Name: Un método de agregación celular eficiente y flexible para esferoide 3D Producción (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Aprenda a generar esferoides celulares 3D mediante agregación eficiente usando metilcelulosa. Este método flexible permite estudios de migración, invasión e interacciones célula-matriz en biología celular.

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Los autores agradecen a M. Gordon del Centro de Imágenes Biomédicas de la Universidad de Queen's por su ayuda. Este trabajo fue apoyado por subvenciones operativas de la Sociedad de Investigación del Cáncer de Canadá (19439) y los Institutos Canadienses para la Investigación en Salud (MOP-142303) (LMM), y por Becas de Posgrado de Ontario y becas del Programa de Capacitación del Instituto de Investigación Terry Fox en Investigación Transdisciplinaria del Cáncer (SMM, EYL), y por una beca de verano Craig Jury (SMM).

<ol><li>Zimmermann, M., Box, C., Eccles, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+vs.+three-dimensional+in+vitro+tumor+migration+and+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional vs. three-dimensional in vitro tumor migration and invasion assays.</a> Methods Mol Biol. 986 (986), 227-252 (2013).</li>
<li>Albini, A., Noonan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27chemoinvasion%27+assay%2C+25+years+and+still+going+strong%3A+the+use+of+reconstituted+basement+membranes+to+study+cell+invasion+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The 'chemoinvasion' assay, 25 years and still going strong: the use of reconstituted basement membranes to study cell invasion and angiogenesis.</a> Curr Opin Cell Biol. 22 (5), 677-689 (2010).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (10), 839-845 (2007).</li>
<li>Fennema, E., Rivron, N., Rouwkema, J., van Blitterswijk, C., de Boer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+culture+as+a+tool+for+creating+3D+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Spheroid culture as a tool for creating 3D complex tissues.</a> Trends Biotechnol. 31 (2), 108-115 (2013).</li>
<li>Carletti, E., Motta, A., Migliaresi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolds+for+tissue+engineering+and+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Scaffolds for tissue engineering and 3D cell culture.</a> Methods Mol Biol. 695, 17-39 (2011).</li>
<li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> J Vis Exp. (51), (2011).</li>
<li>Handschel, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospects+of+micromass+culture+technology+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Face+Med%22%5BJournal%5D)">Prospects of micromass culture technology in tissue engineering.</a> Head Face Med. 3, 4(2007).</li>
<li>Stuckhoff, A. P., DelValle, L. <a target="_blank" href="http://www.springer.com/us/book/9781627036399">Neuronal Cell Culture Methods and Protocols Vol. 1078 Methods in Molecular Biology</a>. Amini, S., White, M. K. 1078, Humana Press. 119-132 (2013).</li>
<li>Stewart, G. J., Wang, Y., Niewiarowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylcellulose+protects+the+ability+of+anchorage-dependent+cells+to+adhere+following+isolation+and+holding+in+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Methylcellulose protects the ability of anchorage-dependent cells to adhere following isolation and holding in suspension.</a> Biotechniques. 19 (4), 598-604 (1995).</li>
<li>Vinci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+establishment+and+analysis+of+three-dimensional+tumor+spheroid-based+functional+assays+for+target+validation+and+drug+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Advances in establishment and analysis of three-dimensional tumor spheroid-based functional assays for target validation and drug evaluation.</a> BMC Biol. 10, 29(2012).</li>
<li>Nagelkerke, A., Bussink, J., Sweep, F. C. G. J., Span, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+multicellular+tumor+spheroids+of+breast+cancer+cells%3A+How+to+go+three-dimensional%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Generation of multicellular tumor spheroids of breast cancer cells: How to go three-dimensional.</a> Anal. Biochem. 437 (1), 17-19 (2013).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Presentamos un método rápido y flexible para la producción de esferoides de células 3D para modelar la arquitectura de los tejidos in vivo usando reactivos baratos y ampliamente disponibles. Nuestro protocolo explota las propiedades no citotóxicas y promotores de la adhesión de MC 8, 9 para mediar en la agregación de células y minimizar la formación de monocapa celular. A diferencia de matrices a base de proteínas aisladas a partir de fuentes animales, ...

