Name: Análisis de inmunofluorescencia de la formación de gránulos de estrés tras el desafío bacteriano de las células de mamíferos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 37 s
Description: Aprende a analizar la formación de gránulos de estrés en células de mamífero mediante inmunofluorescencia tras desafío bacteriano con S. flexneri. Este protocolo automatizado permite evaluar cuantitativamente las respuestas celulares.

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PS es un ganador de la Bill y Melinda Gates Grand Challenge Grant OPP1141322. PV recibió el apoyo de una beca de Postdoc Mobility de la Fundación Nacional de Ciencia de Suiza y una beca postdoctoral Roux-Cantarini. PJS es compatible con una subvención HHMI y ERC-2013-ADG 339579-Decrypt.

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

El protocolo descrito aquí describe la inducción, localización y análisis de SGs en células no infectadas y células infectadas con el patógeno citosólico S. flexneri en presencia o ausencia de estrés exógeno. Usando software de imagen libre, los protocolos permiten el análisis cualitativo y cuantitativo preciso de la formación de SG para identificar y tratar estadísticamente las diferencias en fenotipos dados. Hay varios pasos críticos dentro del protocolo para la infección, SG-indu...

La visualización de las interacciones huésped-patógeno a nivel celular es un método poderoso para obtener información sobre las estrategias patógenas y para identificar las vías celulares clave. De hecho, los patógenos pueden utilizarse como herramientas para identificar objetivos o estructuras celulares importantes, ya que los patógenos han evolucionado para subvertir los procesos celulares centrales como una estrategia para su propia supervivencia o propagación. La visualización de componentes celulares puede conseguirse mediante la expresión recombinante de proteínas huésped marcadas fluorescentemente. Aunque esto permite el análisis en tiempo real, la generación de líneas celulares con proteínas huésped marcadas específicamente es muy laboriosa y puede dar lugar a efectos secundarios indeseables. Más conveniente es la detección de factores celulares utilizando anticuerpos específicos, porque múltiples factores del huésped pueden ser analizados simultáneamente y uno no se limita a un tipo de célula particular. Un inconveniente es que sólo se puede captar una vista estática, ya que el análisis de inmunofluorescencia requiere un fijador de células huéspedion. Sin embargo, una ventaja importante de la inmunofluorescencia es que se presta fácilmente al análisis cualitativo y cuantitativo. Esto, a su vez, puede utilizarse para obtener diferencias estadísticamente significativas para proporcionar nuevos conocimientos sobre las interacciones huésped-patógeno. Los programas de análisis de imágenes fluorescentes son poderosas herramientas analíticas para realizar análisis 3D y 4D. Sin embargo, el alto costo del software y su mantenimiento hacen que los métodos basados ​​en software libre libre sean más atractivos. El análisis cuidadoso de la imagen usando el software del bio-análisis es valioso como substancia el análisis visual y, al asignar significados estadísticos, aumenta confianza en la exactitud de un fenotipo dado. Anteriormente, las SG se analizaron utilizando el software gratuito ImageJ, que requiere la identificación manual de cada SG 4 . Aquí se proporciona un protocolo para la inducción y el análisis de la formación de SG celular en el contexto de bacUtilizando el software gratuito de análisis de bioimágenes de código abierto ICY (http://icy.bioimageanalysis.org). El software de análisis de imágenes biológicas tiene un programa de detección de manchas integrado que es muy adecuado para el análisis de SG. Permite el ajuste fino del proceso de detección automatizado en regiones de interés especificadas (ROIs). Esto supera la necesidad de un análisis manual de SG individuales y elimina el sesgo de muestreo. Muchas tensiones ambientales inducen la formación de SGs, que son estructuras citosólicas, no membranosas, de densidad de fase de 0,2 - 5 μm de diámetro 5,6 . Esta respuesta celular se conserva evolutivamente en levaduras, plantas y mamíferos y ocurre cuando se inhibe la traducción global de proteínas. Implica la agregación de complejos de iniciación de traducción estancados en SGs, que se consideran lugares de retención para mRNAs translacionalmente inactivos, permitiendo la traducción selectiva de un subconjunto de mRNAs celulares.Tras la eliminación del estrés, los SG se disuelven y se reanudan las tasas globales de síntesis de proteínas. Las SG se componen de factores de iniciación de la elongación de la traducción, proteínas implicadas en el metabolismo del ARN, proteínas de unión a ARN, así como proteínas de andamio y factores implicados en la señalización de células hospedadoras 2 , aunque la composición exacta puede variar dependiendo de la tensión aplicada. Los factores ambientales que inducen la formación de SG incluyen la inanición de aminoácidos, la irradiación UV, el choque térmico, el choque osmótico, el estrés del retículo endoplásmico, la hipoxia y la infección viral 2 , 7 , 8 . Se ha avanzado mucho en la comprensión de cómo los virus inducir y también subvertir la formación de SG, mientras que todavía poco se sabe acerca de cómo otros patógenos, como patógenos bacterianos, hongos o protozoarios, afectan a esta respuesta al estrés celular 1 , 7 . ShigeLla flexneri es un patógeno citosólico facultativo gramnegativo de los seres humanos y el agente causante de la diarrea o shigelosis severa. La shigelosis es una importante carga de salud pública y causa 28.000 muertes anuales en niños menores de 5 años 9 , 10 . S. flexneri infecta el epitelio del colon y se extiende célula a célula mediante el secuestro de los componentes del citoesqueleto del huésped [ 11 , 12] . La infección del epitelio apoya la replicación de S. flexneri dentro del citosol, pero los macrófagos infectados mueren a través de un proceso inflamatorio de muerte celular llamado piroptosis. La infección conduce a un reclutamiento masivo de neutrófilos e inflamación severa que es acompañada por calor, estrés oxidativo y destrucción de tejidos. De este modo, mientras que las células infectadas están sujetas a tensiones internas inducidas por la infección, tales como la interrupción de Golgi, estrés genotóxico y reordenamiento citoesqueléticoS, las células infectadas también están sometidas a tensiones ambientales debidas al proceso inflamatorio. Caracterización del efecto de la infección por S. flexneri sobre la capacidad de las células para responder a las tensiones ambientales utilizando un número de marcadores SG ha demostrado que la infección conduce a diferencias cualitativas y cuantitativas en la composición SG 3 . Sin embargo, se sabe poco sobre otros patógenos bacterianos. Aquí se describe una metodología para la infección de las células huésped con el patógeno citosólico S. flexneri , el estresamiento de las células con diferentes tensiones ambientales, el etiquetado de los componentes SG y el análisis cualitativo y cuantitativo de la formación y composición SG en el contexto de la infección Y células no infectadas. Este método es ampliamente aplicable a otros patógenos bacterianos. Además, el análisis de imagen de la formación de SG puede usarse para infecciones por virus u otros patógenos. Se puede utilizar para analizar SGFormación tras la infección o el efecto de la infección en la formación de SG en respuesta a tensiones exógenas.

