Name: La medición y la modificación de acoplamiento de unidad en Male Drosophila melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Aprende a medir y manipular la unidad de apareamiento en machos de Drosophila melanogaster mediante un ensayo de saciedad 2-D de alto rendimiento. Este método integra herramientas genéticas avanzadas para estudiar los mecanismos neuronales y genéticos de la motivación.

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Los autores agradecen a Mike Crickmore, Dragana Rogulja y Michelle Frank por sus comentarios sobre el manuscrito. Pavel Gorelik proporcionó soporte técnico para la fabricación de las arenas conductuales. Este trabajo se llevó a cabo en el laboratorio de Mike Crickmore y también cuenta con el apoyo de la Fundación Whitehall (Investigadora principal: Dragana Rogulja). S.X.Z. es becario Stuart H.Q. y Victoria Quan en la Facultad de Medicina de Harvard.

NOTA: Este protocolo describe la preparación (secciones 1 - 3), ejecución (Sección 4), y el análisis (Sección 4) de los ensayos de saciedad en 2-D. Luego, utilizando la estimulación dopaminérgica como ejemplo, la sección 5 muestra la forma de combinar la estimulación thermogenetic con los ensayos de saciedad 2-D para inducir hipersexualidad. Sección 6 describe 3 maneras de verificar los resultados de los ensayos de saciedad en 2-D. Por último, la sección 7 muestra cómo medir la recuperación de la unidad de apareamiento en las moscas macho. 1. La fabricación de 8 y 32 de la cámara de Arenas del Comportamiento NOTA: Cada escenario conductual consiste en varias capas de láminas de plástico cortadas con láser se mantienen unidas por tornillos hexagonales y tuercas de mariposa en cada una de las cuatro esquinas (Figura 1A). <ol><li> Fabricar las capas de la arena. Fabricar cada capa usando un cortador láser para cortar láminas de plástico acrílico a la forma apropiada (véase la figura 1B, 1C de los productos). NOTA: Muchos institutio investigaciónns tienen cortadoras láser en sus talleres de máquinas o espacios fabricante. Si la institución tiene acceso a un cortador láser, continúe con los siguientes pasos. Si no es así, a continuación, siga las instrucciones del paso 1.2 en su lugar. <ol><li> Para cada capa, abra el patrón de diseño en el software de la cortadora láser. NOTA: Los diseños se pueden encontrar en los archivos PDF con nombres correspondientes (por ejemplo, 8-Sala Arena - Capa 2 - Doors.pdf) en el material suplementario 1. Este archivo también contiene anotaciones para el tipo de plástico que se utiliza (por ejemplo, 1 / 8 pulgadas (es decir, 3,175 mm) acrílico transparente). El espesor exacto de cada capa no es crítico. El requisito principal es permitir a 0,12 pulgadas (3 mm) o más de espacio vertical libre en las cámaras. </li><li> Ajustar los ajustes del láser (energía, enfoque, etc.) para el tipo y grosor de plástico para ser utilizado. Coloque objetos de plástico en la cama cortador láser y ejecutar el cortador láser. NOTA: Esta configuración puede variar ampliamente basado en el láser cutteModelo R y la fuerza de su láser. Encuentra los ajustes adecuados en función de la experiencia pasada o al hacer cortes de prueba en el plástico de desecho. Los grabados profundos hexagonales se incluyen en el diseño al recreo las cabezas de los tornillos hexagonales. Esta característica permite una sola mano apriete de las tuercas de mariposa y permite a los escenarios para descansar plana sobre el banco (sin sobresalir cabezas de los tornillos). Sin embargo, haciendo grabados profundos es a menudo difícil de lograr, y requiere mucho tiempo, usando un cortador láser. Este paso es opcional y se puede omitir sin afectar los resultados de comportamiento. </li><li> Al cortar el marco de la puerta (Capa 2, Figura 1 A), también utilizar la configuración de láser adecuados para grabar los números de cámara incluye en el diseño (como en la Figura 1B, 1C). </li></ol></li><li> Hacer un pedido con un fabricante de corte por láser en línea. Cargar todos los archivos de diseño de PDF para la arena de 8 y / o 32 de cámara y especificar el tipo de material (por ejemplo, 1/8 de pulgada (es decir, 3,175 mm) CLEAr acrílico) sobre la base de las anotaciones en los archivos. Los resultados aparecerán como en las figuras 1B (arena de 8 cámaras) y 1C (arena de 32 cámaras). </li><li> Montar arenas utilizando cuatro tornillos de cabeza hexagonal y cuatro tuercas de mariposa para alinear y mantener unidas las capas de plástico (Figura 1A). Las arenas aparecerá como en la figura 1D, 1E (8-cámara) y la Figura 1F, 1G (32 cámaras). NOTA: La pared de alimentos (Capa 4 en la figura 1A) se utiliza sólo para ensayos de saciedad 2-D y se omite en arenas 32 de cámara, que se utilizan en ensayos de cortejo. </li></ol> 2. Preparación de Alimentos para 2-D saciedad Ensayo NOTA: Debido a un ensayo de saciedad 2-D se extiende por 4,5 h, la mosca de alimentos se utiliza en la arena para proporcionar la nutrición y el agua. Este protocolo utiliza, pero no se limita a, la harina de maíz-agar convencional vuela alimentos. <ol><li> Parcialmente montar el campo de la saciedad 2-D (8-cámara) con capas 3 - 6(véase la Figura 1A para asignaciones de capa) y apretarlo con tuercas de mariposa y tornillos hexagonales. </li><li> Coloque los alimentos frescos mosca en una botella limpia, apto para microondas. Añadir agua suficiente para cubrir la superficie inferior de la botella (Figura 2A). </li><li> comida de microondas a máxima potencia durante 30 - 45 s. Comprobar el progreso y remover cada 15 s hasta que se derrita (Figura 2B). ¡PRECAUCIÓN! Fly alguna olla fácilmente sobre. </li><li> Utilice una punta de pipeta embotado de 1.000 l (Figura 2C) para transferir lentamente ~ 1 ml derritió los alimentos en cada cámara (Figura 2D). </li><li> Permita que los alimentos se vuelvan a solidificar a 4 ° C durante ~ 10 minutos (Figura 2E) antes de ensamblar completamente la arena (Figura 2F). </li><li> Utilice la arena completado para experimentos (véase la Sección 4) o se almacena a 4 ° C. </li><li> Almacenar la comida sobrante a 4 ° C y la reutilización. </li></ol> 3. Preparación Vírgenes Las hembras de la Conducta Ensayos NOTA: 2-D ensayos de saciedad utilizan un gran número de moscas hembras vírgenes (~ 120 - 160 para un campo de comportamiento completo) que son difíciles de recoger usando métodos estándar. En esta sección se describe un enfoque alternativo utilizando el transgén hs-HID en el cromosoma Y 28, que ha sido utilizado con éxito en ensayos de cortejo 25, 29. La acción usada para generar hembras vírgenes de ojos blancos tiene el genotipo w1118 (X) / hs-HID (Y); + / +; + / + (Bloomington código RS 24638). <ol><li> Flip vuela en una nueva botella una vez 20 - 50% de las pupas han eclosed (véase la Figura 3A, por ejemplo) y hay suficientes machos (5 - 10) para propagar los valores. </li><li> Choque térmico de la botella original en un baño de agua caliente 37 ° C durante 1 h para activar suficientemente hs-HID para matar a los machos (Figura 3B). Después del choque térmico, solamente las hembras eclose de estas botellas y así permanecerán hasta que la