Evaluación biológicamente relevantes del comportamiento de las células tumorales es un reto utilizando metodologías tradicionales de cultivo de células de dos dimensiones (2D), en parte debido a que estos no reflejan adecuadamente el microambiente celular encontrado in vivo. Los enfoques alternativos que incorporan componentes de la matriz extracelular en la cultura (por ejemplo, ensayos de cámara de Boyden) son fisiológicamente más representativa de las condiciones del tejido in vivo. Sin embargo, pueden estar limitados a la evaluación de comportamiento de la célula individual, y no recapitulan el complejo en combinaciones in vivo de célula-matriz y célula-célula interacciones que contribuyen a tejido o tumor de crecimiento 1, 2, 3. El uso de esferoides multicelulares es un enfoque reciente que reproduce con mayor precisión la arquitectura compacta de crecimiento in vivo de células 1,4. Los esferoides se pueden utilizar para investigar las interacciones célula-matriz de las células normales, pero también pueden actuar como análogos tumorales para modelar características de la progresión del tumor, como el crecimiento metastásico o resistencia a los medicamentos 4. Los esferoides pueden formarse por la proliferación de células individuales embebidos en una matriz de 5, o más rápidamente, mediante la promoción de la agregación de múltiples células para formar un clúster sola célula (por ejemplo, gota colgante, métodos de centrifugación) 6, 7. técnicas de agregación de células existentes pueden requerir materiales costosos o equipo especializado. Además, estos esferoides tienen una amplia gama de tamaños y morfologías y pueden ser difíciles de producir en grandes cantidades, haciendo las comparaciones entre las condiciones de crecimiento o tratamientos difíciles. Finalmente, esferoides generados por estos métodos pueden ser difíciles de aislar de la extracel proteináceolular matriz en la que están inmersos para su uso en otras aplicaciones. A continuación, se describe un método de agregación celular robusto y fácilmente modificable para la rápida formación de esferoides de células de tamaño constantemente utilizando placas disponibles comercialmente de fondo en U de células repelente y una matriz inerte que promueve la adhesión, metil celulosa. Una vez formados, estos esferoides multicelulares son fácilmente aislados para su uso en una amplia gama de aplicaciones. El protocolo también se adapta fácilmente para generar esferoides a través de la proliferación celular, que puede utilizarse para evaluar otros procesos celulares. Aquí, se muestra ensayos de invasión celular, cuantificados mediante tinción de inmunofluorescencia, y un ensayo de anoikis, como ejemplo, las aplicaciones de estos dos protocolos diferentes de formación de esferoides.

