Name: Lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia In Vivo Modelo de proliferación de células musculares lisas y función endotelial (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Aprende a crear un modelo murino de lesión aórtica por aplastamiento para evaluar simultáneamente la proliferación de células musculares lisas vasculares y la reendotelización en C57BL/6. Este método permite estudiar los mecanismos de la reestenosis tras intervenciones cardiovasculares.

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Agradecemos a Hsia Ru-ching PhD, de la Facultad de Microscopía Electrónica de la Facultad de Medicina de la Universidad de Maryland, por su apoyo técnico en el procesamiento de las muestras de microscopía electrónica de barrido.

Declaración de Ética: Los protocolos para el manejo de animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales Institucionales (IACUC) de la Universidad de Maryland (protocolo número 0416009) y conducido de acuerdo con los estándares de AAALAC-International. 1. Procedimiento Quirúrgico <ol><li> Técnica Anestésica <ol><li> Esterilizar todos los instrumentos utilizados en la cirugía de supervivencia con esterilización a vapor a 121 ° C durante 30 min. </li><li> Inducir la anestesia a través de un tanque de inducción con 100% de O 2 y 2,5% de isoflurano entregado a través de vaporizador de precisión. Después de la inducción, suspender el isoflurano y enjuagar la cámara con O 2 . Mantener la anestesia con 1,5-2% de isoflurano vía mascarilla y 1 L / min de O 2 por inhalación. </li><li> Conecte la cámara de inducción y la máscara facial a un eliminador de carbón para adsorción de gases residuales para proteger al personal. Asegurar un plano anestésico adecuadoQue no hay respuesta a los estímulos nocivos (pinzamiento del dedo). </li><li> Crear un campo operatorio que consiste en una bandeja quirúrgica con almohadilla isotérmica para proporcionar soporte térmico durante la cirugía. Una almohadilla isotérmica adicional proporcionará apoyo térmico a los animales en su jaula de recuperación. </li></ol></li><li> Preparación de Animales <ol><li> Lleve a cabo la siguiente investigación en ratones C57BL / 6 machos de 10-12 semanas de edad. </li><li> Quitar el pelo en la superficie abdominal ventral del animal desde el esternón a la región inguinal con un agente depilatorio o una podadora eléctrica con una cuchilla número 40. <ol><li> En caso de agente depilatorio, aplicar este compuesto en el área quirúrgica durante 2-3 minutos y luego eliminarlo con algodón. Utilizamos un compuesto comercialmente disponible de hidróxido de calcio e hidróxido de sodio. </li></ol></li><li> Preparar el área sobre el hombro con alcohol al 70% e inyectar por vía subcutánea carprofeno (5 mg / kg) con una aguja calibre 25 o menor. EstaEl tratamiento proporcionará analgesia postoperatoria para el animal. </li><li> Transferir el animal al campo quirúrgico y colocarlo en decúbito dorsal. </li><li> Prepare el sitio quirúrgico frotando 8-12% de providone-yodo con un aplicador de algodón limpio o gasa de algodón. A continuación, enjuague la piel dos veces con alcohol al 70%. </li><li> Coloque lubricante ocular en ambos ojos para reducir la incidencia de desecación corneal. Cubrir el sitio quirúrgico con un paño estéril. </li></ol></li><li> Técnica Operativa <ol><li> Realizar una incisión mediana de laparotomía abdominal de aproximadamente 2-2.5 cm de largo con un bisturí comenzando inmediatamente caudal el proceso xifoide y extendiéndose hacia la pelvis. </li><li> Movilizar el intestino delgado y el duodeno y reflejar lateralmente a la derecha. Enrolle una tira de algodón estéril calibrado y empapado con solución salina estéril para inyección para permitir el embalaje de las vísceras para mejorar la exposición. </li><li> Con el intestino delgado movilizado hacia el lado derecho delAbdomen, exponen el retroperitoneo y exponen la aorta abdominal de la vena renal izquierda a la bifurcación aórtica ( Figura 1 ). </li><li> Con un aplicador estéril con punta de algodón, entregar 30 machos consecutivos, cada cinco segundos de duración. </li><li> Retire el empaque y permita que las vísceras vuelvan a su posición nativa. </li><li> Cerrar la fascia con una sutura de monofilamento absorbible 4-0 (polidioxanona). La piel se cierra con una sutura de monofilamento no absorbible 6-0 (nylon). </li></ol></li><li> Recuperación y atención después del procedimiento <ol><li> Después del procedimiento, coloque el animal en una jaula de recuperación con ropa de cama limpia en una almohadilla isotérmica para continuar el apoyo térmico hasta que el animal pueda moverse normalmente. No deje al animal desatendido hasta que demuestre la capacidad de mantener la decúbito esternal. </li><li> Vigilar el animal cada hora durante las primeras 4 h después de la cirugía. Una vez que el animal está ambulando normalmente regreso<html> T a la sala de cría asignada. El animal no se alojará en compañía de otro animal hasta que se haya recuperado completamente. </li><li> Vigilar el animal dos veces al día durante las primeras 72 h después de la cirugía y al menos 3 veces a la semana después. El monitoreo incluye el pesaje del animal tres veces a la semana. </li><li> Administrar carpofen (5 mg / kg) por vía subcutánea dos veces al día durante las primeras 72 h después de la cirugía. </li></ol></li></ol> 2. Adquisición de tejidos <ol><li> Método de Eutanasia <ol><li> Eutanizar a los animales en puntos de tiempo predeterminados. </li><li> Inducir la anestesia a través de un tanque de inducción con 100% de O 2 y 2,5% de isoflurano entregado a través de vaporizador de precisión. <ol><li> Para estudiar la integridad del endotelio, administre el tinte azul de Evans al animal. NOTA: Evans Blue es un colorante azo cargado negativamente con una alta afinidad de unión para la albúmina y sólo puede manchar los vasos sanguíneos en