Un método para probar la eficacia del lavado de manos para la eliminación de patógenos infecciosos emergentes

El objetivo general de este experimento es probar la eficacia comparativa de las opciones de lavado de manos en manos que han sido inoculadas experimentalmente con un organismo de interés. Este método puede proporcionar información sobre preguntas clave para ayudar a prevenir enfermedades infecciosas. Al permitir que los investigadores investiguen la eficacia del lavado de manos para organismos particulares de interés.

La principal ventaja de esta técnica es que es flexible y se puede adaptar para permitir la investigación de muchos organismos diferentes. La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando nos dimos cuenta de que se estaban utilizando soluciones de cloro para lavarse las manos en contextos de ébola y no había evidencia de la eficacia de esto en ese momento. Después de reclutar sujetos elegibles y preparar soluciones para lavarse las manos de acuerdo con el protocolo de texto, prepare las bacterias esparciendo una hebra no patógena de E. Coli en placas de agar LB e incube los cultivos a 37 grados centígrados durante 24 horas para obtener colonias individuales.

Un día antes del inicio del experimento, use un lubricante estéril para tomar una sola colonia del plato e inocular 10 mililitros de caldo LB. Incubar los cultivos a 37 grados centígrados, con agitación, durante la noche. En la mañana del experimento, agregue un mililitro del cultivo durante la noche a 20 mililitros de caldo LB fresco.

Incubar los cultivos durante aproximadamente dos horas y media para lograr una densidad de sal mayor de 10 a la octava UFC por mililitro. A continuación, utilice un espectrofotómetro para estimar la concentración del cultivo. Inmediatamente antes de la prueba, prepare un inóculo compuesto por un 68% de bacterias o suspensión viral y un 32% de cloruro de sodio o carga en el suelo.

Girar o agitar suavemente para mezclar. Después de preparar a los voluntarios de acuerdo con el protocolo de texto, pruebe el pH de la piel de cada voluntario colocando una sonda de pH de piel de punta plana en el espacio palmeado entre el dedo índice y el dedo medio. Asegúrese de que el electrodo esté plano contra la piel y registre la lectura del pH.

A continuación, junta el vaso del voluntario. Luego, pipetee cuidadosamente 750 microlitros de inoculado en cada palma para pinchar las manos. Al pinchar las manos de los voluntarios, es importante que no se derrame nada del inóculo.

Recuérdeles a los voluntarios que esto es importante y dales la oportunidad de practicar con agua antes de comenzar el procedimiento. Pida a los voluntarios que froten suavemente sus manos hasta que todas las superficies de la mano estén codificadas con el inoculado, mientras someten las manos a la menor fricción posible. Indique a los voluntarios que mantengan las manos quietas y alejadas del cuerpo durante 30 segundos adicionales para permitir que la inoculación se seque.

A continuación, lávese las manos utilizando uno de los métodos descritos en el protocolo de texto. Para lavarse las manos con jabón, use 10 mililitros de agua ultrapura para mojar las manos. Pida a los voluntarios que se enjabonen las manos con jabón y luego se froten las manos durante 20 segundos más.

Enjuague las manos del voluntario vertiendo 500 mililitros de agua ultrapura a temperatura ambiente a través de un embudo a un caudal de 1,5 litros por minuto en una bolsa grande de recolección de muestras y procese la muestra dentro de las dos horas. Para todas las soluciones de cloro, vierta 200 mililitros de solución de cloro sobre las manos del voluntario a través de un embudo a un caudal de 1,5 litros por minuto y haga que los voluntarios se froten bien las manos. Como otro método de lavado de manos, haga que los voluntarios usen desinfectante de manos para lavarse las manos.

Es importante frotar suavemente todas las superficies de la mano, indique a los participantes que se concentren en cada parte, palmas, uñas, entre los dedos mientras se frotan y luego asegúrese de que toda la mano se haya enjuagado. Para el control A, después de la inoculación, no realice un paso de lavado de manos. Para el control B, use solo agua ultrapura a temperatura ambiente para realizar el lavado de manos a través de un embudo con un caudal conocido.