<table><tbody><tr><td>Buffers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x Solución salina tamponada con fosfato</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>Solución de cloruro de calcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21114</td><td>utilizada para tampón de lavado PBS+; No autoclave el tampón de lavado PBS+ al agregar cloruro de calcio</td></tr><tr><td>Solución de cloruro de magnesio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028</td><td>utilizado para tampón de lavado PBS+; No autoclave el tampón de lavado PBS+ al agregar cloruro de magnesio</td></tr><tr><td><fuerte>Nombre</fuerte></td><td><fuerte>Empresa</fuerte</td><td>><fuerte>Número de catálogo</fuerte></td><td><fuerte>Comentarios</fuerte</td></tr><tr><td>><fuerte>Para la formación de esferoides</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 pocillos Placa repelente de células con fondo en U</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650970</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5546</td><td>Para el cultivo de las líneas celulares SH-SY5Y, PANC-1, TPC-1</td></tr><tr><td>Medio F12K</td><td>Thermo Fisher Scientific 2112722</td><td></td><td>para el cultivo de la línea celular TT</td></tr><tr><td>Suero fetal bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1051</td><td>Filtrar antes de usar para eliminar las partículas contaminantes</td></tr><tr><td>Metilcelulosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7027</td><td>Preparar en agua a 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute Medio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758</td><td>Para el cultivo de líneas celulares HCT-116, BxPC-3</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12605028</td><td>Tampón de disociación</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Número de catálogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>For Invasion Assay</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bovine Type I Collagen</td><td>Corning Incorporated</td><td>354231</td><td>Stock 3.1 mg/mL; Mantener en hielo cuando está en uso</td></tr><tr><td>DMEM Phenol Red Free Low Glucose &nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11054-20</td><td>Menos fluorescencia de fondo en comparación con el medio suplementado con rojo de fenol</td></tr><tr><td>Factor neurotrófico derivado de la línea celular glial</td><td>Peprotech</td><td>450-10</td><td>Quimioatrayente</td></tr><tr><td><fuerte>Nombre</fuerte></td><td><fuerte>Empresa</fuerte</td><td>><fuerte>Número de catálogo</fuerte></td><td><fuerte>Comentarios</fuerte></td></tr><tr><td>Para microscopía de inmunofluorescencia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>#1.5 Coverglass</td><td>Electrónica Microscopy Sciences</td><td>72225-01</td><td>Para el montaje de esferoides extirpados</td></tr><tr><td>Alexa-Fluor 488 Phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A12379</td><td>Se utiliza para teñir la actina a 1:200</td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Bioshop Canada Incorporated</td><td>ALB001</td><td>Utilizado en tampón de bloqueo BSA</td></tr><tr><td>Dabco 33-LV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>290734</td> Glicerol <td>antidecoloración</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Bioshop Canada Incorporated</td><td>GLY001</td><td>Utilizado en el medio de montaje MOWIOL</td></tr><tr><td>ImageJ Software</td><td>Freeware, NIH-Utilizado</td><td></td> <td>para el análisis de imágenes&nbsp;</td></tr><tr><td>Microportaobjetos</td><td>VWR International</td><td>48312-024</td><td>Para el montaje de esferoides extirpados</td></tr><tr><td>MOWIOL 4-88</td><td>EMD-Millipore</td><td>475904</td><td>Utilizado en el medio de montaje MOWIOL</td></tr><tr><td>Paraformaldehído&nbsp;</td><td>EMD-Millipore</td><td>PX0055-3</td><td>Utilizado en tampón de fijación</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Bioshop Canada Incorporated</td><td>TRX777</td><td>Utilizado en tampón de permeabilización</td></tr></tbody></table>

un método de agregación celular eficiente y flexible para esferoide 3d producción

An Efficient and Flexible Cell Aggregation Method for 3D Spheroid Production

Cultivo de células en monocapa no modela adecuadamente el comportamiento in vivo de los tejidos, que implica interacciones célula-célula y célula-matriz complejos. Tridimensionales técnicas de cultivo celular (3D) son una innovación reciente desarrollado para hacer frente a las deficiencias de cultivo de células adherentes. Aunque se han desarrollado varias técnicas para la generación de análogos de tejidos in vitro, estos métodos son frecuentemente complejos, caros de establecer, requieren un equipo especializado, y en general están limitados por la compatibilidad con sólo ciertos tipos de células. Aquí, se describe un protocolo rápido y flexible para la agregación de células en esferoides multicelulares 3D de tamaño consistente, que es compatible con el crecimiento de una variedad de líneas celulares tumorales y normales. Utilizamos concentraciones variables de suero y metilcelulosa (MC) para promover la generación esferoide independiente de anclaje y evitar la formación de monocapas de células de una manera altamente reproducible. Las condiciones óptimas para Indivlíneas celulares idual se pueden lograr mediante el ajuste de las concentraciones séricas de MC o en el medio de la formación de esferoides. Los esferoides 3D generados pueden ser recogidos para su uso en una amplia gama de aplicaciones, incluyendo la señalización celular o estudios de expresión génica, la detección de drogas candidato, o en el estudio de los procesos celulares, tales como la invasión de células tumorales y la migración. El protocolo también se adapta fácilmente para generar esferoides clonales de células individuales, y se puede adaptar para evaluar el crecimiento independiente de anclaje y anoikis resistencia. En general, el protocolo proporciona un método fácilmente modificable para la generación y utilización de esferoides de células en 3D con el fin de recapitular el microambiente 3D de los tejidos y modelar el crecimiento in vivo de las células normales y tumorales.

Se describe un método flexible y eficiente para generar esferoides discretos utilizando placas de células repelentes y medios de formación de esferoides suplementado con MC. Bajo las condiciones apropiadas de MC y el suero, las células individuales se depositan y se adhieren juntos en el centro del pozo para formar esferoides con adhesión mínima a la parte inferior también. Usando este protocolo, esferoides se generan a partir de una variedad de líneas de células (Figura 2B).</st...