ausencia de un endotelio intactoS = &quot;xref&quot;&gt; 6. </li><li> Para los estudios de integridad endotelial, en el momento de la eutanasia, perfundir a los animales con 5 ml de colorante Evans Blue 0,3% seguido por 5 ml de PBS a presión fisiológica durante 5 min. El animal se mantiene en un plano quirúrgico de anestesia durante el procedimiento de perfusión. </li></ol></li><li> Después de lograr un plano anestésico profundo, abra el pecho con una esternotomía. Hacer una laceración en la aurícula derecha para permitir el drenaje de la sangre del animal y acceder al ventrículo izquierdo se accede con una aguja de 21 G e inyectar solución salina tamponada con fosfato (PBS) hasta que el efluente de la aurícula derecha sea claro. </li><li> Después de la perfusión con PBS, entrar en el abdomen a través de una incisión de línea media. </li><li> Una vez más, movilice el intestino delgado hacia el lado derecho del abdomen exponiendo la aorta infrarrenal, diseccione agudamente la aorta de los tejidos adyacentes y extráigala de la vena renal izquierda a la bifurcación aórtica. </li><li> Almacenar la aorta extirpada en un 4% paraformalEhyde hasta que se produzca el procesamiento del tejido. <ol><li> Para los estudios de integridad endotelial, abrir la aorta longitudinalmente y fijarla a una lámina de cera exponiendo la totalidad de la superficie luminal 6 . Realizar una evaluación cualitativa de la integridad endotelial por el grado de tinción con colorante Evans Blue 6 . </li><li> Para otros ensayos histológicos, corte transversalmente la aorta e incorpórela en los compuestos de temperatura óptima de corte (OCT) según lo determinado por el método histológico a utilizar 7 . </li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis+and+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis.</a> Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).</li>
<li>Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+angiogenesis%2C+arterial+stenosis%2C+atherosclerosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).</li>
<li>Baker, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparanase+Alters+Arterial+Structure%2C+Mechanics%2C+and+Repair+Following+Endovascular+Stenting+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Heparanase Alters Arterial Structure, Mechanics, and Repair Following Endovascular Stenting in Mice.</a> Circ Res. 104 (3), 380-387 (2009).</li>
<li>Petrov, L., Laurila, H., Hayry, P., Vamvakopoulos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+aortic+angioplasty+for+genomic+studies+of+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">A mouse model of aortic angioplasty for genomic studies of neointimal hyperplasia.</a> J Vasc Res. 42 (4), 292-300 (2005).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+of+recipient+origin+mediate+intimal+expansion+after+aortic+allotransplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Path%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells of recipient origin mediate intimal expansion after aortic allotransplantation in mice.</a> Am J Path. 158 (6), 1943-1947 (2001).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> J Vis Exp. (73), e50062(2013).</li>
<li>Turbett, G. R., Sellner, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+optimal+cutting+temperature+compound+can+inhibit+amplification+by+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">The use of optimal cutting temperature compound can inhibit amplification by polymerase chain reaction.</a> Diagn Mol Pathol. 6 (5), 298-303 (1997).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+Verhoeff%27s+elastica+stain%3A+a+convenient+stain+for+myelin+sheaths%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of Verhoeff's elastica stain: a convenient stain for myelin sheaths.</a> Histochem. 62 (3), 233-247 (1979).</li>
<li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li>
<li>Nelson, P. R., Yamamura, S., Mureebe, L., Itoh, H., Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+migration+and+proliferation+are+mediated+by+distinct+phases+of+activation+of+the+intracellular+messenger+mitogen-activated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell migration and proliferation are mediated by distinct phases of activation of the intracellular messenger mitogen-activated protein kinase.</a> J Vasc Surg. 27 (1), 117-125 (1998).</li>
<li>Rzucidlo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+regulating+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways regulating vascular smooth muscle cell differentiation.</a> Vascular. 17, Suppl 1. S15-S20 (2009).</li>
<li>Aoki, T., Sumii, T., Mori, T., Wang, X., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+disruption+and+matrix+metalloproteinase-9+expression+during+reperfusion+injury%3A+mechanical+versus+embolic+focal+ischemia+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier disruption and matrix metalloproteinase-9 expression during reperfusion injury: mechanical versus embolic focal ischemia in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 33 (11), 2711-2717 (2002).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MARCKS+Signaling+Differentially+Regulates+Vascular+Smooth+Muscle+and+Endothelial+Cell+Proliferation+through+a+KIS-%2C+p27kip1-+Dependent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">MARCKS Signaling Differentially Regulates Vascular Smooth Muscle and Endothelial Cell Proliferation through a KIS-, p27kip1- Dependent Mechanism.</a> PLoS One. 10 (11), e0141397(2015).</li>
<li>Banai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+ear+model+of+injury-induced+arterial+smooth-muscle+cell-proliferation+-+kinetics%2C+reproducibility%2C+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit ear model of injury-induced arterial smooth-muscle cell-proliferation - kinetics, reproducibility, and implications.</a> Circ Res. 69 (3), 748-756 (1991).</li>
</ol>