<table><tbody><tr><td><Anticuerpos primarios fuertes></></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>eIF3b fuerte (N20), origen cabra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-16377</td><td>Marcador SG robusto y ampliamente utilizado. La tinción citosólica permite la delineación celular. Dilución 1:300</td></tr><tr><td>eIF3b (A20), origen cabra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-16378</td><td>Mismo objetivo que eIF3b (N20) y en nuestras manos era idéntico al eIF3b (N20). Dilución 1:300</td></tr><tr><td>eIF3A (D51F4), origen conejo (MC: monoclonal)</td><td>Señalización Celular</td><td>3411</td><td>Parte del complejo multiproteico eIF3 con eIF3b. Dilución 1:800</td></tr><tr><td>eIF4AI, origen cabra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-14211</td><td>Recomendado por (Ref # 13). Dilución 1:200</td></tr><tr><td>eIF4B, origen conejo</td><td>Abcam</td><td>ab186856</td><td>Buen marcador de gránulos de estrés en nuestras manos. Dilución 1:300</td></tr><tr><td>eIF4B, origen conejo</td><td>Cell Signaling</td><td>3592</td><td>Recomendado por Ref # 13. Dilución 1:100</td></tr><tr><td>eIF4G, origen</td><td>conejo Santa Cruz</td><td>sc-11373</td><td>Marcador SG ampliamente utilizado. (Ref # 13): puede que no funcione bien en líneas celulares de ratón. Dilución 1:300</td></tr><tr><td>G3BP1, origen conejo (MC: monoclonal)</td><td>BD Biosciences</td><td>611126</td><td>Marcador de SG ampliamente utilizado. Dilución 1:300</td></tr><tr><td>Tia-1, origen cabra&nbsp;</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-1751</td><td>Marcador SG ampliamente utilizado. También se puede encontrar en cuerpos P cuando SG están presentes (Ref # 13). Dilución 1:300</td></tr><tr><td><fuerte>Anticuerpos secundarios conjugados con Alexa</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>A488 anti-cabra, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-11055</td><td>Cross absorbed. Dilución 1:500</td></tr><tr><td>A568 anti-cabra, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-11057</td><td>De absorción cruzada. Dilución 1:500</td></tr><tr><td>A488 anti-ratón, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-21202</td><td>Dilución 1:500</td></tr><tr><td>A568 anti-ratón, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A10037</td><td>Dilución 1:500</td></tr><tr><td>A647 anti-ratón, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A31571</td><td>Dilución 1:500</td></tr><tr><td>A488 anti-conejo, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A-21206</td><td>Dilución 1:500</td></tr><tr><td>A568 anti-conejo, origen burro</td><td>Thermo Fisher</td><td>A10042</td><td>Dilución 1:500</td></tr><tr><td><fuerte>Otros reactivos</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shigella flexneri</td><td></td><td></td><td>Disponible en varios laboratorios bajo pedido</td></tr><tr><td>Caldo de triptona caseína de soja (TCS)</td><td>BD Biosciences</td><td>211825</td><td>Medio de crecimiento estándar para Shigella, aplicación - crecimiento bacteriano</td></tr><tr><td>Agar TCS</td><td>BD Biosciences</td><td>236950</td><td>Agar de crecimiento estándar para Shigella, aplicación - crecimiento bacteriano</td></tr><tr><td>Congo rojo SERVA</td><td>Electrophoresis GmbH</td><td>27215.01</td><td>Herramienta de descortezación para Shigell que han perdido el plásmido de virulencia, aplicación - crecimiento bacteriano</td></tr><tr><td>Poly-L-Lisina (PLL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1274</td><td>Útil para recubrir bacterias para aumentar la infección, aplicación - infección</td></tr><tr><td>Gentamicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1397</td><td>Muerte selectiva de bacterias extracelulares pero no citosólicas, aplicación - infección</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>15630-056</td><td>Tampón