Un método para probar el efecto de las señales ambientales sobre el comportamiento de apareamiento en Drosophila melanogaster

El objetivo general de este ensayo conductual es cuantificar el efecto de las colas ambientales en los comportamientos reproductivos, como el cortejo y el apareamiento. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biología del comportamiento y la eurogenética. Como la inferencia de factores genéticos y ambientales sobre los comportamientos reproductivos y los mecanismos que moderan esos comportamientos.

Esta técnica ofrece velocidad y flexibilidad para probar una amplia gama de colas ambientales que afectan a la reproducción. Y eso con un muy buen número de réplicas. La demostradora del procedimiento estará a cargo de Jenke Gorter, una estudiante de posgrado de mi laboratorio.

Comience el experimento preparando un litro de medio rico para moscas. Vierta un litro de agua del grifo en un vaso de precipitados de vidrio de dos litros con barra magnética para agitar. Y coloque el vaso de precipitados en una placa calefactora magnética.

Mantenga la remoción apagada y suba el fuego a 300 grados centígrados, hasta alcanzar la temperatura de ebullición. Encienda la agitación a 500 rpm y agregue los ingredientes al agua hirviendo. Espera a que la levadura haga espuma vigorosamente.

Luego baje la temperatura de la placa caliente a 120 grados centígrados. Después de 10 minutos, baje la placa caliente a 30 grados centígrados. Y deja que la mezcla revuelva, hasta que se enfríe a 48 grados centígrados.

Controle la temperatura insertando un termómetro directamente en los alimentos. Disuelva dos gramos de Tegosept en 10 mililitros de etanol al 96%. Combine la mezcla y cinco mililitros de ácido propiónico molar en el vaso de precipitados.

Revuelva durante tres minutos. Caliente una aguja hasta el enrojecimiento en un mechero bunsen. Y perfore un agujero de 0,3 centímetros de diámetro en la parte superior de una placa de Petri de plástico de 3,5 centímetros por 1,0 centímetros.

Al preparar un medio alimentario, con compuestos olorosos, primero pipetee 30 microlitros del compuesto deseado en el plato para 1/2 de los platos experimentales. Deje la otra 1/2 de los platos vacíos para comparar. Con una pipeta serológica de cinco mililitros vierta tres mililitros de medio alimentario, cubriendo el fondo del plato.

Cúbralo con una gasa para evitar la contaminación y deje que el medio se solidifique durante una hora, a temperatura ambiente. A continuación, coloque una tapa en los platos y cierre las tapas con cinta adhesiva por dos lados. Prepare pequeños tapones de película de parafina para cubrir los agujeros de los platos enrollando trozos de película de parafina en rollos de punto cero de dos centímetros de grosor.

Y luego córtalos en segmentos de cero punto cinco centímetros. Corta dos pequeños agujeros en el tabique para que quepan bien los accesorios de mamparo con púas. Coloque tapas de botellas abiertas de cuatro puntos y cinco centímetros con un tabique de silcone de tres puntos cero y dos centímetros de grosor.

Conecte el pequeño tubo de PVC a ambas salidas que salen de la botella y solo a una de las entradas que ingresan a la botella. A continuación, conecte un tubo de vidrio a la salida de cada botella de cultivo YPD, utilizando un tubo pequeño. Llena el tubo con fibra de vidrio.

Y autoclave antes de usar. Envuelva las tapas ajustadas y los tubos en papel de aluminio. Y los esterilizamos en autoclave durante 25 minutos a 120 grados centígrados y una presión de un bar.

Sumerja una punta de pipeta estéril de 100 microlitros en una de las colonias de levadura de la placa de agar YPD y colóquela en el frasco de medio líquido YPD esterilizado en autoclave. Tape esta botella de medio líquido YPD oculada y de levadura, así como una botella de control de medio YPD, sin levadura, con tapas esterilizadas en autoclave, montadas dentro de una salida. Para evitar la contaminación del medio YPD con microorganismos, conecte el tubo pequeño a un filtro de jeringa estéril estéril de punto cero, cuatro y cinco micrómetros, con un empuje de plástico en el conector del tubo del mamparo, yendo hacia el filtro.

Y un tornillo en el conector de mamparo de plástico que sale del filtro. A continuación, conecte el tubo a la entrada del frasco de cultivo YPD. Coloque las botellas en placas magnéticas separadas.

Y agite la solución a 100 rpm, a temperatura ambiente, durante 24 horas antes del inicio del experimento. Conecte las entradas de ambas botellas a un tubo conectado a aire presurizado. Asegúrese de conectar la salida de la botella de levadura experimental a un tubo que ventile el olor a levadura fuera de la sala experimental, para evitar interferencias con el experimento.

Conecte el tubo de PVC al lado de salida del tubo de vidrio y conduzca hacia los orificios inferiores de la caja de experimentos. Utilizando un divisor en T, con un diámetro exterior mayor o igual a cero punto cinco centímetros, y piezas cortas de tubo pequeño de PVC, conecte dos pipetas serológicas a cada una de las dos salidas a ambos lados. Pega las pipetas en la hoja de papel blanco debajo de las cámaras, en la caja de acero.

Use una pipeta bucal para colocar una hembra experimental en una pequeña placa de Petri a nivel de ZetaTalk seis. Y permita que la mosca se aclimate a la arena de apareamiento durante una hora. Después de una hora, a las siete de ZetaTalk, transfiera un macho de tipo salvaje a la placa de Petri.

Y haga clic en Iniciar monitoreo durante 24 horas. Para el experimento de la bomba de aire, coloque el plato de tal manera que una salida de pipeta esté conectada al orificio de entrada de la arena de acoplamiento. Para analizar el comportamiento de apareamiento de la pareja, seleccione y abra todas las imágenes, en un software de visualización de imágenes.

Y hojearlos en orden cronológico. Anote la fecha, el número de experimento, el número de plato y la hora de inicio en una hoja de cálculo dentro de la misma fila. Tome la hora de inicio de cada arena desde el momento en que se coloca debajo de la cámara web.

Registre la marca de tiempo de las imágenes. Marque la hora de inicio de cada cópula en la misma fila, en la hoja de cálculo. Cuente un apareamiento como un incidente, cuando el macho ha montado a la hembra y la pareja permanece moderadamente inmóvil y en la misma postura, durante al menos cinco fotogramas consecutivos.

El análisis del aire de la levadura, separado para el medio alimentario, muestra que una pareja de apareamiento no responde a los olores de la levadura cuando no hay levadura presente en el medio alimenticio. Pero sí aumentan su frecuencia de apareamiento en el aire de la levadura cuando la levadura también se agrega al medio alimenticio. La receptividad femenina aumenta con la presencia de ácido acético.

Pero solo cuando la peptona está presente en el medio, lo que demuestra que las moscas necesitan sentir simultáneamente aminoácidos y ácido acético, para aumentar su frecuencia de apareamiento. Una vez dominada, esta técnica se puede configurar en seis horas. Y el análisis de comportamiento se puede realizar en cinco horas, si se hace correctamente.