Name: Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda a establecer un modelo de ratón de cáncer colorrectal mediante infección segmental adeno-cre. Este método permite monitorear tumores coloniales localizados con colonoscopia de alta resolución para investigaciones oncológicas reproducibles.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo está dedicado a la memoria del profesor Moritz Koch.

Los experimentos con animales presentados aquí fueron revisados ​​y aprobados de forma independiente por un Comité institucional y gubernamental de Cuidado y Uso de Animales y se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices de la Federación de Asociaciones de Ciencia Animal de Laboratorio (FELASA). Todas las medidas posibles fueron tomadas para minimizar el sufrimiento incluyendo anestesia y analgesia o, si es necesario, eutanasia prematura. 1. Inducción local del tumor a través de la infección adenovirúrgica quirúrgica <ol><li> Preparación de animales para la cirugía NOTA: Prácticamente cualquier mutación condicional (&quot;floxed&quot;) puede ser inducida a través del método aquí descrito. Se recomienda el uso de mutaciones en genes relevantes en cáncer colorrectal como Apc, Kras o Tp53. La eficacia de la recombinación cre es dependiente del tamaño del constructo que se va a extirpar. Las secuencias floxed grandes son excised menos eficientemente. La recombinación de todos los alelos debe ser confirmada en los tumores por PCR. <ol><li> Para el desarrollo de tumores colorrectales, utilice un cruzamiento de los siguientes alelos condicionales para un modelo básico de CRC (número de base de datos MGI entre paréntesis): Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16 Kras tm4Tyj (MGI: 2429948) 17 Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 </li><li> Si se requiere un alelo indicador de fluorescencia ( por ejemplo , para detectar micrometástasis), utilice el siguiente alelo: Gt (ROSA) _ { 26 } S o tm _ { 6 } (CAG - ZsGreen _ {1 }) Hze (MGI: 3809522) 19 NOTA: Todas las cepas anteriores están disponibles a través del NCI Mouse Repository o el Laboratorio de Jackson. No se requiere ayuno, ya que toda la materia fecal restante puede eliminarse antes de la infección adenoviral. El ayuno preoperatorio conduce a una mayor mortalidad perioperatoria y constituye un tremendo estrés para los pequeños roedores. </li><li> Utilice sevoflurano a 3 - 3,5% en volumen para anestesia general. Una pérdida de tEl reflejo de pellizcar el dedo del pie indica suficiente anestesia. </li><li> Antes de la primera incisión, inyectar 0,05 mg / kg de buprenorfina por vía subcutánea. </li><li> Cubrir los ojos del ratón anestesiado con pomada oftálmica para evitar la desecación de la córnea. </li><li> Coloque el ratón en posición supina sobre una mesa pequeña. Utilice cintas adhesivas no traumáticas para restringir el ratón. </li><li> Afeitar el abdomen con una máquina de afeitar eléctrica (la crema depilatoria se puede utilizar alternativamente) y desinfectar con los hisopos del alcohol o el yodo. Use el tiempo de contacto recomendado por el fabricante. </li><li> Cubrir el campo quirúrgico con cortinas estériles. NOTA: El uso de antibióticos perioperatorios es opcional y está sujeto a las pautas institucionales. </li><li> Utilice instrumentos estériles de un solo uso o esterilizados para todos los procedimientos quirúrgicos. </li></ol></li><li> Laparotomía de la línea media y la exposición del colon <ol><li> Utilice las tijeras (los escalpelos se pueden utilizar alternativamente) para hacer una incisión de la línea media(~ 15 mm) de la piel en la parte inferior del abdomen. </li><li> Recoger la musculatura de la pared abdominal con fórceps y cuidadosamente incise con tijeras, abriendo así la cavidad abdominal. </li><li> Identificar el colon distal, sólo tocarlo con pinzas atraumáticas. Abrazadera del colon con una pinza delgada ( por ejemplo , una abrazadera vascular Micro Serrefine) aproximadamente 15 mm proximal del ano. NOTA: Preste especial atención a la vulnerabilidad del colon en todo momento. La perforación conduce inevitablemente a peritonitis y sepsis y requiere eutanasia del animal. </li></ol></li><li> Infección del colon segmentario con el virus Adeno-cre <ol><li> Insertar un tubo de Teflón flexible transanalmente y avanzar cuidadosamente hasta alcanzar la oclusión del lumen lograda por la abrazadera colocada previamente a 15 mm del borde anal. No utilice el exceso de fuerza, ya que esto puede provocar perforación. </li><li> Cannulate el tubo con una cánula 30G, conecte una jeringuilla estándar de 1 mL y enjuague el coloN con solución salina normal con el fin de evacuar la materia fecal restante. Esto puede requerir varios ml de solución salina. </li><li> Una vez que el colon distal está vacío quitar el tubo y reemplazarlo con un tubo de Teflon fresco y de nuevo la posición directamente distal a la abrazadera como se describe anteriormente. </li><li> Ocultar el colon con una segunda pinza ~ 3 mm distal a la abrazadera proximal ( es decir , sobre el tubo insertado, ~ 12 mm desde el borde anal), resultando en un segmento aislado de 3 mm para ser infectado. NOTA: Para la oclusión distal del segmento, los clips de la arteria coronaria de Fogarty han demostrado ser los más adecuados ya que están cauchutados, lo que lleva a una oclusión del colon a pesar del tubo