Este trabajo fue financiado por el Departamento de Asuntos de Veteranos de Desarrollo de la Carrera de Premio (1IK2BX001553-01) (TSM) y la Vascular Cures EJ Wylie Scholarship (TSM).

Hemos caracterizado los efectos de un modelo de lesión aórtica murina que resulta en hiperplasia medial y disfunción de la barrera endotelial. Desprendimiento parcial de la EC a lo largo de la aorta íntima acompañó a la pérdida de contacto célula-célula y la mejora de las protrusiones celulares. De manera correspondiente, la función de la barrera endotelial se deterioró significativamente, lo que estimuló las vías de señalización sensibles a mitógenos, dando lugar a la proliferación de VSMC y el engrosamiento de la pare...

Restenosis Después de los procedimientos cardiovasculares (cirugía de bypass, angioplastia o stent) es un problema significativo que reduce la durabilidad de estos procedimientos. Todos los procedimientos de revascularización están plagados de reestenosis. Las estrategias actuales para prevenir la reestenosis (stents liberadores de fármacos y globos revestidos con fármacos) inhiben tanto la célula muscular lisa vascular (CMLV) como la proliferación de células endoteliales (EC). En consecuencia, estas intervenciones previenen la reestenosis mediada por VSMC, pero también previenen la regeneración del endotelio. Sin un endotelio intacto, se requiere que los pacientes estén en potentes agentes antiplaquetarios para disminuir el riesgo de trombosis in situ con riesgo de complicaciones hemorrágicas. Una terapia ideal inhibiría la proliferación de VSMC mientras que promovía la regeneración del endotelio. Por lo tanto, existe la necesidad de estudiar simultáneamente la proliferación VSMC y la función de barrera endotelial in vivo . En la actualidad, hayModelos de ratón de restenosis 1 . Estos modelos incluyen la ligadura de la carótida y la lesión del hilo de la arteria femoral 2 . Los modelos aórticos incluyen la colocación del stent 3 , lesión por globo 4 y aloinjerto aórtico 5 . Todos los modelos actuales son limitados. La ligadura carotídea genera una lesión neoíntima mediada por flujo y no tiene lesión endotelial. Además, las arterias carótida y femoral tienen muchas capas de células plegadas menos que los vasos humanos, limitando su valor de traducción. La aorta del ratón, de aproximadamente 1,3 mm de diámetro, es el único vaso que se aproxima a una arteria humana (coronaria) clínicamente relevante (3). A pesar del potencial de traslación de los modelos aórticos murinos de la enfermedad, los modelos actuales tienen limitaciones. Estos modelos requieren habilidades microquirúrgicas avanzadas y equipos especializados tales como globos de angioplastia y stents. Aquí presentamosUna técnica nueva y reproducible para inducir simultáneamente la proliferación de VSMC y alterar la función de la barrera endotelial.