Aquí, describimos un protocolo rápido y flexible para la formación de esferoides celulares 3D a través de la agregación celular. Se adapta fácilmente a múltiples tipos de células y es adecuado para su uso en una variedad de aplicaciones, incluidos los ensayos de migración celular, invasión o anoikis, y para obtener imágenes y cuantificar las interacciones célula-matriz.

Un método de agregación celular eficiente y flexible para esferoide 3D Producción

Monolayer cell culture does not adequately model the in vivo behavior of tissues, which involves complex cell-cell and cell-matrix interactions. ...

NARRADOR El objetivo general de este método es generar eficientemente grandes cantidades de esferoides celulares robustos mediante agregación celular para su uso en una variedad de ensayos basados en células. La principal ventaja de esta técnica es que utiliza una matriz soluble en agua no proteica para la agregación celular y la formación de esferoides, lo que permite un aislamiento fácil y rápido de los esferoides. Este método puede ayudar a obtener nuevas perspectivas en biología celular sobre los efectos de las interacciones célula-célula y célula/matriz en el crecimiento tisular en un microentorno tridimensional.NARRADOR Antes de preparar los agregados, caliente 50 mililitros de agua ultrapura a 80 grados Celsius y agregue 10 gramos de polvo de metilcelulosa. Agite la suspensión hasta que las partículas se dispersen uniformemente. Luego añada agua ultrapura fría hasta alcanzar un volumen final de 100 mililitros y almacene las partículas durante toda la noche a 4 grados Celsius hasta que la solución se vuelva transparente y de color amarillo pálido, sin sólidos visibles.Pase la solución a través de un filtro de 0,45 micrómetros para eliminar cualquier fragmento no disuelto y diluya 1:5 miligramos por mililitro de la solución filtrada en el medio de cultivo adecuado. Luego, filtre el medio suplementado con metilcelulosa a través de un tamiz de 0,22 micrómetros. A continuación, en una cabina de seguridad biológica, lave un subcultivo con 70 % de confluencia con PBS y desprenda las células con tres mililitros de tampón de asociación tripsina-EDTA en un incubador de cultivo celular.Después de unos minutos, inspeccione las células bajo un microscopio óptico con un aumento de 10x. Cuando las células se hayan desprendido de la placa, neutralice la reacción con siete mililitros de medio de cultivo suplementado con suero. Transfiera la solución celular a un tubo nuevo de 15 mililitros y luego recolecte las células liberadas mediante centrifugación.La causa más común de una formación de esferoides fallida, aparte de partículas contaminantes, es el uso de concentraciones subóptimas de metilcelulosa o suero para la agregación y el crecimiento de su línea celular específica. NARRADOR: Utilizando una micropipeta P1000 con punta filtrada, triture el precipitado tres a cinco veces con un mililitro del medio de formación de esferoides, presionando la punta de la pipeta contra el fondo del tubo en un ángulo ligero, mientras pipetea lentamente sin expulsar todo el contenido de la punta para romper mecánicamente el precipitado. Después del recuento, diluya la suspensión celular a una concentración de un 1 × 10⁴ células por mililitro y enjuague un depósito estéril para pipeta multicanal con agua ultrapura filtrada para eliminar cualquier polvo y fibras.Dispense las células en el reservorio y utilice puntas filtrantes para transferir 100 microlitros de las células a cada pocillo de una placa de fondo en U con superficie repelente a células de 96 pocillos, mezclando periódicamente la suspensión celular para evitar que las células se sedimenten en el fondo del reservorio. Una vez que todas las células se hayan asentado, coloque la placa en un incubador de cultivo de tejidos e inspeccione los pocillos diariamente para verificar la formación de esferoides. Las células deben sedimentar en el fondo de cada pocillo dentro de las seis horas y, por lo general, agregarse en un esferoide dentro de las 24 a 48 horas.Para confirmar la formación de un esferoide exitoso, utilice una punta P10 bajo un microscopio óptico para pipetear suavemente medio sobre el esferoide. Los esferoides correctamente formados se soltarán