intraluminal entre las ramas de la abrazadera. </li><li> Utilice una segunda jeringa (1 ml estándar con una cánula de 30 G) para inyectar cuidadosamente 50 a 80 μL de tripsina-EDTA al 0,25% en el segmento de colon fijado e incubar durante 10 min. Deje la cánula y la jeringa unidas al tubo de Teflón para evitar que el líquido se filtre hacia atrás. <li> Primero quite la abrazadera distal, y luego el tubo de tripsina. </li><li> Enjuague el colon distal con ~ 500 μL de solución salina normal para eliminar la tripsina restante. </li><li> Inserte un nuevo tubo de Teflón, vuelva a colocar la abrazadera distal e infle el segmento de colon con 50 - 80 μl de solución adenoviral (10 11 unidades formadoras de placas (PFU) / ml en solución salina tamponada con fosfato) e incube durante 30 min Figura 2A ). NOTA: No derrame la solución viral ya que el contacto con el adenol puede conducir al desarrollo del tumor en cualquier tejido de ratones mutantes condicionalmente. </li><li> Retire las abrazaderas y el tubo. </li></ol></li><li> Cierre del abdomen y recuperación postoperatoria <ol><li> Cierre la pared abdominal con 6-0 de absorción rápida(Por ejemplo , polidioxanona (PDS)). </li><li> Cierre la piel con clips para heridas quirúrgicas. </li><li> Coloque el ratón sobre la almohadilla calentadora ajustada a 38 ° C hasta que se haya recuperado completamente de la anestesia. </li><li> Administrar otro bolo de buprenorfina ip 0,05 mg / kg 12 h después de la cirugía, seguido de bolos adicionales de buprenorfina cada 12 h si es necesario. </li><li> Vigilar a los ratones al menos una vez al día para detectar signos de angustia debido al crecimiento del tumor. </li></ol></li></ol> 2. Colonoscopia NOTA: Dependiendo de las mutaciones condicionales utilizadas, la infección adenoviral conduce a tumores endoscópicamente visibles dentro de 2 a 4 semanas. Por lo tanto, realice la primera colonoscopia postoperatoria 2 semanas después de la inducción adenoviral y repita cada 2 semanas. Se recomienda un sistema disponible comercialmente para la colonoscopia murina. 20 <ol><li> Preparación de animales para colonoscopia NOTA: No hay necesidad de ayunoEd. La materia fecal restante suele estar bien formada en el colon distal y puede ser empujada más allá del tumor durante la colonoscopia, lo que hace innecesario el proceso estresante del ayuno repetido. <ol><li> Utilice sevoflurano a 3 - 3,5% en volumen para anestesia general. Una pérdida del reflejo de pinza del dedo del pie indica suficiente anestesia. </li><li> Cubrir los ojos de los ratones anestesiados con pomada oftálmica para evitar la desecación de la córnea. </li><li> Retenga los ratones en posición supina sobre una mesa pequeña. </li></ol></li><li> Colonoscopia <ol><li> Insertar el espacio (diámetro 1,9 mm, longitud 10 cm) en el tracto intestinal a través del ano y cuidadosamente insuflar aire bajo control visual para distender el colon. No inflar más aire de lo necesario para el examen. NOTA: Para la insuflación de aire, se puede usar la bomba de aire anti-niebla del sistema de colonoscopia. Si no hay bomba de aire antiniebla disponible, se puede usar cualquier otra bomba de aire con ajustes de presión muy baja, o preAire ssurized con una válvula de reducción de presión delicado. El dióxido de carbono (CO 2 ) conduce fácilmente a la acidosis en roedores pequeños y debe ser evitado. </li><li> Cuidadosamente empuje el alcance hacia adelante hasta que una lesión mucosa en el colon distal puede ser identificado ( Figura 1A - 1D ). </li><li> Guarde las imágenes endoscópicas para una evaluación posterior. Se ha descrito anteriormente un sistema de puntuación endoscópica para tumores intraluminales. 20 </li><li> Retire con cuidado el alcance y coloque el ratón sobre la almohadilla calentadora ajustada a 38 ° C hasta que se haya recuperado completamente de la anestesia. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2016%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li>
<li>Weitz, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15639298">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li>
<li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li>
<li>Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li>
<li>García, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDB1+overexpression+is+a+negative+prognostic+factor+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).</li>
<li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li>
<li>Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. <a target="_blank" href="https://www.omicsonline.org/peer-reviewed/mouse-models-of-colorectal-cancerderived-circulating-tumor-cells-76740.html">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li>
<li>Taketo, M. M., Edelmann, W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19263594">Mouse models of colon cancer.</a> Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+combined+with+TLR7%2F8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li>
<li>Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+induction+relationships+in+development+of+transplantable+cancers+of+the+colon+in+mice+for+chemotherapy+assays%2C+with+a+note+on+carcinogen+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure.</a> Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).</li>
<li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priceless+GEMMs%3A+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li>
