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DOI: 10.3791/55465-v
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Se describe un método para generar la precisión de corte de pulmón rebanadas (PCLS) y la inmunotinción ellos para visualizar la localización de diversos tipos de células inmunes en el pulmón. Nuestro protocolo se puede extender a visualizar la ubicación y la función de muchos tipos celulares diferentes bajo una variedad de condiciones.
El objetivo general de este método es utilizar cortes de pulmón cortados con precisión, o PCLS, para visualizar la localización y el tráfico de varios tipos de células inmunitarias en el pulmón. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la inmunología, como la localización y los patrones de migración de las células inmunitarias en el pulmón. La principal ventaja de esta técnica es que se pueden visualizar varias interacciones en el tejido vivo ex vivo que mantiene la arquitectura tridimensional del pulmón.
Aunque este método puede proporcionar información sobre la localización y el tráfico de células inmunitarias durante la inflamación, también se puede utilizar para visualizar la contracción de las vías respiratorias y el tejido muscular liso. Para recolectar el tejido pulmonar, primero use tijeras para abrir la piel y el peritoneo desde la mitad del abdomen hasta la mandíbula de un ratón de seis a 12 semanas de edad, y mueva los intestinos hacia el lado de la cavidad abdominal. Corta la vena cava inferior para drenar la sangre de los pulmones y usa la punta afilada de las tijeras para perforar el diafragma y permitir la expansión de la caja torácica.
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