Name: Control de reactividad astrositos y proliferación in Vitro bajo condiciones isquémicas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 8 s
Description: Aprende a aislar astrocitos primarios de cerebros de ratas neonatales para estudiar su respuesta a la privación de oxígeno y glucosa, un modelo de isquemia cerebral. Este método permite evaluar cambios en reactividad y proliferación celular mediante marcadores como GFAP.

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Los autores queremos agradecer a Paola López Pieraldi la asistencia técnica. A.H.M. es agradecido por las subvenciones 8G12MD007600 y U54-NS083924 que apoyaron esta publicación. Agradecemos a NIH-NIMHD-G12-MD007583 subvención para el apoyo del mecanismo. Dera está agradecido por la beca proporcionada por NIHNIGMS-R25GM110513. Estamos agradecidos por el uso de la zona común de la instrumentación y la ayuda de Dr. Priscila Sanabria para el uso de las instalaciones de la proyección de imagen óptica del programa RCMI por conceder G12MD007583. Además, queremos agradecer a José Padilla por su destacado papel en filmación y edición del protocolo visual.

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Los autores no tienen nada que revelar.

Este protocolo describe el aislamiento de los astrocitos de las cortezas de la rata. En este método, es fundamental para disminuir la contaminación con otros tipos celulares como los fibroblastos, microglia y oligodendrocitos. Para reducir el número de microglía, se pueden tomar varias medidas: cambio de medios de comunicación, agitación orbital y tratamientos químicos. Una vez pureza cultura confirmado por inmunofluorescencia utilizando marcadores selectivos de celulares o para los más importantes contaminantes de celul...