<li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li>
<li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mighty+mouse%3A+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li>
<li>Shibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorectal+adenoma+formation+initiated+by+conditional+targeting+of+the+Apc+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene.</a> Science. 278 (5335), 120-123 (1997).</li>
<li>Kuraguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenomatous+polyposis+coli+%28APC%29+is+required+for+normal+development+of+skin+and+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus.</a> PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).</li>
<li>Jackson, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+lung+tumor+initiation+and+progression+using+conditional+expression+of+oncogenic+K-ras%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras.</a> Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).</li>
<li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutant+p53+gain+of+function+in+two+mouse+models+of+Li-Fraumeni+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome.</a> Cell. 119 (6), 847-860 (2004).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).</li>
<li>Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dominant+mutation+that+predisposes+to+multiple+intestinal+neoplasia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse.</a> Science. 247 (4940), 322-324 (1990).</li>
<li>de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+the+mouse+Msh2+gene+results+in+mismatch+repair+deficiency%2C+methylation+tolerance%2C+hyperrecombination%2C+and+predisposition+to+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer.</a> Cell. 82 (2), 321-330 (1995).</li>
<li>Reitmair, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+intestinal+carcinomas+and+skin+neoplasms+in+Msh2-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice.</a> Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li>
<li>Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasting+of+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Fasting of mice: a review.</a> Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Mientras que son generalmente fáciles de generar y de mantener, los modelos clásicos del ratón del CRC basados ​​en la inyección de la línea celular son artificiales y no pueden recapitulate completamente la enfermedad humana. Como consecuencia, se han desarrollado GEMMs. El primer CRC GEMM fue el ratón Apc Min , que alberga una mutación nula heterocigótica en el gen Apc, por lo tanto imitando la enfermedad hereditaria humana poliposis adenomatosa familiar (FAP). Sin embargo, los ratones Apc Min de...

El cáncer colorrectal (CRC) sigue siendo una de las principales causas de muerte relacionada con el cáncer en los países occidentales. 1 Aunque el pronóstico de los pacientes con enfermedad en estadio temprano es bueno, muchos tumores son diagnosticados en etapas posteriores en los que, a pesar de las numerosas opciones de tratamiento, el pronóstico es limitado. 2 , 3 , 4 , 5 La mayoría de los actuales modelos de CRC de ratones se basan en la implantación de células tumorales derivadas de líneas celulares o tumores de pacientes en ratones inmunodeficientes. 6 , 7 , 8 Esto conduce a local y, dependiendo del sitio de inyección y de las células tumorales utilizadas para inyección, a veces tumores metastásicos. 9 , 10 Sin embargo, los modelos de xenoinjerto resultantes tienen majoR limitaciones. Deben establecerse en ratones inmunodeficientes, eliminando así la interacción compleja entre el tumor y el sistema inmune del huésped. Además, como el estroma tumoral se deriva de las células huésped, la interacción entre el parénquima tumoral humano y el estroma murino es defectuosa y por lo tanto no es representativa de la enfermedad. Estas deficiencias pueden evitarse mediante el uso de líneas de células murinas para inyección. Sin embargo, sólo hay pocas líneas de células de CRC murinas disponibles y, similares a la mayoría de las líneas de células CRC humanas disponibles, son monoclonales y altamente anaplásticas. En resumen, la mayoría de los modelos de ratón CRC actualmente disponibles son altamente artificiales y no son totalmente representativos de la enfermedad humana. Modelos de ratón genéticamente modificados (GEMM) de CRC pueden evitar estos inconvenientes, ya que presentan verdaderos tumores de ratón que se crean a través de la inducción de las principales mutaciones de CRC en el colon. 