de PH útil cuando las células se incuban en RT, aplicación - cultivo celular</td></tr><tr><td>Medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM)</td><td>Life Technologies</td><td>31885</td><td>Medio de cultivo estándar para células HeLa, aplicación - cultivo celular</td></tr><tr><td>Suero fetal de ternero (FCS)</td><td>Biowest</td><td>S1810-100</td><td>Suplementación al 5% utilizada para el medio de cultivo celular HeLa, aplicación - cultivo celular</td></tr><tr><td>Aminoácidos no esenciales (NEAA)</td><td>Life Technologies</td><td>11140</td><td>dilución 1:100 utilizada para el medio de cultivo celular HeLa, aplicación - cultivo celular</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650</td><td>Diluyente de reactivo, aplicación - cultivo celular</td></tr><tr><td>Arsenito</td> <td>de sodioSigma-Aldrich</td><td>S7400</td><td>Potente inductor de gránulos de estrés (Nota: altamente tóxico, se requiere un manejo y eliminación especiales), aplicación - inductor de estrés</td></tr><tr><td>Clotrimazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6019</td><td>Potente inductor de gránulos de estrés (Nota: peligro para la salud, se requiere manejo y eliminación especiales), aplicación - inductor</td></tr><tr><td>de estrés Paraformaldehído (PFA</td><td>Electron Microscopy Scences</td><td>15714</td><td>El PFA al 4% se utiliza para la fijación estándar de células, aplicación - fijación</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Se utiliza al 0,03% para la permeabilización de las células huésped antes de la tinción inmunofluorescente, aplicación - permeabilización</td></tr><tr><td>A647-faloidina</td><td>Thermo Fisher</td><td>A22287</td><td>La dilución es a 1:40, se añade mejor durante la tinción secundaria de anticuerpos, aplicación - tinción</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>Tinción de ácido nucleido utilizada para visualizar tanto el núcleo del huésped como las bacterias, aplicación - tinción</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>BR701501</td><td>Película de parafina útil para la tinción inmunofluorescente de cubreobjetos, aplicación - tinción</td></tr><tr><td>Prolong Gold</td><td>Thermo Fisher</td><td>36930</td><td>Medio de montaje robusto que funciona bien para la mayoría de los fluoróforos, aplicación - montaje</td></tr><tr><td>Mowiol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>81381</td><td>Medio de montaje barato y robusto que funciona bien para la mayoría de los fluoróforos, aplicación - montaje</td></tr><tr><td>placa de cultivo celular de 24 pocillos</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3527</td><td>Placas de cultivo de tejidos estándar, aplicación - cultivo celular</td></tr><tr><td>12 mm&nbsp; cubreobjetos de vidrio</td><td>NeuVitro</td><td>1001/12</td><td>Soporte de cultivo celular para aplicaciones de inmunofluorescencia, aplicación -</td></tr><tr><td>pinza</td> de soporte celular <td>Sigma-Aldrich</td><td>81381</td><td>Medio de montaje barato y robusto que funciona bien para la mayoría de los fluoróforos, aplicación - montaje</td></tr><tr><td><programas y equipos fuertes<>/fuerte></td>Prisma Software GraphPad Programa de análisis de datos y gráficos con sólidas opciones de <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>pruebas estadísticas, aplicación - análisis de datos</td>Leica SP5 Leica Microsystems Microsonda confocal, aplicación - imagen <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> adquisición</td></tr><tr><td>Imaris</td><td>Bitplane</td><td></td><td>Professional programa de análisis de imágenes, aplicación - análisis de datos</td></tr><tr><td>Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>Programa de análisis y gráficos de datos, aplicación - análisis de datos</td></tr></tbody></table>