de la placa y rodarán, confirmando su estructura tridimensional. Para incrustar los esferoides en colágeno, utilice pipeteo inverso para recubrir uniformemente el fondo de cada pocillo de una placa de cultivo tisular de ocho pocillos con un mínimo de 50 microlitros de colágeno neutralizado por pocillo.Una vez que todos los pocillos estén cubiertos, coloque la placa de cámara en una placa de cultivo tisular de 35 milímetros llena con agua ultrapura dentro de una placa de cultivo tisular de 10 centímetros e incube la placa de 10 centímetros a 37 grados Celsius durante aproximadamente una hora. Cuando el colágeno haya polimerizado, utilice una punta filtrada P1000 para transferir cuidadosamente los esferoides preformados a tubos microcentrífugos de 1,5 mililitros. Es fundamental que las capas basales de colágeno se incuben hasta que estén completamente polimerizadas para evitar alterar el colágeno al agregar los esferoides o el medio.Narrador Recolecte los esferoides cosechados en una microcentrífuga de banco y use una pipeta P200 para eliminar los sobrenadantes, absorbiendo cualquier exceso mediante inversión del tubo sobre una toalla de papel limpia según sea necesario. Usando una punta de pipeta P200 de gran orificio, resuspenda inmediatamente los esferoides en 50 microlitros de colágeno neutralizado y transfiera cuidadosamente las mezclas de esferoides y colágeno a cada pocillo de la placa de cultivo tisular de ocho pocillos. Devuelva la placa al incubador hasta que el colágeno se haya polimerizado.Después de aproximadamente una hora, agregue lentamente al menos 100 microlitros de medio de cultivo calentado que contenga el tratamiento adecuado de interés a cada pocillo para una incubación adicional. Luego, utilice un microscopio de fluorescencia para adquirir secciones de imágenes ópticas a través de los esferoides invasores. Mediante este protocolo, se pueden generar esferoides a partir de una variedad de líneas celulares.Bajo condiciones adecuadas de metilcelulosa y suero, las células individuales se sedimentan y adhieren entre sí en el centro del pocillo, formando esferoides con una adhesión mínima al fondo del pocillo. Algunas líneas celulares pueden adherirse a placas repelentes para células en ausencia o a bajas concentraciones de metilcelulosa, lo que da lugar a la formación de un esferoide rodeado por una monocapa celular. En general, concentraciones más altas de metilcelulosa impiden que las células se adhieran al pocillo.Pero una concentración demasiado alta de metilcelulosa reduce la adhesión entre célula y célula, e impide que las células se sedimenten en el fondo de la placa, lo que resulta en la formación de agregados sueltos y numerosos esferoides satélite. Los esferoides embebidos en colágeno pueden tratarse con un quimioatractivo para inducir la invasión de células individuales desde el esferoide hacia la matriz circundante. Los esferoides embebidos en colágeno fijados pueden observarse mediante microscopía de campo claro para cuantificar la distancia y el número de células invasoras, o mediante microscopía de inmunofluorescencia para visualizar las estructuras invasivas formadas por las células migratorias.Es importante permitir tiempo suficiente para que las células se agreguen en esferoides estructuralmente estables que sean lo suficientemente resistentes como para manipularlos sin fragmentarse, y que puedan recolectarse fácilmente para su uso en ensayos posteriores. Nuestro protocolo de crecimiento celular puede adaptarse aún más para múltiples ensayos de biología celular. Por ejemplo, sembrar las células en medios suplementados con altas concentraciones de metilcelulosa puede utilizarse para evaluar la resistencia celanoica.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo generar esferoides celulares tridimensionales mediante agregación, lo cual será una herramienta valiosa para muchas aplicaciones en biología celular.

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Research

Investigación

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Biology

Biología

Se describe un método simple, rápido de generación de 3D, como los tejidos esferoides y su potencial aplicación para cuantificar las diferencias en las interacciones célula-célula.