Movimiento se define como «una aguda disfunción neurológica de origen vascular con desarrollo rápido o repentino de los síntomas y signos, correspondiente a la participación de las áreas del cerebro»1,2. Hay dos tipos de ictus: isquémico y hemorrágico. Cuando la disfunción vascular es causada por un aneurisma o un mal funcionamiento arteriovenoso, acompañado de debilitamiento con la posterior ruptura de una arteria, esto se denomina accidente cerebrovascular hemorrágico3 que, en la mayoría de los casos, conduce a la muerte. Cuando un trombo o un émbolo obstruye flujo de la sangre, causando una privación temporal de oxígeno y glucosa a una región del cerebro, se denomina accidente cerebrovascular isquémico4. Si no se alimentan las células alrededor del área afectada o núcleo isquémico conduce a un desequilibrio homeostático y metabólica, disfunción energética, muerte neuronal e inflamación5, que puede provocar una discapacidad permanente para pacientes6.
Accidente cerebrovascular isquémico es una lesión multifactorial que involucra a varios tipos de células que reaccionan y ejercen sus efectos en diferentes puntos temporales. Muchas interacciones crean un ambiente difícil para estudiar el comportamiento de células individuales. Así que, ¿cómo se estudia la contribución de un tipo de célula específica en un entorno tan complejo? Un modelo aceptado en vitro de isquemia consiste en exponer las células a la privación de oxígeno y glucosa (OGD), durante un determinado período, seguido por la restauración de las células a un ambiente normoxic. Este sistema simula un movimiento isquémico seguido de reperfusión arterial. En este método, las células o los tejidos se exponen a un medio libre de glucosa en medio purgado de oxígeno, usando una cámara hipóxica especializada. El tiempo de incubación de la inclinacion puede variar desde unos pocos minutos hasta 24 horas, dependiendo de la hipótesis que quiere probarse. Estudios han demostrado que dependiendo de los tiempos de la OGD y ambiente normoxic, fenotipos específicos de movimiento (es decir, aguda o subcrónica) puede lograrse. Primarios astrocitos aislados, expuestos a la inclinacion con la posterior restauración a normoxic las condiciones, es un modelo celular muy estudiado para imitar el movimiento in vitro7. Utilizando OGD es posible revelar los mecanismos moleculares independientes de células aisladas en un entorno de movimiento como.
A medida que aumenta nuestro conocimiento de la biología de astrositos, ha comprobado que son cruciales para el mantenimiento de las sinapsis y mantenimiento reparación, desarrollo y Plasticidad neural8. En condiciones normales, astrocitos liberan y responden a citoquinas, quimioquinas, factores de crecimiento y gliotransmitters, manteniendo el equilibrio metabólico y la homeostasis dentro de sinapsis5,9. En neuroinflamación aguda, como un accidente cerebrovascular isquémico, estas células pueden convertirse en reactivas muestran una largo plazo sobreexpresión de la proteína ácida fibrilosa Glial (GFAP) y muestran hipertrofia en su morfología5,10, 11 , 12. como se desarrolla el infarto isquémico, la homeostasis proporcionada por astrocitos se convierte afectada, con respecto a la captación de glutamato normal, metabolismo energético, el intercambio de moléculas activas y antioxidante actividad13.
Reactivados los astrocitos proliferan alrededor del tejido de infarto mientras que los leucocitos migran hacia la zona lesionados14. Proliferación astrocytic puede medirse mediante marcadores como el antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA), Ki67 y bromodeoxiuridina (BrdU)15. Esta respuesta proliferativa se genera de una manera dependiente del tiempo y ayuda a formar la cicatriz glial, una matriz de astrocitos reactivos irreversiblemente a lo largo de la parenquimia del sitio dañado después de una lesión9. Una de las funciones iniciales de esta cicatriz es limitar la extravasación de células inmunitarias en esta área. Sin embargo, estudios han demostrado que la cicatriz se convierte en un impedimento físico para axones a extenderse, como se liberan moléculas de inhibir el crecimiento axonal y crear una barrera física impidiendo que axones que se extiende alrededor de la zona lesionada16. Sin embargo, existe evidencia científica que muestra que después de una lesión de la médula espinal, prevenir totalmente la formación glial de la cicatriz puede afectar la regeneración de axones17. Por lo tanto, debe considerarse el contexto en el que se mide la respuesta astrocytic específica, en el marco de la lesión estudiada.
La metodología presentada se puede aplicar para estudiar la función individualizada de astrocitos después de privación de oxígeno la glucosa y puede ser modificada según las preguntas que el investigador quiere contestar. Por ejemplo, además de los cambios morfológicos y los marcadores expresados en diferentes momentos de la OGD, los sobrenadantes de astrocitos expuestos a inclinacion pueden ser más analizados para identificar factores solubles liberados por estas células, o utilizado como un medio acondicionado para evaluar su efecto en otras células cerebrales. Este enfoque permite estudios de reactividad de astrositos que podrían llevar al esclarecimiento de los factores que regulan y modulan su respuesta en un escenario de accidente cerebrovascular isquémico.