análisis de inmunofluorescencia de la formación de gránulos de estrés tras el desafío bacteriano de las células de mamíferos

Immunofluorescence Analysis of Stress Granule Formation After Bacterial Challenge of Mammalian Cells

La imagen fluorescente de los componentes celulares es una herramienta eficaz para investigar las interacciones huésped-patógeno. Los patógenos pueden afectar muchas características diferentes de las células infectadas, incluyendo ultraestructura de organelos, organización de la red del citoesqueleto, así como procesos celulares como la formación de gránulos de estrés (SG). La caracterización de cómo los patógenos subvertir procesos de acogida es una parte importante e integral del campo de la patogénesis. Mientras que los fenotipos variables pueden ser fácilmente visibles, el análisis preciso de las diferencias cualitativas y cuantitativas en las estructuras celulares inducidas por el desafío del patógeno es esencial para definir diferencias estadísticamente significativas entre muestras experimentales y de control. La formación de SG es una respuesta de estrés evolutivamente conservada que conduce a respuestas antivirales y se ha investigado durante mucho tiempo utilizando infecciones virales 1 . La formación de SG también afecta a las cascadas de señalización y puede tener otras consecuencias aún desconocidas2 . La caracterización de esta respuesta de estrés a patógenos distintos de los virus, como los patógenos bacterianos, es actualmente un área de investigación emergente 3 . Por ahora, el análisis cuantitativo y cualitativo de la formación de SG aún no se utiliza rutinariamente, incluso en los sistemas virales. Aquí describimos un método sencillo para inducir y caracterizar la formación de SG en células no infectadas y en células infectadas con un patógeno bacteriano citosólico, lo que afecta a la formación de SGs en respuesta a diversas tensiones exógenas. El análisis de la formación y composición de SG se logra utilizando un número de diferentes marcadores SG y el detector de puntos del plug-in ICY, una herramienta de análisis de imágenes de código abierto.