<table><tbody><tr><td>Lubricante ocular</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>Agentes farmacéuticos</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>Agentes farmacéuticos</td></tr><tr><td>Carprofeno</td><td>Zoetis</td><td>26357</td><td>Agentes farmacéuticos</td></tr><tr><td>Vaporizador de precisión</td><td>Summit Medical</td><td>10675</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Eliminador de carbón vegetal</td><td>Bickford Inc.</td><td>80120</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Almohadilla isotérmica</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-7053-R</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Aplicador estéril con punta de algodón</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-124</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>4-0 sutura monofilamento absorbible&nbsp;</td><td>Ethicon, Inc</td><td>J310</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>5-0 sutura de monofilamento no absorbible</td><td>Ethicon,Inc</td><td>1666</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Aguja de calibre 21 x 1 pulgada</td><td>BD Biosciences</td><td>305165</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Aguja de calibre 25 x 1 pulgada&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>305125</td><td>Suministros quirúrgicos</td></tr><tr><td>Esterilizador seco</td><td>Cellpoint&nbsp;</td><td>7770</td><td>Suministros</td></tr><tr><td>quirúrgicos Tijeras finas Herramientas de</td><td>ciencia fina</td><td>14058-09</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Pinzas Adson</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>11006-12</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Pinzas finas Dumont #5 Herramientas de ciencia fina</td><td></td><td>11254-20</td><td>Instrumental quirúrgico</td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Vannas Filo de corte de 3 mm</td><td>Herramientas de ciencia fina</td><td>15000-00</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Destornillador de agujas</td><td>Fine Science Tools</td><td>91201-13</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Mango de bisturí #4</td><td>Fine Science Tools</td><td>10004-13</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>Hojas de bisturí #10</td><td>Fine Science Tools</td><td>10010-00</td><td>Instrumentos quirúrgicos</td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Lonza</td><td>17-516F</td><td>Reactivos para el procesamiento de tejidos</td></tr><tr><td>Evans Blue</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>Reactivos para el procesamiento</td></tr><tr><td>de tejidos Paraformaldehído</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>Reactivos para el procesamiento de tejidos</td></tr><tr><td>Cera para modelar</td><td>Bego</td><td>40001</td><td>Reactivos para el procesamiento de tejidos</td></tr><tr><td>Compuesto OCT</td><td>Tissue-Tek Sakura</td><td>4583</td><td>Reactivos para procesamiento</td></tr><tr><td>de tejidos solución de hematoxilina de Mayer</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS16</td><td>Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr><tr><td>solución de eosina Y alcohólica&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>HT110316 Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr><tr><td>Kit de tinción de elastina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT25A</td><td>Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr><tr><td>Click-it Edu Alexa-488 Kit de imagen</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr><tr><td>Anticuerpo Anti-Erk1/2</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>4695</td><td>Reactivos para inmunohistología análisis</td></tr><tr><td>Anticuerpo antifosfo-Erk1/2</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>4370</td><td>Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-p27kip1</td><td>Tecnología de señalización celular</td><td>3698</td><td>Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr><tr><td>Ácido tricloroacético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9159</td><td>Reactivos para análisis inmunohistológico</td></tr></tbody></table>

lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia<em&gt; in vivo</em&gt; modelo de proliferación de células musculares lisas y función endotelial