<table><tbody><tr><td>Instruments for Surgery - Paso 1</tijera ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>strong 5.5"</td><td>Roboz Company</td><td>RS-6812</td><td>Herramientas utilizadas para decapitar a las ratas.</td></tr><tr><td>Pinzas curvas de 7" &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5271</td><td>Sostiene la piel de la rata mientras se extrae el cráneo.</td></tr><tr><td>Tijeras de microdisección 4" &nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5882</td><td>Corta tanto la piel como el cráneo de la rata.</td></tr><tr><td>Pinzas microdisecadoras de 4" en ángulo, finas, afiladas&nbsp;</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5095</td><td>Sostiene la piel de la rata mientras se extrae el cráneo.</td></tr><tr><td>Pinza de microdisección de 4" ligeramente curvada 0.8</td><td>Roboz Company</td><td>RS-5135</td><td>Herramienta utilizada para separar cortezas.</td></tr><tr><td>Pinzas microdiseccionadoras</td><td>Roboz Company</td><td>RS-4972</td><td>Peeling meninges cerebrales.</td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Importante para la extirpación de la meninge de las cortezas.</td></tr><tr><td><fuerte>Preparación DMEM - paso 2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Águila Modificada' s Medio (DMEM)</td><td>GibCo. Empresa</td><td>11995-065</td><td>Apoya el crecimiento de las células.</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S7277</td><td>Suplemento para los medios de cultivo celular.</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>GibCo. Empresa</td><td>10437-010</td><td>Suero-suplemento para el cultivo celular.</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina&nbsp;</td><td>GibCo. Empresa</td><td>15140-148</td><td>Inhibe el crecimiento de bacterias en el cultivo celular.</td></tr><tr><td>Sistema de filtrado 1L con poro de 0,22um</td><td>Corning</td><td>431098</td><td></td></tr><tr><td>Astrocyte culture - paso 3</pipetas serológicas fuertes></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>5mL</td><td>VWR</td><td>89130-896</td><td>Para pipetear DMEM a recipientes con células.</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas 10mL</td><td>VWR</td><td>89130-898</td><td>Para pipetear DMEM a recipientes con células.</td></tr><tr><td>Pipetas serológicas 25mL</td><td>VWR</td><td>89130-900</td><td>Para pipetear DMEM a recipientes con células.</td></tr><tr><td>Tubo cónico centrífuga 15mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-200250</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de cierre seguro 1.5mL</td><td>Eppendorf</td><td>022363204</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de barrera 200 uL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201725</td><td></td></tr><tr><td>Puntas de barrera 1 mL</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-201727</td><td></td></tr><tr><td>Biohazard Naranja Bolsa 14 x 19"</td><td>VWR</td><td>14220-048</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri de 60 mm</td><td></td> Almohadillas de gasa <td>estériles Falcon</td> 351007 <td></td></tr><tr><td></td><td>Honeywell Safety</td><td>89133-086</td><td></td></tr><tr><td>Stomacher 80 Biomaster</td><td>Sewar Lab System</td><td>030010019</td><td>Triturar el tejido cerebral.</td></tr><tr><td>Stomacher 80 Blender Bolsas estériles</td><td>Sewar Lab System</td><td>BA6040</td><td>Bolsa estéril para el homogeneizador de células de estómago.</td></tr><tr><td>Vaso de precipitados 400mL</td><td>Pyrex</td><td>1000</td><td></td></tr><tr><td>Tamiz de disociación de células estériles, malla #60&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S1020</td><td>Para obtener una suspensión uniforme de una sola celda.</td></tr><tr><td>Tamiz de disociación de células estériles, malla #100</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S3895</td><td>Para obtener una suspensión uniforme de una sola célula.</td></tr><tr><td>Microscopio de fase inversa</td><td>Nikon</td><td>Eclypse Ti-S</td><td>Verifique que las células estén contaminadas o que haya un crecimiento celular anormal.</td></tr><tr><td>Matraces estériles de 75 cm2</td><td>Placa</td><td></td> multipocillo Falcon 353136 <td></td></tr><tr><td>Micro Cubreobjetos Falcon 353046 Micro (cubreobjetos), 18 mm, redondos</td><td>VWR</td><td>48380-046</td><td></td></tr><tr><td>Hemacitómetro Bright-Line</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>Z359629</td><td></td></tr><tr><td>pipetas Pasteur</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20D</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> Alcohol etílico <td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de éster metílico de L-leucina 98% (LME)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>L1002</td><td>Promueve la eliminación de células de microglía en el cultivo primario de astrocitos corticales.</td></tr><tr><td>Citosina &beta;-D-arabinofuranósido (Ara-C)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>C1768</td><td></td></tr><tr><td>Poly-D-Lysine Hydrobromide, mol wt 70,000-150,000</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>P0899</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin/EDTA</td><td>GibCo. Empresa</td><td>15400-054</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>T8154</td><td></td></tr><tr><td>Comprimidos de solución salina (PBS) con tampón de fosfato</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Agua estéril</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>W3500</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Preparación del medio OGD - paso 5</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico centrífugo 50 mL</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' Águila modificada' s glucosa medianamente libre</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>D5030</td><td>Apoya el crecimiento de las células.</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sodio</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>S7277</td><td>Suplemento para los medios de cultivo celular.</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina&nbsp;</td><td>GibCo. Empresa</td><td>15140-148</td><td>Inhibe el crecimiento de bacterias en el cultivo celular.</td></tr><tr><td>200mM&nbsp; L-glutamina&nbsp;</td><td>GibCo. Empresa</td><td>25030-081</td><td>Aminoácido que complementa el crecimiento de las células.</td></tr><tr><td>Tabletas de solución salina (PBS) con tampón Phospahet</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de filtro de 50 ml con poro de 0,22 um</td><td>Corning</td><td>430320</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cónico centrífugo de 50 ml</td><td>VWR</td><td>89039-658</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de flujo único&nbsp;</td><td>Billups-Rothenberg</td><td>SMF3001</td><td>Medir el flujo de gas en la purga de oxígeno.</td></tr><tr><td>Cámara incubadora de hipoxia&nbsp;</td><td>StemCell</td><td>27310</td><td>Genera un entorno hipóxico para el cultivo celular.</td></tr><tr><td>Medidor de oxígeno disuelto trazable</td><td>VWR</td><td>21800-022</td><td></td></tr><tr><td>95% N2/ 5% CO2 Mezcla de gases</td><td>Linde</td><td></td><td>Purga el medio ambiente de oxígeno.</td></tr><tr><td><Inmunofluorescencia > astrocitos primarios fuertes - paso 6</</td>tampón ><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>fosfato fuerte, solución salina (PBS)</td><td>Calbiochem</td><td>524650</td><td></td></tr><tr><td>Solución de formalina Tampón neutro 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>HT501128 solución utilizada para fijar células.</td></tr><tr><td>Metanol&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>A4544</td><td>Solución utilizada para fijar células.</td></tr><tr><td>Tensioactivo no iónico (Triton X-100)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>GibCo. Empresa</td><td>10437-010</td><td>Suero-suplemento para el cultivo celular.</td></tr><tr><td>Anti-NeuN</td><td>Cell Signaling</td><td>24307</td><td>Detecta neuronas maduras, sirve para validar el cultivo astrocítico.</td></tr><tr><td>Anti-PCNA</td><td>Cell Signaling</td><td>2586</td><td>Detecta las células en proliferación.</td></tr><tr><td>Yoduro de propidio (PI)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>P4170</td><td>Tinción por apoptosis.</td></tr><tr><td>Anti-Olig1</td><td>Abcam</td><td>AB68105</td><td>Detecta oligodendrocitos maduros.</td></tr><tr><td>Anti-Iba1+</td><td>Wako</td><td>016-20001</td><td>Detecta células microgliales.</td></tr><tr><td>Anti-GFAP conjugado con Cy3&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>C9205</td><td>Detecta astrocitos reactivos en las células tratadas.</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Molecular Probe Life Technology</td><td>A1101</td><td>Anticuerpo secundario anti-ratón.</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555</td><td>Molecular Probe Life Technology</td><td>A21428</td><td>Anticuerpo secundario anti-conejo.</td></tr><tr><td>4',6'-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Sigma-Aldrich Company</td><td>D9542</td><td>Tinción nuclear.</td></tr><tr><td>Microscopio confocal</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

