Prueba de reconocimiento de objeto novedoso para la investigación del aprendizaje y la memoria en ratones

El objetivo general de este ensayo conductual es evaluar varios aspectos del aprendizaje y la memoria en ratones. Este método puede ayudar a responder numerosas preguntas en el área de la cognición de roedores, desde los conceptos básicos para desarrollar una comprensión más profunda, para ciertos aspectos del aprendizaje en la memoria y ratones, así como problemas más complejos, como el deterioro cognitivo, incluidos los modelos de enfermedades, como la enfermedad de Alzheimer, hasta la exploración de una posible mejora cognitiva. La principal ventaja de la ORT, es su simplicidad, eficiencia y flexibilidad en el estudio del aprendizaje y la memoria en ratones.

Para demostrar este procedimiento estará Andrei Jeltyi, un técnico de laboratorio de nuestro laboratorio. Comience seleccionando objetos del tamaño de un mol que puedan ser fácilmente discriminados por el animal, pero que tengan un grado similar de complejidad en características, como la textura, la forma o el brillo para minimizar cualquier posible preferencia de objeto inducida que pueda sesgar los resultados. Además, para reducir aún más las preferencias inducidas, asegúrese de que los ratones puedan trepar por ambos objetos o por ninguno.

La capacidad de trepar sobre un objeto puede aumentar el interés en la exploración. Luego, para minimizar el estrés de la iluminación brillante, use una iluminación baja desactivada con el centro del laberinto iluminado alrededor de 20 suertes. Aclimate a los ratones a las nuevas salas de prueba durante al menos una hora antes de usarlos cada día y mantenga la temperatura y la humedad similares a las condiciones normales de la vivienda.

Tenga en cuenta que los ratones deben manipularse una o dos veces al día durante al menos un minuto, en el transcurso de una o dos semanas antes de la prueba. Por último, para la arena principal, use una cámara cuadrada hecha de plástico no poroso blanco o negro que contraste con el color del mouse. Comienza sacando al ratón de su jaula de origen y colócalo en el centro de la arena abierta y vacía.

Permita la exploración libre de la arena durante cinco minutos. Una vez que la jaula de la casa esté vacía, guárdela para usarla como jaula de retención al día siguiente. Al cabo de cinco minutos, retire el ratón y colóquelo en una jaula de retención.

No devuelva el ratón a su jaula original, ya que esto puede afectar al comportamiento de los ratones que se van a probar. A continuación, limpie a fondo el aparato entre ratones, utilizando etanol al 70% por volumen. A continuación, comienza la fase de entrenamiento o T1, colocando dos objetos idénticos en cuadrones opuestos de la arena.

Por ejemplo, uno en la esquina noroeste y otro en la esquina sureste. Fije los objetos demasiado ligeros al suelo con masilla de montaje de extracción. Contrarresta el uso de cada conjunto de objetos, así como la ubicación del objeto novedoso en cada una de las cuatro esquinas de la arena.

Asegúrese de saber qué diagonal se usa para qué animal, de modo que el uso de la diagonal en el día de entrenamiento sea la forma que se usó el día de prueba para cada ratón. 24 horas después de la habituación, retire al ratón de su jaula de origen y colóquelo en el centro de la arena, equidistante de los dos objetos idénticos para comenzar el entrenamiento. Permita la exploración libre durante un mínimo de cinco minutos, si se fusiona una cepa de ratones que se sabe que tienen baja actividad locomotora o de exploración, extienda la prueba a 10 minutos para todos los ratones de las cohortes.

Al final de la prueba de entrenamiento, retire el ratón y colóquelo en la jaula de retención. Una vez que la jaula de la casa esté vacía, guárdela para usarla como jaula de retención el día de la prueba. Asegúrese de limpiar el aparato y los objetos entre ratones.

A continuación, comience la fase de prueba o T2, colocando el objeto familiar utilizado durante el entrenamiento y un objeto nuevo en cuadrones opuestos de la arena. Utilice las mismas ubicaciones que utiliza durante el entrenamiento para cada ratón. En el intervalo de T1 a T2 de elección, retire al ratón de su jaula de origen y colóquelo en la arena central, equidistante del objeto familiar y del objeto nuevo.

Permita la exploración libre durante 10 minutos. Finalmente, al final de la prueba de prueba, retire el ratón y colóquelo en la jaula de retención. Para el análisis, la exploración se define como la nariz dirigida hacia el objeto dentro de dos o tres centímetros con barrido de vibración activo.

Sin embargo, el ratón sentado sobre el objeto, no se cuenta para el tiempo de exploración. Tanto para T1 como para T2, anote los primeros cinco minutos y calcule el tiempo total de exploración de ambos objetos para cada sesión. Si el ratón no cumple con el tiempo mínimo de exploración de 20 segundos para ambos objetos, continúe anotando más de cinco minutos hasta que la exploración total supere los 20 segundos.

Ampliar el tiempo de T1 y T2 a 10 minutos para las cepas de ratones que tienen poca exploración y no cumplen este criterio mínimo en cinco minutos, como se observó durante las pruebas piloto. Finalmente, si los ratones no alcanzan un mínimo de 20 segundos de exploración para ambos objetos para T1 o T2 a los 10 minutos, exclúyalos del análisis, ya que no se puede confirmar que el animal pasó suficiente tiempo explorando para aprender y discriminar. La tarea de reconocimiento de objetos es un método eficiente y flexible para estudiar el aprendizaje y la memoria en ratones, en el que se ha demostrado que los inhibidores de la fosfodiesterasa 2 mejoran durante esta tarea.

En comparación con el vehículo, la administración de los inhibidores de PDE2 60-7550 o ND7001, mejoró significativamente la memoria de manera dependiente de la dosis, cuando se administró 30 minutos antes del entrenamiento. Cuando se administró en diferentes puntos de tiempo, en relación con el entrenamiento y las pruebas, el inhibidor de PDE2 bay 60-7550 mejoró significativamente su memoria cuando se administró 30 minutos antes del entrenamiento, así como inmediatamente después del entrenamiento y 30 minutos antes de la recuperación. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en dos o tres días si se realiza correctamente.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar realizar estudios piloto y elegir cuidadosamente el intervalo T1 a T2, ya que elegir un intervalo incorrecto puede resultar en un mal efecto. Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como el laberinto del granero, para responder a preguntas adicionales, como las diferencias en el aprendizaje, que no se pueden abordar por completo con las pruebas de reconocimiento de objetos. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo del aprendizaje y la memoria exploraran los mecanismos biológicos básicos de la memoria, así como exploraran los posibles mecanismos de varios déficits cognitivos en roedores.

Después de ver este vídeo, debería tener una buena comprensión de cómo configurar y diseñar un experimento adecuado utilizando la prueba de reconocimiento de objetos, incluida la ejecución de estudios piloto, la elección de objetos y la selección del intervalo T1 a T2 adecuado. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.