La exposición del cerdo del SNC para el análisis histológico: Un Manual para decapitación, Apertura cráneo, cerebro y Remoción

En este video, presentamos cómo exponer y extraer el cerebro de cerdo intacto y la hipófisis intacta abriendo el cráneo y la duramadre. Declaración de ética: La anestesia y la eutanasia de los animales se realizaron de acuerdo con los Principios del cuidado de los animales de laboratorio y fueron aprobados por el Consejo Danés de Ética en la Investigación Animal. La anestesia fue inducida en minicerdos machos de Gotinga mediante una inyección intramuscular de midazolam y ketamina.

Cinco a diez minutos después, cuando los animales estaban profundamente sedados, se canuló una vena del oído y se administró una sobredosis letal de pentobarbital de sodio por vía intravenosa. Para asegurar que los animales fueran completamente sacrificados, se probó el reflejo de dolor interdigital como se mostró anteriormente. Después de la eutanasia adecuada, los animales fueron perfundidos transcárdicamente con cinco litros de solución salina isotónica.

En consecuencia, todos los procedimientos demostrados se realizan post mortem, excluyendo la necesidad de precauciones de bienestar necesarias para la anestesia a largo plazo y la supervivencia posterior al procedimiento. Instrumentos utilizados. Mango de bisturí grueso número cuatro, y hojas de bisturí no estériles, número 23.

Bueno para incisiones en la piel y eliminación de tejidos blandos. Mango de bisturí número siete, y hojas de bisturí no estériles, número 11. Óptimo para incisión dural y trabajos de precisión.

Pinza quirúrgica, con una mordida que asegura un agarre firme. Punzón de hueso KAIRison. Debe ser robusto, con un tamaño de mordida de tres a cinco milímetros.

Rongeur de hueso. Debe ser robusto y tener un tamaño de mordida de alrededor de cinco a 15 milímetros, para trabajos delicados con huesos. Rongeur óseo más grande.

Con un tamaño de mordida de alrededor de 25 veces 15 milímetros, para la eliminación de piezas óseas más gruesas. Cincel de hueso. La cabeza no debe tener más de 20 milímetros.

Un mazo, adecuado para el cincel de hueso. Micro tijeras, con punta afilada. Decapitación: El cerdo es decapitado haciendo una incisión cervical circular alta, justo debajo del ángulo mandibular.

Continúe la incisión, a través del tejido blando del cuello. Corta a través de la laringe y el esófago, hasta llegar al hueso y la columna vertebral. Aproximadamente a nivel de la unión cráneo-cervical.

Avance de la incisión desde la cara anterior de la unión cráneo-cervical, a través de la membrana atlantooccipital anterior. Con lo cual la médula espinal queda expuesta. Al mismo tiempo, un asistente separará el cuerpo del cerdo de la cabeza del cerdo, ya que esto facilitará el acceso entre la base del cráneo y la primera vértebra cervical.

Asegúrese de que la médula espinal esté completamente cortada, antes de que una extensión forzada en la unión cráneo-cervical finalice la decapitación. Abertura del cráneo. Coloque una incisión longitudinal dorsal a través de la piel y el tejido blando subyacente.

Desde la parte posterior del hocico sobre el vértice de la cabeza y hacia abajo a través de la parte posterior de la región occipital. Exponga la parte dorsal y posterior del cráneo mediante la extirpación del tejido blando ubicado lateral a la incisión inicial. Libera el músculo temporal del cráneo.

Limpie el hueso occipital posterior de los tejidos blandos. Utilice el interés posterior del foramen magnum para extirpar el hueso occipital con el fin de exponer el cerebelo cubierto por duramadre. Regrese a la cara anterior del cráneo y seleccione un punto de entrada en el hueso frontal, justo delante de los ojos.

En este punto, use un cincel de hueso para penetrar en el cráneo e ingrese al seno frontal. Utilice la extensión del seno frontal para la extirpación adicional de la otra lámina del cráneo. Una lámina interna delgada del cráneo que cubre el cerebro está expuesta.

Abra esta lámina suavemente, para exponer la duramadre que cubre la parte anterior del cerebro. Continuar la extracción ósea lateralmente, a través del hueso temporal y parietal. Con el fin de liberar la parte final del cráneo, situada entre las partes ya expuestas del cerebro y el cerebelo.

Usa el cincel para abrir el hueso posterior del cráneo restante, desde un lado, tal como se abre una puerta. Extirpación del cerebro. Levante la duramadre, para una incisión suave cerca del seno sagital.

Use una abertura dural para extraer el saco dural que cubre el cerebro. Se debe tener especial cuidado al extirpar la duramadre situada entre el cerebro y el cerebelo. Ya que la conservación de esta hoja dural evitará la posterior extracción del cerebro.

Finalmente, se secciona la duramadre que cubre el cerebelo y la parte inferior del tronco encefálico. Coloque la cabeza de cerdo verticalmente y libere el cerebro mediante una disección roma de los bulbos olfativos de la base del cráneo cubierta por duramadres. Seccionar el quiasma óptico expuesto.

A continuación, la exposición posterior y la sección del tallo pituitario y los nervios oculomotores. Libera el tronco encefálico seccionando los nervios craneales inferiores. Usa un cincel para liberar el cerebro de la base del cráneo.

Extirpación de la hipófisis. En la base del cráneo, identifique el tallo pituitario, con la hoja dural circundante. Corta la hoja dural lateralmente al tallo pituitario.

Use un disector para liberar la hipófisis y levantarla fuera de la fosa hipofisaria. Resultados y conclusión. La técnica descrita permite la extracción segura del cerebro y la hipófisis del cerdo post mortem, en aproximadamente 15 a 20 minutos.

El tejido obtenido puede someterse a un análisis microscópico seguido de un corte orientado, en losas cerebrales más pequeñas. Las losas son adecuadas para el análisis químico o el procesamiento histológico posterior.