control de reactividad astrositos y proliferación in vitro bajo condiciones isquémicas

Monitoring Astrocyte Reactivity and Proliferation in Vitro Under Ischemic-Like Conditions

Accidente cerebrovascular isquémico es una lesión compleja del cerebro causada por un trombo o émbolo obstruye el flujo sanguíneo a partes del cerebro. Esto conduce a la privación de oxígeno y glucosa, lo cual provoca falta de energía y la muerte neuronal. Después de un insulto isquémico movimiento, astrocitos se reactiva y proliferan alrededor del sitio de la lesión que desarrolla. Bajo este escenario, es difícil estudiar la contribución específica de los astrocitos de la región del cerebro expuesto a isquemia. Por lo tanto, este artículo presenta una metodología para estudiar la reactividad de astrositos primaria y proliferación bajo un modelo en vitro de un entorno similar a isquemia, llamado privación de glucosa oxígeno (OGD). Los astrocitos fueron aislados de 1-4 días-viejas ratas neonatales y el número de células astrocytic no específica se evaluó mediante marcador selectivo de astrositos proteína ácida fibrilosa Glial (GFAP) y tinción nuclear. El período en el que los astrocitos son sometidos a la condición de la OGD se puede personalizar, así como el porcentaje de oxígeno que están expuestos. Esta flexibilidad permite a los científicos caracterizar la duración de la enfermedad isquémica como en los diferentes grupos de células in vitro. Este artículo aborda los plazos del OGD que inducen proliferación medido por inmunofluorescencia utilizando la proliferación de la célula Nuclear antígeno (PCNA), reactividad astrositos y morfología hipertrófica. Además de la proliferación, astrocitos experimentan la energía y el estrés oxidativo y responden a inclinacion por liberación de factores solubles en el medio celular. Este medio puede ser recogido y utilizado para analizar los efectos de moléculas liberadas por astrocitos en cultivos neuronales primarios sin interacción de célula a célula. En Resumen, este modelo de cultura de célula primaria puede utilizarse eficientemente para entender el papel de los astrocitos aislados tras lesiones.

