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DOI: 10.3791/55913-v
Ana C. Lima*1,2,3,4, Min Jung*1, Jannette Rusch1, Abul Usmani1, Alexandra M. Lopes3,4, Donald F. Conrad1
1Department of Genetics,Washington University School of Medicine, 2Graduate Program in Areas of Basic and Applied Biology (GABBA), Abel Salazar Institute of Biomedical Sciences,University of Porto, 3Instituto de Investigação e Inovação em Saúde,University of Porto, 4IPATIMUP - Instituto de Patologia e Imunologia Molecular da Universidade do Porto, 5Department of Pathology & Immunology,Washington University School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Este trabajo describe la estandarización de un método para obtener poblaciones de células germinales purificadas de tejido testicular de diferentes especies de mamíferos. Es un protocolo directo que combina la disociación mecánica de los testículos, la tinción con Hoechst-33342 y el yoduro de propidio, y la clasificación FACS, con amplias aplicaciones en estudios comparativos de la biología reproductiva masculina.
El objetivo general de este procedimiento estandarizado es aislar distintos tipos de células germinales masculinas de diferentes especies de mamíferos utilizando un único protocolo. Este método puede ayudar a facilitar el estudio molecular de la espermatogénesis mediante el análisis de alto rendimiento de diferentes tipos de células germinales. La principal ventaja de esta técnica es que un solo conjunto de reactivos se puede aplicar a varias especies de mamíferos para el aislamiento simultáneo de cuatro poblaciones diferentes de células germinales masculinas.
La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando decidimos investigar la evolución de patrones específicos de regulación de la expresión génica en diferentes mamíferos. Chris Holley, tecnólogo médico del Siteman Flow Cytometry Core, demostrará cómo operar el clasificador de células y configurar las puertas. Comience por desencapsular un solo testículo murino y cortar el tejido en trozos pequeños.
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