libre (Humano) Kit ELISA</td><td>Abnova</td><td>KA0209</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reactivo para extracción de ARN&nbsp;</td><td>Ambion</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad con inhibidor de ARNasa</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Ensayo de expresión génica &ndash; Mouse Actb</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Mm00607939_s1</td></tr><tr><td>Ensayo de expresión génica TaqMan &ndash; Humano KLK3</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>Hs00426859_g1</td></tr><tr><td>ratones hembra C57BL/6J</td><td>In Vivos</td><td></td> 4 <td>- 6 semanas de antigüedad</td></tr><tr><td>Anestesia (75 mg/kg de ketamina y 1 mg/kg de medetomidina)</td><td>Farmacia</td><td></td><td></td>local</tr><tr><td>Fármaco de reversión (1 mg/kg de Atipamezol)</td><td>Farmacia</td><td></td><td></td>local</tr><tr><td>Punzón de oreja</td><td>Ciencias de la microscopía electrónica 72893-01</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución de Hartmann o Compuesto de lactato de sodio</td><td>B Ungüento</td> oftálmico Braun <td></td><td></td></tr><tr><td>- Duratears ungüento lubricante ocular estéril</td><td>Alcon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heat pack - Calentadores de manos HotHands</td><td>Heatmax Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Introcan Catéter Certo IV</td><td>B Braun</td><td>4251300</td><td>24 G x 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Aquagel Jalea lubricante</td><td>Solución</td> de poli-L-lisina para farmacia <td></td><td></td>local</tr><tr><td>, 0,01 %,</td><td>Sigma</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, cóctel de inhibidores de proteasa sin EDTA</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Quantichrom Kit de ensayo de creatinina Sistemas</td><td>de bioensayo</td><td>DICT-50&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tinte fluorescente - VivoTrack 680</td><td>Perkin Elmer</td><td>NEV12000&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNAlater-ICE Solución de transición de tejido congelado</td><td>Ambion</td><td>4427575</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentarios</strong</td></tr><tr><td>>Equipment and Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Sistema de PCR en tiempo real</td><td>aplicado Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7500 Software v2.3</td> Jaula metabólica <td>de Biosystems Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Tecniplast&nbsp;</td><td>Estantería de tipo vertical para 12 jaulas</td><td></td></tr><tr><td>BD FACSCanto I system&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSDiva software v7</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS SpectrumCT in vivo sistema de imagen&nbsp;</td><td>Ciencias de la Vida Caliper&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Living Image Software v3.1</td><td>Caliper Ciencias de la Vida&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imágenes Vevo 2100&nbsp;</td><td>VisualSonics&nbsp;</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo de tumor y el tumor murino ortotópico de vejiga sistema de detección

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

Este protocolo describe la generación de tumores de vejiga en ratones C57BL / 6J hembra utilizando la línea celular de cáncer de vejiga murino MB49, que ha sido modificado para secretar de próstata humano de antígeno específico (PSA), y el procedimiento para la confirmación de la implantación del tumor. En resumen, los ratones se anestesiaron usando drogas inyectables y están hechos para poner en la posición dorsal. La orina está desocupado desde la vejiga y 50 l de poli-L-lisina (PLL) se instila lentamente a una velocidad de 10 l / s 20 utilizando un catéter 24 G IV. Se deja en la vejiga durante 20 min por tapando el catéter. Se retira el catéter y el PLL está desocupado por una suave presión sobre la vejiga. Esto es seguido por la instilación de la línea celular de cáncer de vejiga murino (1 x 10 5 células / 50 l) a una velocidad de 10 l / 20 s. El catéter se tapó para evitar la evacuación prematura. Después de 1 h, los ratones se revivieron con un fármaco de reversión, y la vejiga esté desocupado. La tasa de instilación lenta es importante,ya que reduce el reflujo vesico-ureteral, lo que puede hacer que los tumores se producen en el tracto urinario superior y en los riñones. La línea celular debe estar bien volvió a suspenderse para reducir la aglutinación de las células, ya que esto puede conducir a tamaños irregulares después de la implantación del tumor. Esta técnica induce tumores con alta eficiencia. El crecimiento tumoral se controló mediante la secreción de PSA urinaria. monitoreo marcador PSA es más fiable que el ultrasonido o imágenes de fluorescencia para la detección de la presencia de tumores en la vejiga. Los tumores en los ratones generalmente alcanzan un tamaño máximo que repercute negativamente en la salud por cerca de 3 - 4 semanas si no se tratan. Mediante el control de crecimiento del tumor, es posible diferenciar los ratones que fueron curados de las que no fueron implantados con éxito con los tumores. Con el análisis de punto final únicamente, el último puede ser erróneamente supone que se han curado mediante terapia.

se encontró la secreción de PSA a partir de células MB49 a variar con el medio de crecimiento. MB49-PSA se cultiva en medios DMEM porque esto da lugar a aumento de la secreción de PSA (Figura 1A). Con el fin de determinar la sensibilidad de la PSA ELISA y PCR en tiempo real, diferentes números de células MB49-PSA secretoras se mezclaron con células parentales MB49. PSA ELISA detecta un mínimo de 1 x 10 5 células secretoras de PSA / 1 x 10 6 células ...