Una de las principales preocupaciones de la cultura astrocytic primaria es la presencia de otras células como las neuronas, fibroblastos, oligodendrocitos y microglia. En la figura 1, las células aisladas de cortezas de rata tenían cambios de medios de comunicación cada 3 días y ya sea no tratada o tratada con agregado LME de 1 h. 24 h más tarde, las células immunostained para GFAP y contratinción con DAPI. Las células no tratadas mostraron un promedio de 39%...

Accidente cerebrovascular isquémico es un evento complejo en el que la contribución específica de los astrocitos de la región del cerebro afectada expuesta a privación de glucosa oxígeno (OGD) es difícil de estudiar. Este artículo presenta una metodología para obtener aislados astrocitos y estudiar su reactividad y la proliferación en condiciones OGD.

Control de reactividad astrositos y proliferación in Vitro bajo condiciones isquémicas

Ischemic stroke is a complex brain injury caused by a thrombus or embolus obstructing blood flow to parts of the brain. This leads to deprivation of ...

El siguiente protocolo tiene como objetivo mostrar el aislamiento de astrocitos primarios a partir de cerebros de ratas jóvenes para realizar la privación de oxígeno y glucosa, o OGD. La exposición de astrocitos purificados a un entorno privado de oxígeno y glucosa es un módulo que nos permite evaluar la respuesta a algunas de las condiciones presentes en los accidentes cerebrovasculares isquémicos. Los cambios metodológicos tras la exposición a la privación de oxígeno y glucosa pueden observarse y medirse utilizando marcadores selectivos de astrocitos, como GFAP.En resumen, estas células aisladas expuestas a condiciones similares a la isquemia pueden utilizarse para probar nuevas vías activadas en condiciones hipóxicas y otros fármacos que protegen contra el accidente cerebrovascular isquémico. En esta parte del protocolo, los astrocitos se aislarán de los cortices de ratas lactantes. El objetivo de este procedimiento es obtener un cultivo primario de células astrocíticas para realizar experimentos de privación de oxígeno y glucosa.Los materiales para este procedimiento son los siguientes: esterilice todos los materiales en autoclave antes de utilizarlos en este procedimiento. Exp

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Este artículo describe un nuevo protocolo y el reactivo conjunto diseñado para la medición sensible de los efectos neurotóxicos de los compuestos y los tratamientos en co-cultivos de neuronas y astrocitos utilizando el análisis de contenido de alta. Los resultados demuestran que el análisis de contenido de alta tecnología representa una apasionante novela para la evaluación de la neurotoxicidad.

A neuronales y astrocitos Co-cultivo de ensayo para el análisis de alto contenido de neurotoxicidad

Los astrocitos se han reconocido para ser versátiles células que participan en los procesos biológicos fundamentales que son esenciales para el desarrollo normal del cerebro y la función, y la reparación del sistema nervioso central. Aquí presentamos un procedimiento rápido para obtener cultivos puros de astrocitos de ratón para estudiar la biología de esta clase importante de centrales células del sistema nervioso.

Aislamiento y cultivo de astrocitos corticales de ratones

Aquí se describe una adaptación de los protocolos utilizados para inducir la plasticidad homeostática en las neuronas para el estudio de la plasticidad de los receptores acoplados a proteínas G astrocíticos. Recientemente se utiliza para examinar los cambios en el grupo I mGluRs astrocítica en ratones jóvenes, el método se puede aplicar para medir la escala de varios GPCRs astrocitos, en el tejido de los ratones adultos in situ e in vivo, y para obtener una mejor apreciación de la sensibilidad...