virgenensayos. NOTA: Asegúrese de que se calientan de manera uniforme todos los lados de la botella (véase la figura 3A para la línea de agua). Prolongar este tiempo para un máximo de 2 horas 1 hora si no es suficiente para practicar la eutanasia a todos los varones. </li><li> Aislar hembras colectadas durante al menos 3 d antes de los experimentos para asegurarse de que son lo suficientemente mayor como para ser sexualmente receptivas 25, 29. NOTA: los machos para el cromosoma Y menos de vez en cuando surgen de esta población. Estos machos tienen ojos en blanco y no se ven afectados por el choque térmico, ya que no contienen el transgén hs-HID. No pueden producir esperma y por lo tanto no puede disminuir la receptividad en las hembras 30, 31. </li></ol> 4. Realización y anotando 2-D saciedad Ensayos NOTA: Es importante controlar la edad del macho vuela como los cambios de unidad de acoplamiento con la edad. Este protocolo utiliza los machos que son 3 - 4 días de edad 25 </sup&gt;. <ol><li> Ajustar la incubadora a la temperatura deseada (por ejemplo, 23 ° C para el estándar, los experimentos de RT) y humedad (&gt; 30%). Para las incubadoras sin control de la humedad, dejando un vaso de agua en la incubadora es suficiente. </li><li> Colocar una arena ensayo de saciedad 2-D en la incubadora durante ~ 30 min para equilibrar la temperatura y para evitar la condensación en las cámaras durante el curso del experimento. Las puertas giratorias deben estar en la posición abierta. </li><li> Utilice un aspirador para aspirar mosca 32 15 - 20 hembras vírgenes en cada cámara de la arena (Figura 4). NOTA: Es importante que las hembras y los machos no se anestesian en el mismo día como el ensayo. En nuestra experiencia, si lo hace puede afectar la receptividad femenina y el comportamiento de apareamiento masculino. </li><li> Aspirar 1 macho en cada cámara. </li><li> Coloque la arena cargada en la incubadora bajo una videocámara de consumo normal (Figura 5) y el cine durante 4,5 h. </li><li> Puntuación vídeos observando cuando cada mosca macho empieza y termina cada apareamiento (es decir, la cópula). Este paso puede llevar mucho tiempo al principio. Con la práctica, se puede marcar los vídeos a velocidad de 5x o superior. NOTA: Como moscas se aparean para ~ 20 min a ~ 23 ° C (más corta duración a temperaturas más altas) 29, uno puede leerlo a través de la primera 15 min de cada acoplamiento. </li><li> Tras registrar todos los tiempos de apareamiento, sumar el número de apareamientos para cada mosca (ver resultados representativos). </li><li> Utilice el código proporcionado para generar una ethogram. Ver material suplementario 2 para el código, instrucciones y datos de ejemplo. </li><li> Utilice CO2 o temperatura fría para anestesiar las moscas antes de retirarlas. </li></ol> 5. El uso de la manipulación thermogenetic para revertir la saciedad en 2-D saciedad Ensayos NOTA: Este protocolo pruebas si la estimulación thermogenetic de una población neuronal definida puede superar la sensación de saciedad. El Fli experimentales expresar el canal catiónico sensible al calor TRPA1 en poblaciones definidas de neuronas (UAS-TRPA1). Los pasos siguientes se aplican a la estimulación de las neuronas dopaminérgicas (TH-Gal4), que se ha demostrado para promover la unidad de acoplamiento 25. Estos pasos se pueden utilizar en conjunción con otros conductores neuronales para descubrir otras poblaciones que promueven la unidad de acoplamiento. <ol><li> Para inducir comportamientos de acoplamiento thermogenetically en las moscas saciadas, aumentar la temperatura de la incubadora (por ejemplo, de 23 ° C a 28,5 ° C) después de completar un experimento 4,5 h plena saciedad 2-D. </li><li> Después de la incubadora alcanza la temperatura deseada, continuar la estimulación de calor y la puntuación de los apareamientos (es decir. Cópulas) de los machos durante 1 h (ver resultados representativos). NOTA: La temperatura y la duración de la estimulación puede variar en función del genotipo por lo que es necesario solucionar las condiciones óptimas que evitan que la sobreestimulación de las neuronas y seguir produciendo una robufenotipo st. </li></ol> 6. El uso de cortejo y la locomoción para Verificar Saciedad NOTA: En esta sección se describen 3 métodos opcionales que se pueden utilizar para verificar los resultados de los ensayos de saciedad en 2-D. Ellos no son necesarios para cada ensayo. <ol><li> Utilizar ensayos de cortejo para verificar la saciedad. <ol><li> Aspirar un macho y una hembra virgen en cada una de las 32 cámaras en una arena de cortejo. </li><li> Filmar las moscas de ~ 20 min utilizando una videocámara de consumo normal. </li><li> Puntuación del índice de cortejo (CI) para cuantificar el cortejo 25; esta es la fracción de tiempo de la realización de comportamiento de cortejo (canto, siguiente, etc.) y el apareamiento (es decir, la copulación) sobre una ventana de 5 min. Esta ventana se inicia desde la primera instancia del comportamiento de cortejo. Si una mosca macho no se inicia el cortejo en el primero 15 min, su CI es 0. Naïve WT moscas deben mostrar un CI mayor de 0.9, mientras que una mosca completamente saciado debe tener un CI bElow 0.2. Otras medidas de cortejo también pueden ser considerados 23, 33. </li></ol></li><li> Anotando el cortejo en ensayos de saciedad 2-D <ol><li> Puntuación de la cantidad de tiempo que una mosca macho gasta cortejo, durante un período de tiempo de un ensayo de saciedad 2-D (por ejemplo, la primera h). El cortejo se define como el macho de realizar cualquier etapa del ritual (cantando, siguiendo, etc.). A diferencia de en la Sección 6.1.3, este paso no incluye el tiempo de apareamiento el macho pasa. </li><li> Dividir el tiempo de cortejo anterior por el tiempo total que el macho no se aparea (es decir, no copular) en el mismo período de tiempo. Por ejemplo, si una mosca macho tribunales para 15 min y compañeros durante 20 minutos sobre la primera h, la proporción es de 15 min / (60 min - 20 min) = 0,375. La relación se muestra como &quot;Fracción de tiempo en el cortejo nonmating&quot; en resultados representativos. </li></ol></li><li> Usando el ensayo de locomoción para evaluar agotamiento <ol><li> Parcialmente montar el 32-Arena de cámara con todas las partes, pero la hoja de contraste. </li><li> Aspirar una mosca macho (no hay moscas hembras) en cada una de las 32 cámaras en una arena de cortejo. </li><li> Filmar las moscas de ~ 10 min utilizando una videocámara de consumo normal. </li><li> Realizar un seguimiento de las moscas con el plugin MTrack2 en ImageJ (http://valelab.ucsf.edu/~nstuurman/ijplugins/MTrack2.html). </li></ol></li></ol> 7. Recuperación de acoplamiento de unidad después de 2-D saciedad Ensayo <ol><li> Realizar un ensayo de saciedad 2-D como se describe en la Sección 4, pero aspirar el macho despega al final del ensayo. </li><li> Aislar las moscas macho a 23 ° C para el número deseado de días. </li><li> Realizar un ensayo de saciedad 2-D con los machos recuperados y anotar sus apareamientos (es decir, cópulas) por tan sólo 1 hora (ver resultados representativos). </li></ol>