Para explicar y demostrar el protocolo descrito en este manuscrito, se caracterizó la imagen de clotrimazole inducida SGs en células HeLa infectadas o no con el patógeno citosólico S. flexneri . Un esquema del procedimiento se presenta en la Figura 1 , e incluye virulenta y avirulenta S. flexneri rayado en placas de Congo Rojo, preparación de bacterias, infección, adición de estrés ambiental, fijación de muestras y tinción, imagen de muestr...

Describimos un método para el análisis cualitativo y cuantitativo de la formación de gránulos de estrés en células de mamíferos después de que las células son desafiadas con bacterias y una serie de diferentes tensiones. Este protocolo puede aplicarse para investigar la respuesta de los gránulos de estrés celular en una amplia gama de interacciones huésped-bacteriana.

Análisis de inmunofluorescencia de la formación de gránulos de estrés tras el desafío bacteriano de las células de mamíferos

Fluorescent imaging of cellular components is an effective tool to investigate host-pathogen interactions. Pathogens can affect many different features of ...

El objetivo general de este experimento es evaluar los efectos de una infección bacteriana sobre la capacidad de las células hospederas para formar gránulos de estrés en respuesta a un estrés exógeno. Este método es una herramienta valiosa en el campo de la microbiología celular para determinar si un patógeno determinado es capaz de alterar o subvertir toda la vía de formación de gránulos de estrés. La principal ventaja de esta técnica es que los gránulos de estrés pueden analizarse de manera cualitativa y cuantitativa de forma rigurosa y automatizada utilizando programas gratuitos de análisis de imágenes.Este método proporciona información sobre la dinámica de la formación y composición de los gránulos de estrés y sobre cómo estos parámetros se ven afectados por un patógeno específico. Gracias. Antes de comenzar el ensayo, inocule una colonia roja de bacterias S.flexneri M90T procedente de una placa de agar tripticasa soya al 1% con rojo de congo recién rayada en un tubo cónico de 15 mililitros que contenga ocho mililitros de caldo tripticasa soya.Después de ajustar la tapa, incubar la colonia durante la noche con agitación a 222 RPM y 30 grados Celsius. Al día siguiente, subculti

immunofluorescence-analysis-stress-granule-formation-after-bacterial

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Fuente: Cayron, J., et al. Análisis multiescala de tratamientos de crecimiento bacteriano bajo estrés. J. Vis. Exp. (2019).Este video demuestra cómo preparar y usar una placa microfluídica para obtener imágenes de células bacterianas en condiciones de estrés. Describe el proceso de introducción de un cultivo bacteriano y un medio antibiótico que induce estrés, seguido de la carga celular y la configuración microscópica. A continuación, se utilizan imágenes de lapso de tiempo en modo de...

Análisis microscópico del crecimiento bacteriano bajo estrés utilizando cámaras microfluídicas

Fuente: Vonaesch, P. et. al., Análisis de inmunofluorescencia de la formación de gránulos de estrés tras un desafío bacteriano en células de mamíferos. J. Vis. Exp. (2017)Este vídeo demuestra la infección de las células epiteliales con la bacteria patógena Shigella flexneri y la respuesta celular del huésped resultante. Las proteínas efectoras bacterianas interrumpen la traducción del huésped, desencadenando la formación de orgánulos sin membrana llamados gránulos de estrés, que reflejan la...

