Targeted In situ mutagénesis de histona genes en la levadura en ciernes

El objetivo general de este procedimiento es generar mutaciones específicas en los genes de histonas en sus ubicaciones cromosómicas endógenas en células de levadura en ciernes. Este método se puede utilizar para determinar la contribución de residuos de histonas específicas en una variedad de procesos que utilizan cromatina como sustrato, como la transcripción del ADN, cada combinación. La principal ventaja de esta técnica es que se pueden dirigir genes específicos de histonas para la mutagénesis, a pesar de que en la levadura, cada proteína de histonas está codificada por dos genes no alélicos altamente homólogos.

Después de generar una cepa de levadura con el gen de la histona diana eliminado y reemplazado por URA3, genere productos de PCR para dos fragmentos parcialmente superpuestos del gen de la histona diana configurando la siguiente reacción para la primera mitad del gen. Para la segunda mitad del gen, configure una reacción de PCR similar utilizando diferentes cebadores. Coloque las reacciones en un termociclador y configure el siguiente programa.