Grabación de EEG en Ratas Neonatales que se mueven libremente usando un método nuevo

El objetivo general de este método es registrar los EEG de las crías de ratas neonatales que se mueven libremente, utilizando una nueva configuración de electrodos que es estable durante una semana o más. Este método habrá respondido a preguntas clave en el campo de la neurociencia y será beneficioso en el estudio de la epilepsia neonatal. Mediante el uso de esta técnica, se pueden registrar señales de EEG estables y de alta calidad durante períodos de tiempo más largos.

Lo que ayudará en el diagnóstico de diversos trastornos neuropatológicos. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades porque las ratas neonatas de p8 a p15 son muy difíciles de manejar y requieren muchos cuidados. El electrodo requiere un contacto con clavijas para funcionar como interfaz de señal con los dispositivos de comunicación.

Un pin lo sai de computadora cumple este papel. Separe con cuidado los pines macho y hembra de un pin lo sai de computadora con unos alicates. A continuación, conecte los pines macho y hembra para formar un electrodo y asegure la conexión con cianocrilato.

Fabrica varios electrodos de este tipo. Una vez que las uniones se hayan endurecido, coloque los electrodos en un vaso de precipitados lleno de agua destilada durante diez minutos. Luego, colóquelos en un limpiador ultrasónico para limpiar los electrodos.

Luego, transfiera el vaso de precipitados a un horno a 45 grados centígrados y caliéntelos durante media hora. Por último, esterilice los electrodos con una exposición UV de 30 minutos. En una capucha de bioseguridad, primero coloque las herramientas quirúrgicas esterilizadas y un aparato estereotáxico esterilizado para la cirugía.

Luego, anestesiar a la cría de rata neonatal con dos coma cinco por ciento de isoflurano. Cuando el cachorro esté profundamente anestesiado, reduzca el isoflurano al uno por ciento. Antes de continuar, use un pellizco en el dedo del pie para asegurarse de que el ratón esté lo suficientemente anestesiado.

A continuación, fije la cabeza del cachorro en el aparato estereotáxico. Coloque las barras para los oídos en los canales auditivos y apriete suavemente las barras. Tenga cuidado: el cráneo neonatal es muy blando.

Ahora, haz una incisión de quince milímetros en la línea media del cráneo. Luego, con fórceps, separe suavemente el cuero cabelludo para ensanchar la incisión. Para mantener la incisión abierta, use un pedazo de algodón empapado en solución salina.

Ahora, localiza el bregma y la lambda, y márcalos con un lápiz. Los siguientes pasos de implantación de electrodos son críticos y deben ejecutarse con precisión. Primero, usando una aguja de calibre 26, haga un agujero en la corteza prefrontal, dos milímetros por delante del bregma y dentro del punto cero a cinco milímetros de la línea media.

A continuación, haz un agujero en el hipocampo en un punto ocho milímetros posterior al bregma y en el punto cero cinco milímetros lateral de la línea media. La aguja no debe penetrar más de dos milímetros por debajo de la superficie cortical para minimizar el daño cerebral. Ahora, con pinzas, inserte el electrodo de referencia en el orificio de la corteza e inserte los electrodos de registro en el orificio del hipocampo.

Luego, aplique ungüento de eritromicina alrededor de los electrodos y fije los electrodos en su lugar con cianocrilato. Mientras el pegamento se adhiere, prepare el cemento dental con una consistencia pegajosa y viscosa. La viscosidad del cemento dental es crítica.

Si el cemento dental es demasiado delgado, puede resultar en la acumulación de una capa aislante no deseada debajo del electrodo. Si el cemento es demasiado denso, los electrodos se desprenderán más fácilmente debido al exceso de masa. Antes de aplicar el cemento, seque bien el cráneo y los electrodos.

Luego, asegure los electrodos al cráneo con cemento dental. A continuación, aplique un poco de ácido pícrico sobre los electrodos para añadirles otra capa de protección. Ahora, retire al animal del marco estereotáxico e inyecte 300 microlitros de solución de glucosa al diez por ciento por vía subcutánea.

Luego, transfiere al animal a una manta térmica para mantenerlo a 37 grados centígrados hasta que esté ambulatorio. Una vez ambulatorio, administre buprenorfina para mediar el dolor postquirúrgico y transfiera al cachorro a su jaula de origen con su madre. Antes de usar el implante, espere al menos dos días para que el cachorro se recupere.

Después del período de recuperación, aloje al cachorro solo para hacer grabaciones durante unos diez minutos para que el cachorro se familiarice con el entorno. Conecte los electrodos a un amplificador y conecte el amplificador a un convertidor AD conectado a una computadora. Tenga cuidado de no enredar estas conexiones.

A continuación, en la unidad de adquisición de datos, seleccione una frecuencia de muestreo de al menos 10.000 hercios para la grabación y compruebe la correcta transmisión de datos. Recopile una grabación de referencia. Después de tomar un registro basal, inyecte al cachorro por vía intraperitoneal ácido kaínico para inducir convulsiones epilépticas.

Quince minutos después de la inyección, observe y registre las secreciones epilépticas. Guarde los datos digitalizados y analícelos con un software de procesamiento de señales. Revelar el nivel de potencia de los diferentes componentes de frecuencia en los EEG neonatales utilizando el análisis del espectro de potencia.

Calcule la potencia a partir de marcos de tiempo de un minuto encontrando la amplitud cuadrática media de uno a cien hercios, que es la banda de EEG. Diez minutos después de la inyección de ácido káínico, se registraron los patrones de secreción interictal e ictal recurrente del EEG. Las convulsiones más comunes registradas fueron las de tipo tónico clónico.

La duración del tónico ictal duró unos quince segundos. También se observó que las descargas tónicas eran seguidas por ráfagas clónicas. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo implantar electrodos y obtener registros de EEG de alta calidad de crías de ratas neonatales p8 a p15.

Una vez realizada, la implantación cervical se puede realizar en menos de diez minutos, dependiendo de la complejidad de la cirugía.