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<li>Klapoetke, N. C., Murata, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+optical+excitation+of+distinct+neural+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+methods%22%5BJournal%5D)">Independent optical excitation of distinct neural populations.</a> Nature methods. 11 (3), 338-346 (2014).</li>
<li>Bellen, H. J., Levis, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+BDGP+gene+disruption+project%3A+single+transposon+insertions+associated+with+40%25+of+Drosophila+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The BDGP gene disruption project: single transposon insertions associated with 40% of Drosophila genes.</a> Genetics. 167 (2), 761-781 (2004).</li>
<li>Spradling, A. C., Stern, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Berkeley+Drosophila+Genome+Project+gene+disruption+project%3A+Single+P-element+insertions+mutating+25%25+of+vital+Drosophila+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Berkeley Drosophila Genome Project gene disruption project: Single P-element insertions mutating 25% of vital Drosophila genes.</a> Genetics. 153 (1), 135-177 (1999).</li>
<li>Parks, A. L., Cook, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+generation+of+high-resolution+deletion+coverage+of+the+Drosophila+melanogaster+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+genetics%22%5BJournal%5D)">Systematic generation of high-resolution deletion coverage of the Drosophila melanogaster genome.</a> Nature genetics. 36 (3), 288-292 (2004).</li>
<li>Matthews, K. A., Kaufman, T. C., Gelbart, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resources+for+Drosophila%3A+the+expanding+universe%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Research resources for Drosophila: the expanding universe.</a> Nature reviews. Genetics. 6 (3), 179-193 (2005).</li>
<li>Ni, J. Q., Liu, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li>
<li>Ni, J. Q., Zhou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature. 8 (5), 405-407 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Estados motivacionales pueden ser saciados, mantienen, y se recuperaron 34. Presentamos un ensayo de saciedad 2-D de forma rápida y robusta que mide todos estos aspectos de apareamiento unidad en la marcha. Este ensayo se abre la posibilidad de utilizar manipulaciones genéticas mosca avanzada para estudiar los componentes moleculares y de circuito de un comportamiento motivado. El ensayo de saciedad se basa en la capacidad del varón a la corte con éxito y copular, y p...