Este protocolo describe la generación de tumores de vejiga ortotópico murino en ratones C57BL / 6J hembra y el seguimiento del crecimiento del tumor.

Un Modelo de tumor y el tumor murino ortotópico de vejiga Sistema de Detección

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

El objetivo general de este método no quirúrgico es producir de forma constante tumores ortotópicos de vejiga no invasores del músculo en ratones, que puedan ser fácilmente monitoreados para la evaluación de terapias intravesicales. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer de vejiga, como la evaluación de nuevas terapias intravesicales.La principal ventaja de esta técnica es que es fácil implantar tumores en ratones y monitorear su crecimiento, lo que ayuda a determinar con precisión las respuestas a las terapias. Un día antes de la implantación, cuando las células tengan una confluencia aproximada del 80 %, pase las células tumorales MB49 PSA a medio DMEM completo con una división uno a dos. El día del procedimiento, recolecte y cuente las células, asegurándose de que estén suficientemente sanas.Mezcle volúmenes iguales de suspensión celular y Azul de Tripano al 4%, y cuente las células vivas teñidas de azul utilizando un hemocitómetro. Las células deben tener una viabilidad de al menos 80%. A continuación, re suspenda las células a una concentración de dos millones por mililitro en un tubo cónico de 15 mililitros, y lávelas tres veces con DMEM.Luego, manténgalos fríos hasta que se vayan a inyectar. Una vez que una hembra de ratón haya sido anestesiada, proporciónele hidratación mediante una inyección intraperitoneal de solución de Hartmann a 1 mililitro por cada 10 gramos de peso corporal. Repita esto cada una o dos horas durante la anestesia.A continuación, aplique una pomada oftálmica estéril en ambos ojos y vuelva a aplicar según sea necesario. Luego, coloque al ratón en posición supina sobre toallas de papel colocadas sobre una almohadilla térmica para mantener la temperatura corporal. A continuación, sujete las patas traseras con cinta adhesiva.Ahora aplique presión suave en la región abdominal inferior y recoja la orina en un tubo de 1,5 mililitros para medir el nivel basal de PSA urinario. A continuación, cargue una jeringa de un mililitro con PLL estéril y coloque un catéter intravenoso de calibre 24 con el estilo delgado retirado. Aplique lubricante en la punta del catéter.A continuación, inserte el catéter en la uretra y, utilizando fórceps, guíelo hacia la vejiga. Deténgase cuando se sienta resistencia. Luego, expulse lentamente 50 microlitros de PLL a una velocidad de 10 microlitros cada 20 segundos para evitar el reflujo vesicoureteral.Ahora deje el catéter en la vejiga durante 20 minutos, con un tapón para evitar el flujo de salida. Después de 20 minutos, retire el catéter y vacíe la vejiga de cualquier contenido presionando suavemente sobre el abdomen inferior. Luego, utilizando una jeringa de un mililitro, enjuague cualquier contenido restante fuera del catéter.Ahora mezcle bien las células PSA MB49 mediante pipeteo y colóquelas en una jeringa de 1 mL. Coloque el catéter y lubríquelo como antes. Introduzca el catéter en la vejiga como anteriormente.Y comience con la inyección de las células, utilizando una expulsión gradual de 10 microlitros por cada 20 segundos. Luego espere una hora. Después de una hora, retire el catéter y vacíe la vejiga de cualquier contenido.A continuación, suelte el ratón, colóquelo en posición ventral y revívelo con una inyección de atipamezol. Ahora, supervise al ratón hasta que recupere la recumbencia esternal y luego devuélvalo a su jaula de origen. Se encontró que la secreción de PSA por las células MB49 variaba según el medio de crecimiento.El medio DMEM se utiliza porque resultó en la mayor secreción de PSA. Con el fin de determinar la sensibilidad del ELISA de PSA, se mezclaron diferentes cantidades de células MB49 que secretan PSA con células madre MB49. El ensayo detectó al menos 100.000 células secretoras de PSA por millón de células.El método de implantación tumoral mediante PLL da lugar al desarrollo de múltiples tumores en la vejiga. Tanto las recolecciones nocturnas de orina mediante jaulas metabólicas como las muestras puntuales de orina pueden utilizarse para medir el PSA mediante ELISA. En todos los estudios con animales, se registró el peso del ratón como indicador de salud. Y el PSA urinario se monitorea semanalmente como una medida del crecimiento tumoral. Se utilizaron diferentes terapias en cada ratón, lo que resultó en tamaños tumorales distintos. Dos semanas después del implante, las vejigas se recolectaron y procesaron.Los tamaños de los tumores variaron, y las mediciones de PSA predijeron esto. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo producir tumores ortotópicos de vejiga en ratones y monitorear su crecimiento. Una vez dominada, esta técnica puede realizarse en dos horas por ratón.Al realizar este procedimiento, es importante recordar asegurarse de que las células estén mezcladas antes del implante y llevar a cabo la implantación a una velocidad lenta. Tras seguir este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como el análisis citométrico de flujo de Uvm o ELISA, con el fin de investigar la activación inmune tras la terapia.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Los tumores de vejiga se establecen en las hembras de una forma mínimamente invasiva a través de cateterismo, la cauterización local, y posterior adhesión de las células cancerosas a los sitios de quema.