Una simple gota colgante celular Cultura Protocolo para la generación de esferoides 3D

Los esferoides son un tipo de modelo de cultivo celular en 3D que se utiliza para representar con mayor precisión el entorno de una célula en comparación con los modelos monocapa de cultivo celular en 2D. En el protocolo de ejemplo, veremos a los científicos generar esferoides a partir de una línea celular de cáncer colorrectal y aplicar imágenes de células vivas para rastrear el crecimiento de los esferoides.

Generación de esferoides a partir de líneas celulares: un método de cultivo celular tridimensional (3D)

Presentamos un dispositivo microfluídico centrífugo motorizado que puede cultivar esferoides celulares. Usando este dispositivo, los esferoides de uno o varios tipos de células podrían ser fácilmente cocultivos bajo condiciones de alta gravedad.

Plataforma Lab-on-a-CD para generar esferoides tridimensionales multicelulares

Aquí, describimos la producción a gran escala de esferoides estromales /células madre (ASC) derivados de tejido adiposo utilizando un sistema de pipeteo automatizado para sembrar la suspensión celular, asegurando así la homogeneidad del tamaño y la forma del esferoide. Estos esferoides ASC se pueden utilizar como bloques de construcción para enfoques de bioimpresión 3D.

Producción automatizada a gran escala de esferoides de células madre derivadas de tejido adiposo para bioimpresión 3D

Este protocolo detalla un método para la producción de tres tipos diferentes de esferoides de una manera que los hace adecuados para la detección y el análisis de alto contenido a gran escala. Además, se presentan ejemplos que muestran cómo se pueden analizar a nivel de células esferoides e individuales.

Un método robusto para la producción a gran escala de esferoides para aplicaciones de detección y análisis de alto contenido

El presente protocolo describe una técnica para producir esferoides tisulares a gran escala de forma rentable utilizando un dispositivo similar a un sello impreso en 3D.

Generación de esferoides de tejido a través de un dispositivo similar a un sello impreso en 3D

Presentamos un protocolo para el cultivo de esferoides de alta reproducibilidad y su caracterización fenotípica mediante captura de imágenes y proteómica.

Análisis fenotípico semiautomatizado de cultivos celulares esferoides funcionales en 3D

Aquí, presentamos un protocolo que permite la fabricación rápida, robusta y barata de esferoides tumorales seguida de encapsulación de hidrogel. Es ampliamente aplicable ya que no requiere equipo especializado. Sería particularmente útil para explorar las interacciones esferoides-matrices y construir modelos de fisiología tisular o patología in vitro .

Fabricación y encapsulación de esferoides tumorales en hidrogeles de polietilenglicol para el estudio de las interacciones esferoide-matriz

Los esferoides celulares se han considerado un modelo potencial en el campo de las aplicaciones biológicas. Este artículo describe los protocolos para la generación escalable de esferoides celulares utilizando un dispositivo de ensamblaje acústico 3D, que proporciona un método eficiente para la fabricación robusta y rápida de esferoides celulares uniformes.

Dispositivo de montaje acústico tridimensional para la fabricación en masa de esferoides celulares

En este trabajo se describen diferentes métodos de formación de esferoides multicelulares para realizar un seguimiento de la microscopía multiparamétrica de células vivas. Mediante el uso de microscopía de imágenes de fluorescencia (FLIM), autofluorescencia celular, colorantes de tinción y nanopartículas, se demuestra el enfoque para el análisis del metabolismo celular, la hipoxia y la muerte celular en cáncer tridimensional vivo (3D) y esferoides derivados de células madre.

Microscopía de imagen de por vida (FLIM) de fluorescencia de células vivas multiparamétricas y producción de esferoides multicelulares

Este estudio presenta una metodología rentable y eficiente para generar estructuras celulares en 3D utilizando un sistema basado en sellos para crear micropocillos en moldes de agarosa. El sistema promueve la formación de esferoides/organoides uniformes, mejorando así las interacciones celulares. Este enfoque reduce la variabilidad experimental y apoya las aplicaciones en pruebas de fármacos e ingeniería de tejidos.

Generación de esferoides/organoides tridimensionales a partir de cultivos celulares bidimensionales utilizando un novedoso dispositivo de estampado

Aprenda a generar esferoides celulares 3D mediante agregación eficiente usando metilcelulosa. Este método flexible permite estudios de migración, invasión e interacciones célula-matriz en biología celular.

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