El trabajo en Drosophila ha proporcionado la penetración profunda y pionera en muchos fenómenos biológicos, incluyendo la naturaleza del gen 1, los principios del desarrollo embrionario 2, 3 ritmos circadianos, y el desarrollo y el cableado del sistema nervioso 4, 5, 6. La motivación sigue siendo mucho menos conocido que estos fenómenos, tal vez debido a las limitaciones de los sistemas que se han estudiado hasta el momento. La motivación en la mosca se estudia principalmente en el contexto de hambre, que presenta muchos retos debido a su extremadamente pequeña ingesta de alimentos por combate alimentación y exoesqueleto que impide signos manifiestos de la deposición de grasa. En consecuencia, hay una necesidad de ampliar los sistemas utilizados para estudiar la motivación en la marcha. Se describe un marco de comportamiento para el estudio de la unidad de acoplamiento enDrosophila. Este sistema se aprovecha de las herramientas neurogenéticas en la mosca, así como la accesibilidad 7, 8, 9, 10, 11, 12 y la conectoma putativo de su circuito de dimorfismo sexual 8, 13. Además, gran parte de la innata 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 y aprendimos 22, 23, 24 circuitos sensorio-motor que controla el cortejo se ha trabajado de manera detallada, proporcionando una oportunidad únicapara localizar el nodo de circuito exacta sobre la que incide la motivación. Recientemente hemos informado de que, en la marcha, al igual que en los seres humanos, los niveles de dopamina son fundamentales para la unidad de acoplamiento 25, 26, 27. Hemos tenido acceso a la genética a nivel de circuito molecular- y detallada productora de dopamina y la recepción de las neuronas en la marcha, lo que facilita los análisis pertinentes de este fenómeno conservada usando los ensayos que aquí describimos 25. Añadimos a los ensayos de comportamiento en Zhang et al. 25 una nueva arena de comportamiento plana que permite la creación de vídeo, lo que llamamos un ensayo de saciedad de 2 dimensiones (2-D), una mejora importante sobre los métodos anteriores. En consecuencia, el nuevo ensayo es más escalable y cuantificable, y por tanto más adecuado para pantallas genéticas de los genes y las neuronas implicadas en la motivación. Utilizamos este nuevo ensayo, junto con ensayos de cortejo y neurogemanipulaciones néticas, para demostrar cómo medir y alterar la unidad de acoplamiento de la marcha.