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

La reconstrucción arterial, ya sea angioplastia o cirugía de derivación, implica un traumatismo iatrogénico que causa disrupción endotelial y proliferación de células de músculo liso vascular (VSMC). Los modelos murinos comunes estudian vasos pequeños tales como las arterias carótida y femoral. Aquí se describe un sistema in vivo en el que tanto la proliferación VSMC y la función de la barrera endotelial pueden ser evaluados simultáneamente en un vaso grande. Se estudió la respuesta aórtica infrarrenal a la lesión en C57BL / 6 ratones. La aorta se lesionó de la vena renal izquierda a la bifurcación aórtica por 30 trituraciones transmurales de 5 segundos de duración con un aplicador con punta de algodón. Los cambios morfológicos se evaluaron con histología convencional. El grosor de la pared de la aorta se midió desde la superficie luminal hasta la adventicia. EdU integración y contador tinción con DAPI y alfa-actina se utilizó para demostrar VSMC proliferación. La activación de ERK1 / 2, un moderador conocido de la formación de hiperplasia intimal, fue disuadidaExtraído por Western Blot. El efecto de la inflamación se determinó mediante inmunohistoquímica para células B, células T y macrófagos . Se visualizaron secciones frontales de endotelio con microscopía electrónica de barrido (SEM). La función de la barrera endotelial se determinó con tinción con Evans Blue. La lesión transmural resultó en un espesamiento de la pared aórtica. Esta lesión inducida por la proliferación VSMC, más prominentemente a los 3 días después de la lesión, y la activación temprana de ERK1 / 2 y disminución de p27 kip1 expresión. La lesión no resultó en aumento de células B, células T o infiltración de macrófagos en la pared del vaso. La lesión causó la desnudación parcial de las células endoteliales y la pérdida del contacto célula-célula. La lesión resultó en una pérdida significativa de la función de la barrera endotelial, que regresó a la línea de base después de siete días. El modelo transmural de lesión aórtica romana transmural proporciona un sistema eficiente para estudiar simultáneamente tanto la proliferación VSMC como la función de la barrera endotelial en un vaso grande.

Se seccionaron las secciones transversales aorta incrustadas en PTU y se tiñeron con hematoxilina y eosina luego se tiñeron con tinción de Verhoeff-Van Gieson (VVG) para identificar la lámina elástica interna y externa 7 . La lesión por aplastamiento indujo el espesamiento de la pared aórtica en comparación con las aortas de los animales tratados con un procedimiento simulado (laparotomía y movilización del intestino delgado solo). El grosor de la pared, evaluado ...

La reestenosis después de los procedimientos cardiovasculares (cirugía de bypass, angioplastia o stent) es un problema significativo que reduce la durabilidad de estos procedimientos. Una terapia ideal inhibiría la proliferación de células de músculo liso (VSMC) mientras promovía la regeneración del endotelio. Describimos un modelo para la evaluación simultánea de la proliferación VSMC y la función endotelial in vivo.

Lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia<em&gt; In Vivo</em&gt; Modelo de proliferación de células musculares lisas y función endotelial

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

El objetivo general de este procedimiento es crear un modelo animal que permita la evaluación simultánea de la proliferación de células musculares lisas vasculares y la reendotelización. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biología vascular, como por ejemplo, ¿cuál es el mecanismo de la restenosis tras intervenciones vasculares? Esta técnica permite la evaluación simultánea in vivo de la proliferación de células musculares lisas vasculares y la reendotelización.Ambos eventos clave potencian o atenúan la restenosis tras intervenciones vasculares. El procedimiento será demostrado por el Dr. Dan Yu, un investigador posdoctoral de mi laboratorio. Tras confirmar la ausencia de respuesta al pellizco en el dedo del pie, retire el vello del abdomen ventral de un ratón macho C57BL/6 anestesiado, de 10 a 12 semanas de edad, desde el esternón hasta la región inguinal.A continuación, desinfecte el área del hombro con etanol al 70 % y utilice una aguja de 25 gauge o más pequeña para administrar un analgésico adecuado. Luego, coloque al animal en posición supina sobre una bandeja quirúrgica calentada por una almohadilla isotérmica. Limpie el sitio quirúrgico co

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Investigación

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Biología

Demostramos un nuevo modelo ligadura arterial en el músculo spinotrapezius murino, incluyendo un procedimiento paso a paso y la descripción de la instrumentación requerida. Se describe la cirugía y las medidas de resultado relevantes relacionados con la remodelación de la red vascular y vasodilatación funcional utilizando microscopía intravital y confocal.

Modelo murino Spinotrapezius para evaluar el impacto de la ligadura arteriolar en la función microvascular y Remodelación

Se describe un modelo de implantación de un stent en la arteria carótida del ratón. En comparación con otros métodos similares, este procedimiento es muy rápido, simple y accesible, que ofrece la posibilidad de estudiar de una manera conveniente la reacción de la pared vascular a diferentes stents liberadores de fármacos y los mecanismos moleculares de la restenosis.