Después de lavarse las manos, coloque inmediatamente la mano de cada voluntario seleccionado para la prueba, en una bolsa de muestra que contenga 75 mililitros de Leeuwin hasta la muñeca. Sostenga la parte superior de la bolsa firmemente alrededor de la muñeca. Pida a los voluntarios que froten suavemente su mano en la solución durante 30 segundos, teniendo cuidado de meter la mano entre los dedos y debajo de las uñas.

Masajee suavemente la mano desde el exterior de la bolsa durante 30 segundos para asegurarse de que toda la mano esté completamente enjuagada en el Leeuwin, hasta la muñeca. Selle la bolsa y procésela de acuerdo con el ensayo apropiado. Antes de repetir el proceso con cada método de lavado de manos, haga que los voluntarios usen jabón en agua tibia para lavarse bien las manos en el fregadero.

Por último, utilice etanol al 70% para pulverizar las manos del voluntario hasta que estén cubiertas por ambos lados, y deje que se sequen. Para analizar las muestras, instale una llama y un colector de filtración con embudos de filtración estériles y una conexión de vacío. Esterilice las pinzas sumergiéndolas en etanol y flameándolas.

Utilice las pinzas para colocar un filtro de 0,45 micras en el colector de filtración con la rejilla hacia arriba. A continuación, utilice una pequeña cantidad de PBS estéril para humedecer el filtro. Coloque el embudo en la base y pipetee o vierta la muestra directamente sobre el filtro.

Conecte el vacío hasta que toda la muestra haya pasado a través de la membrana. Luego, use PBS estéril para enjuagar los lados del embudo y vuelva a conectar la aspiradora. A continuación, retire el embudo, esterilice las pinzas con llama y levante el filtro de la base.

A continuación, coloque el filtro suavemente sobre el medio en una placa de Petri con la rejilla hacia arriba, asegurándose de que el filtro quede al ras de la superficie. Invierta las placas e incube a 37 grados centígrados durante 24 horas. Después de la incubación, cuente las colonias de E. Coli y registre los datos.

Realizar análisis de datos según el protocolo de texto. El protocolo descrito en este video se completó con 18 voluntarios probados con E. Coli y Phi6, para E. Coli sin carga en el suelo, el lavado de manos con HTH, NaDCC y NaOCl estabilizado, todos resultaron en reducciones logarítmicas significativamente mayores que el lavado de manos solo con agua. Con la carga del suelo, la HTH resultó en una reducción logarítmica significativamente mayor de E. Coli que el lavado de manos solo con agua y jabón y ABHS.

No hubo diferencias significativas entre los métodos para Phi6 sin carga en el suelo. Sin embargo, para el Phi6 con carga en el suelo, el agua sola resultó en una mayor reducción logarítmica que el ABHS o el NaOCl estabilizado, y el lavado de manos con jabón en una mayor reducción logarítmica que el ABHS, estabilizó el NaOCl y generó NaOCl. HTH también tuvo una mayor reducción logarítmica que ABHS y NaOCl y NaDCC estabilizados resultaron en una mayor reducción logarítmica que NaOCl y ABHS estabilizados.

Como se demuestra en estos gráficos, el cloro resultó en una reducción logarítmica significativamente mayor de E. Coli persistente en el agua de enjuague que el lavado de manos con jabón. Finalmente, se encontró el mismo patrón en Phi6 sin carga de suelo con todas las soluciones de cloro, lo que resultó en una reducción significativamente mayor de Phi6 en el agua de enjuague que el lavado de manos con jabón. No hubo disminuciones significativas en el agua de enjuague con Phi6 y en la carga del suelo.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar que los resultados de eficacia para cada afección se calculan comparando los resultados de los dos controles. Esto significa que es muy importante realizar los pasos de manera constante para cada opción de lavado de manos.