<table><tbody><tr><td>Acrílico transparente de 1/16 de pulgada</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K12</td><td>Se utiliza para hacer estadios; consulte el Material Suplementario 1 para los diseños.</td></tr><tr><td>Acrílico transparente de 1/8 de pulgada</td><td>McMaster-Carr</td><td>8589K42</td><td>Se utiliza para hacer estadios; consulte el Material Suplementario 1 para los diseños.</td></tr><tr><td>Acrílico transparente de 3/16 de pulgada</td><td>McMaster-Carr</td><td>8560K219</td><td>Se utiliza para hacer estadios; consulte el Material Suplementario 1 para los diseños.</td></tr><tr><td>Delrin negro de 1/32 pulgadas</td><td>McMaster-Carr</td><td>8575K132</td><td>Se utiliza para hacer arenas; consulte el Material Suplementario 1 para los diseños.</td></tr><tr><td>Tornillos hexagonales, 1 pulgada de largo (50x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92314A115&nbsp;</td><td>Se utiliza para hacer arenas. Se puede reemplazar por tornillos de 3/4 de pulgada (92314A113, McMaster-Carr) para arenas de 32 cámaras.</td></tr><tr><td>Tuercas de mariposa (25x)</td><td>McMaster-Carr</td><td>92741A100</td><td>Se utiliza para hacer arenas. Se puede reemplazar por tuercas hexagonales normales (90480A005, McMaster-Carr).</td></tr><tr><td>Videocámara</td><td>Canon</td><td>Vixia HF R700</td><td>Puede ser reemplazada por cualquier computadora de consumo.</td></tr></tbody></table>

