Evaluar el efecto de sustancias químicas ambientales en la miel de abeja Desarrollo de la colonia individual a nivel

El objetivo general de este experimento es evaluar cómo los residuos de plaguicidas en el medio ambiente afectan a las abejas melíferas individuales en la condición natural de las colonias de colmenas. La principal ventaja de este método es que estudia los efectos de los pesticidas u otros contaminantes de interés tanto en las abejas individuales como en las colonias enteras. La demostración visual de este método es fundamental, ya que la manipulación de las pupas es difícil porque son frágiles.

La demostración del procedimiento estará a cargo de Ko Chong-Yu, un estudiante de doctorado de mi laboratorio. Antes del experimento, alimente a cada colonia con un litro de jarabe de azúcar al 50%. Reponga el depósito de alimentos semanalmente, una colonia saludable tendrá nueve cuadros de panales de abejas y una reina poniendo huevos.

Para empezar, ubique a la reina en la colonia y reemplace al menos un marco en su lado de la colonia con un marco vacío. A continuación, inserte los excluidores de reina para aislar la reina en una sección de cuatro fotogramas que contenga al menos un fotograma vacío. Al día siguiente, revise los marcos en busca de huevos recién puestos y separe los huevos de la reina durante 72 horas.

Luego retire estos marcos, cepille a las abejas obreras y prepárese para tratar las larvas en las celdas de cría. Para cada tratamiento, cubra 50 larvas de un día de edad seleccionadas al azar en el marco con portaobjetos transparentes. Asegure las diapositivas con chinchetas, luego haga la información de identificación en las diapositivas con un marcador permanente.

Ahora usando BLD calentado a 35 grados centígrados, haga diferentes concentraciones de tratamiento de PPN que van desde 0.1 a 100 partes por millón en volúmenes de 100 mL. Durante los próximos tres días, trate los grupos de células de cría. Para tratar las larvas, descúbralas y agregue 10 microlitros de la solución PPN BLD a cada celda de cría.

Repita el tratamiento al día siguiente con 10 microlitros de solución de tratamiento y repita el tratamiento al tercer día con 20 microlitros de solución de tratamiento. Después del tercer tratamiento, dejar que se desarrollen en la colonia En el diseño experimental, se replique cada grupo de tratamiento cuatro veces utilizando diferentes colonias. Al séptimo día, inspeccione las larvas tratadas con PPN, registre las tasas de mortalidad y taponamiento en los grupos de tratamiento.

El día 13, registre la tasa de eclosión de cada grupo de tratamiento. Primero, retire la cera de abeja de las celdas de cría tapadas. A continuación, retira las pupas con unas pinzas con punta para agarrarlas muy ligeramente y tira de ellas suavemente.

Al retirar las pupas, use el agarre entre la cabeza y el tórax y saque las pupas muy suavemente. Será necesario practicar muchas veces para obtener una tasa de supervivencia de al menos el 90% antes de realizar el experimento. Transfiera las pupas a 24 placas de cultivo de tejido revestidas con dos capas de tejido de laboratorio.

Asegúrese de anotar cualquier daño en la mortalidad que ocurra durante la transferencia. Mantener las placas de cultivo a 34 grados centígrados con 70% de humedad relativa hasta la emergencia. Durante los próximos ocho días, registre la tasa de eclosiones.

Configura como antes con una colonia saludable de nueve fotogramas en la que la reina está limitada a una sección de cuatro fotogramas que contiene al menos un fotograma vacío. Llame a la sección de cuatro marcos parte A y a la sección de cinco marcos parte B.Be asegúrese de que los excluidores de reinas dividan la colonia por completo para que la reina no pueda moverse entre secciones. Esta división es vital para recolectar grupos de larvas de un día de edad.

Al día siguiente, etiquete un grupo de 100 celdas de cría con huevos recién puestos como antes. Este es el grupo uno, devuélvalo a la parte A durante tres días. Dos días después, transfiera a la reina a la parte B para poner huevos.

Al día siguiente, etiquete 100 huevos recién puestos en la parte B como grupo dos y devuelva la sección a la parte B de la colonia. Después de dos días más, mueva la reina de regreso a la parte A. Ahora repita el proceso para hacer otro grupo y continúe intercambiando la reina entre la parte A y la parte B cada tres días hasta que se hayan asignado nueve grupos de huevos de un día en intervalos de tres días. Durante los primeros cinco días de desarrollo, marque la tasa de eclosión de cada grupo de celdas de cría marcadas.

Después de 11 días de desarrollo, comience a registrar el número de celdas de cría tapadas en cada grupo. En el día 13 del experimento, trate la colonia con jarabe de azúcar al 50% que contenga PPN a 10 o 100 partes por millón. Cargue una caja de alimento con un litro de tratamiento y conéctela a la colonia.

El grupo uno es un control no tratado, ya que esas células ahora deben estar tapadas. A partir del día 17 registre la tasa de eclosión de cada grupo. Para hacer esto, transfiera las larvas como se demostró anteriormente a una placa de 24 pocillos, luego incube la placa y luego registre la tasa de eclossión.

Después de 49 días, se deben conocer los datos de eclosión de los nueve grupos. Las celdas de cría individuales se trataron como se describe con PPN BLD. El efecto negativo del pesticida en las abejas melíferas en etapa larvaria se observó fácilmente y dependió de la dosis.

Estos efectos incluían la melanización y la deformación de las alas. Para simular las colonias de abejas melíferas que sufrían residuos de PPN ambientales, se alimentaron colonias enteras con jarabe de PPN. El grupo uno es un control, ya que estas abejas se desarrollaron hasta convertirse en adultas antes del tratamiento.

Los grupos dos y tres se afectaron inicialmente en la etapa de larva, y los grupos cuatro a nueve se afectaron inicialmente como huevos. Se produjeron cambios en la eclosión, el taponamiento, la eclosión y las deformidades con los tratamientos con PPN. 100 partes por millón de PPN fue más efectivo que 10 partes por millón, excepto en la tasa de eclosión.

Además, después de los tratamientos, muchas pupas murieron con cutículas negras o por no salir. En el tratamiento de 100 ppm de PPN, las células tapadas se destruyeron y las pupas lesionadas se eliminaron de la colonia. Una vez dominado, el procedimiento de tratamiento de la colonia se puede realizar en aproximadamente un mes, y la manipulación diaria de la pupa se puede terminar en aproximadamente dos horas.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe verificar regularmente la condición de su colonia y adquirir mucha práctica en el manejo de pupas antes de realizar un experimento. No olvide que trabajar con abejas melíferas puede ser peligroso debido a las alergias al veneno de abeja. Siempre se deben tomar precauciones, como el uso de ropa protectora, al realizar este procedimiento.