Un modelo murino de la implantación de un stent en la arteria carótida para el Estudio de la reestenosis

Modificaciones histológicas y bioquímicas después de aneurisma endoprótesis exclusión aún no están claros. Se describe un nuevo modelo de implantación de endoprótesis en un aneurisma murino. A través del análisis de trombos con y sin circulación de interfaz de flujo de sangre persistente, y la nueva evaluación de biomateriales endovascular, este modelo nos ayudará a entender mejor la exclusión endovascular del aneurisma patobiología.

Un modelo murino Nueva endovascular de aneurismas aórticos

La comprensión de los mecanismos celulares y moleculares de la re-endotelización después de una lesión arterial denudación es de suma importancia en la prevención de la trombosis y la reestenosis de las arterias. Aquí se describe un protocolo para la denudación lesiones arteriales reproducible de la aorta abdominal infrarrenal. El procedimiento fue desarrollado para investigar los mecanismos subyacentes que regulan la regeneración endotelial utilizando modelos de ratón.

Reproducible lesión arterial Denudación por pinzamiento aórtico abdominal infrarrenal en un modelo murino

Protocolos para el estudio de la aorta murina embrionaria y perinatal mediante análisis clonal de en vivo y asignación de destino, explantes aórticos y aislada del músculo liso células se detallan aquí. Estos diversos enfoques facilitan la investigación de la morfogénesis de la aorta embrionaria y perinatal en el desarrollo normal y la patogénesis en la enfermedad.

Utilizan en Vivo y tejido y célula explante enfoques para el estudio de la morfogénesis y la patogenesia de la Aorta embrionaria y Perinatal

Este artículo demuestra un modelo murino para el desarrollo de la hiperplasia myointimal (MH) después de lesión de globo.

Lesión basada en globo para inducir la hiperplasia Myointimal de la Aorta Abdominal de ratón

Este artículo describe una metodología detallada del uso de un caucho de silicón radiopaco con base de plomo para inundar la vasculatura murina para la cuantificación del diámetro aórtico en un modelo murino de aneurisma aórtico y disección.

Análisis de Micro-CT cuantitativa de Aortopathy en un modelo murino de disección y aneurisma de la aorta inducida por β-oxidasa

Aquí, presentamos un protocolo de trasplante aórtico heterotópico en ratones utilizando la técnica del manguito no sutura en un modelo de murina cervical. Este modelo se puede utilizar para estudiar la patología subyacente de la vasculopatía por aloinjerto crónico (CAV) y puede ayudar a evaluar nuevos agentes terapéuticos para prevenir su formación.

Modelo de trasplante de aórtica cervical murino utilizando una técnica de manguito no sutura modificada

Describimos un protocolo quirúrgico para inducir consistentemente aneurismas de la aorta torácica descendentes robustos en ratones. El procedimiento consiste en la toracotomía izquierda, la exposición a la aorta torácica y la colocación de una esponja empapada en elastasa pancreática porcina en la pared aórtica.

Modelo Quirúrgico Murino de Aneurisma aórtico torácico descendente fortuito tópico

El presente protocolo describe un método quirúrgico estandarizado para la inducción de aneurismas carotídeos en un modelo murino a través de una sola operación quirúrgica.

Un modelo murino de formación de aneurismas carotídeos

Aquí presentamos un modelo murino para la anastomosis de la arteria femoral, ofreciendo a los investigadores un valioso modelo animal para estudiar y simular la estenosis anastomótica vascular. Este desarrollo es crucial para avanzar en nuestra comprensión de la fisiopatología subyacente a esta afección y facilitar una investigación más precisa y eficaz de las enfermedades vasculares.

Desarrollo de un modelo murino para la estenosis anastomótica de la arteria femoral

Aprende a crear un modelo murino de lesión aórtica por aplastamiento para evaluar simultáneamente la proliferación de células musculares lisas vasculares y la reendotelización en C57BL/6. Este método permite estudiar los mecanismos de la reestenosis tras intervenciones cardiovasculares.

Lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia In Vivo Modelo de proliferación de células musculares lisas y función endotelial (Video) | JoVE Journal

Lesión por aplastamiento aórtico murino: una eficacia

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