la medición y la modificación de acoplamiento de unidad en male<em&gt; drosophila melanogaster</em

Measuring and Altering Mating Drive in Male Drosophila melanogaster

A pesar de décadas de investigación, las bases neuronales y moleculares de los estados motivacionales siguen siendo un misterio. Recientemente hemos desarrollado una novela, reduccionista, y un sistema escalable para la investigación en profundidad de la motivación de utilizar la unidad de acoplamiento macho de Drosophila melanogaster (Drosophila), los métodos para los que detallamos aquí. El paradigma de comportamiento se centra en el descubrimiento de que la unidad de apareamiento masculino disminuye junto con la fertilidad a lo largo de cópulas repetidas y recupera más de ~ 3 d. En este sistema, las herramientas neurogenéticas potentes disponibles en la mosca convergen con la accesibilidad genética y diagrama de cableado putativo disponible para el comportamiento sexual. Esta convergencia permite un rápido aislamiento e interrogatorio de pequeñas poblaciones neuronales con funciones específicas de motivación. A continuación detallamos el diseño y ejecución del ensayo de saciedad que se utiliza para medir la motivación y alterar el cortejo en la mosca macho. Usando estoensayo, también demostramos que la unidad de apareamiento masculino baja puede ser superada mediante la estimulación de las neuronas dopaminérgicas. El ensayo de saciedad es simple, asequible y robusta a las influencias de los antecedentes genéticos. Esperamos que el ensayo de saciedad para generar muchos nuevos conocimientos sobre la neurobiología de los estados motivacionales.

Para la caracterización de la unidad de apareamiento de Drosophila, 3 días de edad, WT Cantón-S machos se probaron en un ensayo de saciedad 2-D. En el transcurso del ensayo (4,5 h), los machos se aparean un promedio de 4,8 ± 0,3 (media ± error estándar de la media, SEM) veces. Apareamientos inician sobre todo en las primeras 2 h (78%) (Figura 6A, 6B) y se vuelven menos frecuentes a medida que avanza el ensayo (Figura 6A, 6B). Esta disminución no...

En este artículo se describe un ensayo de comportamiento que utiliza la unidad de apareamiento masculino en Drosophila melanogaste R a estudiar la motivación. Usando este método, los investigadores pueden utilizar técnicas de neurogenéticas mosca avanzada para descubrir los mecanismos genéticos, moleculares y celulares que subyacen a esta motivación.

La medición y la modificación de acoplamiento de unidad en Male<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Despite decades of investigation, the neuronal and molecular bases of motivational states remain mysterious. We have recently developed a novel, ...

El objetivo general de este ensayo es medir y manipular la motivación para el apareamiento en Drosophila macho con el fin de examinar la motivación en un sistema reduccionista. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el estudio de la motivación, como qué genes y neuronas controlan la motivación para el apareamiento, lo que podría revelar la lógica subyacente a los circuitos motivacionales. La principal ventaja de este método es que proporciona un ensayo de alto rendimiento para medir la motivación para el apareamiento que puede utilizarse junto con las potentes herramientas genéticas disponibles en la mosca.Al menos tres días antes de un ensayo de saciedad en 2-D, prepare moscas hembra a partir de un frasco de la cepa de moscas blancas 11 18 con choque térmico hid. Una vez que entre el 20 y el 50 % de las pupas hayan emergido y haya al menos cinco machos para propagar la cepa, transfiera las moscas a un frasco nuevo. A continuación, someta el frasco original a un choque térmico en un baño de agua caliente a 37 °C durante una hora para activar suficientemente el gen hid inducible por choque térmico y eliminar las larvas y pupas macho.Después del choque térmico, solo

measuring-and-altering-mating-drive-in-male-drosophila-melanogaster

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Neurociencia

Diferencial espermatozoides capacidad competitiva...