La inducción de la plasticidad de astrocítico Receptores por manipulación de Neuronales cocción Precios

Los astrocitos fenotípicamente salvajes y las células madre neurales recolectadas de ratones modificados con alelos oncogénicos condicionales floxados y transformados a través de la recombinación mediada por Cre viral se pueden utilizar para modelar la patogénesis del astrocitoma in vitro e in vivo mediante la inyección ortotópica de células transformadas en cerebros de compañeros de camada singénicos e inmunocompetentes.

Modelado astrocitoma Patogénesis In Vitro Y En Vivo Uso cortical astrocitos o células troncales nerviosas de ratones condicionales, Genéticamente Manipulados

Los astrocitos en el SNC cambian sus propiedades funcionales y estructurales en respuesta a estímulos dañinos. Este informe presenta un protocolo para la evaluación de la morfología tridimensional de los astrocitos en condiciones de enfermedad o después de intervenciones terapéuticas.

Protocolo para tridimensional confocal morfométrico Análisis de astrocitos

Los astrocitos son uno de los jugadores clave más importantes en el sistema nervioso central (SNC). Aquí, estamos reportando un método práctico de protocolo de cultivo de astrocitos del hipocampo sexado con el fin de estudiar los mecanismos que subyacen a la función de los astrocitos en cachorros recién nacidos masculinos y femeninos después de la isquemia in vitro.

Diferencias de sexo en el ratón del hipocampo después de astrocitos<em&gt; In-Vitro</em&gt; isquemia

El mantenimiento de la cobertura de la barrera hematoencefálica es clave para la homeostasis del sistema nervioso central. Este protocolo describe técnicas in vitro para delinear los procesos fundamentales y patológicos que modulan la cobertura de la barrera hematoencefálica.

Ensayos in vitro para evaluar la formación y la interrupción de los vasos sanguíneos de barrera hematoencefálica

El protocolo AWESAM descrito aquí es óptimo para el cultivo de astrocitos murinos en aislamiento de otras células del cerebro de una manera rápida, sencilla y de bajo costo. Los astrocitos AWESAM exhibición espontáneo Ca2 + señalización, morfología y gene expresión perfiles similares a los astrocitos en vivo.

Cultivo In Vivo-como astrocitos murinos mediante el protocolo AWESAM rápido, sencillo y barato

Aquí, presentamos un enfoque simple utilizando medios de cultivo específicos que permiten el establecimiento de culturas enriquecidas con neuronas y astrocitos, o cultivos de neurona-glia de la corteza embrionaria, con alto rendimiento y reproducibilidad.

Un modelo de cultivo celular para estudiar el papel de las interacciones de neuronas y glia en isquemia

Aquí describimos un protocolo que facilita la diferenciación de células madre pluripotentes inducidas humanas en astrocitos funcionales específicos del prosencéfalo. Esto permite investigar el papel de las células gliales en la patogénesis de los trastornos del neurodesarrollo, como el síndrome del cromosoma X frágil, y modelar otros trastornos cerebrales.

Generación y caracterización de astrocitos derivados de células madre pluripotentes inducidas humanamente que carecen de ribonucleoproteína mensajera X frágil

Este protocolo proporciona un método integrado que incluye la administración viral, la implantación de optrode, la inducción fototrombótica, el registro simultáneo de la actividad de astrocitos y neuronales, y la estimulación optogenética de los astrocitos. Este método integrado tiene como objetivo proporcionar una investigación simultánea de la relación astrocito-neurona a lo largo de las etapas agudas a crónicas del ictus isquémico.

Un método integrado para el modelado fototrombótico del ictus y el registro in vivo de la actividad neuronal y astrocítica en ratones en comportamiento

Aprende a aislar astrocitos primarios de cerebros de ratas neonatales para estudiar su respuesta a la privación de oxígeno y glucosa, un modelo de isquemia cerebral. Este método permite evaluar cambios en reactividad y proliferación celular mediante marcadores como GFAP.

Control de reactividad astrositos y proliferación in Vitro bajo condiciones isquémicas

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