Formación de gránulos de estrés durante la infección por Shigella de células epiteliales cancerosas

Este video muestra un ensayo para caracterizar y cuantificar gránulos de estrés en mamíferos, que consisten en ARNm, proteínas de unión a ARN (RBP) y varias otras proteínas.

Un ensayo de inmunofluorescencia para caracterizar y cuantificar gránulos de estrés en mamíferos

Dos métodos complementarios basados ​​en citometría de flujo y microscopía se presentan que permiten la cuantificación, a nivel de una sola célula, de la dinámica de la expresión génica inducidos por la activación de una vía MAPK en la levadura.

La cuantificación temporal de la expresión de MAPK inducida en células individuales de levadura

Hemos desarrollado una plataforma microfluídica para la prueba rápida de la susceptibilidad a los antibióticos. El líquido se pasa a altas velocidades sobre las bacterias inmovilizadas en el fondo de un canal microfluídico. En presencia de estrés y antibióticos, las cepas susceptibles de bacterias mueren rápidamente. Sin embargo, las bacterias resistentes pueden sobrevivir a estas condiciones estresantes.

Pruebas de susceptibilidad a antibióticos inducidas por el estrés en un chip

Gránulos de estrés (SGS) son gránulos de ARN citoplásmicos que contienen partículas estancadas ribonucleoprotein (RNPs), y importante en la respuesta celular a varios tipos de estrés. Dinámica de SGS puede seguirse en células vivas mediante la visualización de la localización de un componente de etiquetado de SGS en células primarias transfectadas después de estrés.

Visualización de G3BP estrés gránulos Dinámica en Pilas en directo

Los Gránulos de Estrés (SG) son estructuras citoplasmáticas no membranosas que se forman en células expuestas a una variedad de tensiones. SGs contienen mRNAs, proteínas de unión a ARN, pequeñas subunidades ribosómicas, factores relacionados con la traducción, y diversas proteínas de señalización celular. Este protocolo describe un flujo de trabajo que utiliza varios enfoques experimentales para detectar, caracterizar y cuantificar SGs de buena fe .

Métodos para clasificar los focos citoplasmáticos como gránulos de estrés de mamíferos

Presentamos un protocolo para el uso de microscopia de STED simultáneamente las estructuras de actina imagen, microtúbulos y proteínas microtubule plus final en las células de B que se han diseminado en cubreobjetos recubierto con anticuerpos contra el receptor de células B, un modelo para la fase inicial de formación de la sinapsis inmune.

Visualización de la actina y los microtúbulos citoesqueletos en la sinapsis inmune de células B mediante microscopía de emisión (STED) el agotamiento

Hemos desarrollado un ensayo de base poliacrilamida formato multi-bien para sondear el efecto de la rigidez de la matriz extracelular en la infección bacteriana de las células adherentes. Este análisis es compatible con citometría de flujo, inmunotinción y microscopía de fuerza de tracción, lo que permite mediciones cuantitativas de las interacciones biomecánicas entre las células y su matriz extracelular, las bacterias patógenas.

Un ensayo de base poliacrilamida formato multi-bien para estudiar el efecto de la rigidez de la matriz extracelular en la infección bacteriana de las células adherentes

Presentamos un flujo de trabajo de libre disposición construido para la exploración rápida y el análisis preciso de cuerpos celulares en compartimentos celulares específicos en imágenes de microscopía de fluorescencia. Este flujo de trabajo fácil de usar está diseñado en el software de código abierto Icy y también utiliza funcionalidades ImageJ. La canalización es asequible sin conocimientos en el análisis de imágenes.

Analizador de Subestructuras: Un flujo de trabajo amigable para el usuario para la exploración rápida y el análisis preciso de los cuerpos celulares en imágenes de microscopía de fluorescencia

Aprende a analizar la formación de gránulos de estrés en células de mamífero mediante inmunofluorescencia tras desafío bacteriano con S. flexneri. Este protocolo automatizado permite evaluar cuantitativamente las respuestas celulares.

Análisis de inmunofluorescencia de la formación de gránulos de estrés tras el desafío bacteriano de las células de mamíferos

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