Diferencias Evaluación de Capacidad Competitiva de espermatozoides en<em&gt; Drosophila</em

Este protocolo describe una forma sencilla y rentable de identificar individualmente Drosophila u otros insectos. Los datos de demostración que investigan el éxito del apareamiento en tres especies de Drosophila muestran que este método es comparable o mejor que el uso de anestesia con CO2.

Teñido Insectos de la Conducta ensayos: el comportamiento de apareamiento de anestesiada<em&gt; Drosophila</em

El efecto de los genes y el medio ambiente en el espacio social de Drosophila melanogaster se puede cuantificar a través de un paradigma analítico potente pero sencillo. Mostramos aquí diferentes factores que pueden afectar a este espacio social, y por lo tanto deben ser tenidos en cuenta a la hora de diseñar experimentos en este paradigma.

Condiciones que afectan Espacio Social en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Durante mosca de la fruta peleas, los patrones de comportamiento observados, lucha dinámica, y el aprendizaje y la memoria asociada están influenciadas por las condiciones experimentales. El protocolo que se presenta aquí describe un procedimiento novedoso que elimina por completo la manipulación de las moscas durante los experimentos. Esto mejora la dinámica de lucha y permite la formación de efectos fuertes "perdedor".

Un nuevo enfoque que elimina el manejo para el estudio de la agresión y el efecto &quot;Loser&quot; en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Este protocolo describe un ensayo de alto rendimiento para probar las preferencias de puesta de huevos de Drosophila melanogaster a una resolución de un solo animal.  Este ensayo proporciona una plataforma simple, eficiente y escalable para identificar genes y componentes de circuitos que controlan un proceso de toma de decisiones simple.

Ensayo de Alto Rendimiento para el Examen de Preferencias de la puesta de huevos individual<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Se describe un protocolo para inducir gratificante y nonrewarding experiencias en moscas de la fruta (Drosophila melanogaster), utilizando el consumo voluntario de etanol como una medida de los cambios en los estados de recompensa.

Una manera sencilla de medir alteraciones en el comportamiento de búsqueda de recompensa Uso<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Se demuestra un ensayo para analizar las señales ambientales y genéticas que influyen en el comportamiento de apareamiento en la mosca de la fruta Drosophila melanogaster .

Un método para probar el efecto de las señales ambientales sobre el comportamiento de apareamiento en<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Este protocolo describe un aprendizaje de Drosophila y un ensayo de memoria llamado condicionamiento del cortejo. Este ensayo clásico se basa en una reducción de la conducta de cortejo masculino después del rechazo sexual por una mujer prematura no receptiva. Esta forma natural de plasticidad conductual se puede usar para probar el aprendizaje, la memoria a corto plazo y la memoria a largo plazo.

Drosophila condicionamiento del corte como una medida de aprendizaje y memoria

El objetivo general de estos procedimientos es establecer, mantener y actualizar a una población cautiva de Eristalis tenax en un entorno de investigación.

Cría y el mantenimiento a largo plazo de Eristalis tenax Tamaki para estudios de investigación

Este protocolo está diseñado para evaluar la viabilidad de Drosophila en cada etapa del desarrollo, desde el embrión hasta el adulto. El método se puede utilizar para determinar y comparar la viabilidad de diferentes genotipos o condiciones de crecimiento.

Un método directo y simple para evaluar la viabilidad de Drosophila melanogasterde Embryo a Adult

Aprende a medir y manipular la unidad de apareamiento en machos de Drosophila melanogaster mediante un ensayo de saciedad 2-D de alto rendimiento. Este método integra herramientas genéticas avanzadas para estudiar los mecanismos neuronales y genéticos de la motivación.

La medición y la modificación de acoplamiento de unidad en Male

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