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino

El establecimiento de un modelo de tumor de vejiga ortotópica para evaluar los efectos antitumorales de SARNA intravesical entrega y el control del crecimiento tumoral mediante ecografía y bioluminiscente.

Un modelo de tumor vesical ortotópica y la Evaluación de tratamiento intravesical SARNA

En este video, describimos el trasplante ortotópico de organoides de tumores de vejiga cultivados a la vejiga murina para estudiar el papel del entorno de los órganos en el desarrollo de tumores.

Modelo de organoide tumoral vesical: un método para el trasplante ortotópico de organoides vesicales en vejiga murina receptora

En este video, describimos el procedimiento intravesical de administrar células cancerosas en la vejiga de un modelo de ratón. Este procedimiento ayuda a generar un modelo ortotópico de tumor vesical que se puede utilizar para desarrollar estrategias terapéuticas.

Modelado de tumor ortotópico de vejiga en modelo de ratón: un procedimiento para la administración intravesical de células cancerosas en la vejiga murina

Implantación de células de cáncer en el órgano de origen puede servir como un modelo preclínico útil para evaluar nuevas terapias. Células de carcinoma de vejiga MB49 se pueden cultivar dentro de la vejiga después de la instilación intravesical. Este protocolo demuestra la cateterización de la vejiga de ratón para el propósito de la implantación del tumor y la entrega adenoviral.

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga de Estudios de liberación de genes

La técnica establecida para inocular ortotópico xenoinjertos de cáncer de vejiga invasivos primarios requiere laparotomía y la movilización de la vejiga. Este procedimiento inflige una morbilidad significativa en los ratones, es técnicamente difícil y consume mucho tiempo. Lo tanto, desarrolló una alta precisión, abordaje percutáneo utilizando la guía del ultrasonido.

Mínimamente Invasiva Establecimiento de murino ortotópico xenoinjertos vejiga

Los tumores de vejiga murino son inducidos con el carcinógeno nitrosaminas de N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). Generación de tumor de vejiga es heterogénea; por lo tanto, es necesaria una evaluación precisa de la carga tumoral antes de la aleatorización al tratamiento experimental. Aquí presentamos un protocolo MRI rápido y confiable para evaluar el escenario y tamaño del tumor.

Evaluación de la proyección de imagen de resonancia magnética de los tumores vesicales murina inducida por carcinógenos

Este protocolo proporciona pasos experimentales detallados para establecer un cultivo tridimensional in vitro de organoides tumorales de vejiga derivados del cáncer de vejiga murina inducido por carcinógenos. Se describen métodos de cultivo que incluyen el passaging, la ingeniería genética y el trasplante ortotópico de organoides tumorales.

Cultivo, manipulación y trasplante ortotópico de organoides tumorales de la vejiga de ratón

Para aclarar el proceso de múltiples etapas de diseminación peritoneal de carcinoma de ovario, el estudio actual presenta un modelo experimental murino de desarrollo del tumor original y la metástasis peritoneal a través de la inoculación ortotópico con estas células tumorales.

Murino modelo experimental de desarrollo del tumor original y la metástasis peritoneal<em&gt; vía</em&gt; Ortotópico La inoculación con células de carcinoma de ovario

Se describe un método que usa irradiación periférica dirigida a inducir un comportamiento a la fatiga como en ratones. La dosis de irradiación no letal seleccionado conduce a una reducción de una semana de duración de la actividad voluntaria rueda de funcionamiento.

Un modelo de ratón de la fatiga inducida por irradiación periférica

Aprenda a generar tumores vesicales ortotópicos no musculoinvasivos en ratones C57BL/6J mediante un método no quirúrgico. Esta técnica permite monitorear el crecimiento tumoral y evaluar terapias intravesicales de manera eficiente.

Un Modelo de tumor y el tumor murino ortotópico de vejiga Sistema de Detección

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