12 , 13 ,Esto puede lograrse mediante la activación de las mutaciones de la línea germinal condicional (floxed) por cre recombinasa dentro de la mucosa colorrectal. Mientras que en GEMMs de muchas otras entidades tumorales germline (inducible) cre expresión impulsada por promotores específicos de tejidos se utiliza, línea germinal cre no se puede utilizar en el colon, ya que esto conduce a un gran número de adenomas en todo el colon causando la muerte por tumor benigno carga a Una edad muy joven. Por lo tanto, en el modelo descrito aquí se utiliza un vector adenoviral que expresa cre para infectar un segmento de colon corto. Esto conduce a la inducción de la tumorigénesis dentro de este segmento de la mucosa en un punto de tiempo definido por el investigador, dando lugar a adenomas en última instancia, progresando a carcinoma invasivo y metastásico. Los tumores son verdaderos tumores de ratón, crecen en un microambiente intacto y por lo tanto son capaces de simular la totalidad de la oncogénesis colorrectal incluyendo la interacción tumor-huésped y la cascada metastásica. Este modelo esPor lo tanto, una plataforma atractiva para estudios de biología del cáncer y ensayos terapéuticos preclínicos. Una de las principales desventajas de los modelos de CRC modificados genéticamente es su complejidad técnica. Se ha descrito anteriormente la administración local de crema usando enemas de adeno-crema rectales en ratones que llevan alelos de Apc floxed; Sin embargo, la incidencia, multiplicidad y localización de los tumores intestinales puede ser altamente variable con esta técnica. Por lo tanto, se ha desarrollado la técnica de confinar la infección adeno-cre por pinzamiento quirúrgico del segmento a inducir. 13 Hemos modificado este procedimiento con el fin de mejorar el bienestar animal, así como reducir la mortalidad y el número de tumores resultantes. Con este protocolo, todos los laboratorios con experiencia en cirugía de roedores pequeños deben ser capaces de reproducir el modelo y producir tumores que sean altamente reproducibles y de fácil acceso a la colonoscopia. Dependiendo del condicional mUvas utilizadas para la tumorigénesis, se puede observar el espectro completo de adenoma, carcinoma invasivo y metástasis. Como los tumores se localizan en el colon distal, la evaluación endoscópica seriada es fácilmente posible en este modelo.

<table><tbody><tr><td><fuerte>Reactivos / consumibles</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%, fenol-rojo)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>solución salina normal 0,9% (E154)</td><td>Serumwerk Bernburg AG</td><td>10013</td><td></td></tr><tr><td>Aqua ad injectabilia</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>235144</td><td></td></tr><tr><td>Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL)</td><td>Vector de transferencia de genes Core Universidad de Iowa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL, 50 mL tubos de centrífuga</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>188271/227270</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Eppendorf 1,5 mL/ 2 mL</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>72.695.400</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri PS 100/15 mm (estéril, Nuclon)</td><td>Fisher Scientific GmbH</td><td>10508921/ NUNC150350</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 1 mL (sin volumen muerto) - Injekt-F SOLO</td><td>Braun/neoLab</td><td>194291661</td><td></td></tr><tr><td>aguja de inyección de 30G</td><td>BECTON DICKINSON</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Número de catálogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Analgesia / anestesia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie)</td><td>AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Medical</td><td></td></tr> <tr><td>oxygen</td><td>Air Liquide Medical</td><td></td> GmbH-Buprenorphine <td></td></tr><tr><td>(Temgesic)</td><td>Indivior Eu Ltd.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen - ungüento oftálmico</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>10047757</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de anestesia de investigación de mesa x/O2 Flush con vaporizador de sevoflurano</td><td>Parkland Scientific</td><td>V3000PS/PK</td><td></td></tr><<tr><td>strong>Name</td><td>Company</strong</td><td>>Número de catálogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td><Equipo quirúrgico fuerte></hisopos ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>celulosa</td> fuerte <td>Lohmann & Rauscher Deutschland</td><td>13356</td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de insulina EMG 1 mL (con cánula de 30 G)</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>9161627S</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de diámetro fino (diámetro: 0,28 mm/ diámetro: 0,61 mm)</td><td>Smiths Medical Deutschland</td><td>800/100/100</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Adson Pinzas</td><td>de ciencia fina Herramientas</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Tijera de iris - ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas Olsen-Hegar</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Kit</td><td>Fine Science Tools</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>PDS Z1012H 6/0 C1 (sutura quirúrgica)</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH</td><td>Z1012H</td><td></td></tr><tr><td>Abrazadera vascular Micro Serrefine curvada</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Clips de resorte Fogarty</td><td>Edwards</td><td>CDSAFE 6</td><td></td></tr><tr><td>Placa calefactora 062</td><td>Labotect</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>Isis - Afeitadora de pelo</td><td>Aesculap - Braun</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</ strong</td><td>>Número de catálogo</strong</td><td>>Comments</td></tr><tr><td>Colonoscopia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cold Light Fountain XENON 175 SCB Karl</td><td>Storz</td><td>20132101-1</td><td>Karl Storz Cable</td></tr> de luz de fibra óptica Mainz Cable de luz de <tr><td>fibra óptica</td><td>Karl Storz</td><td>69495NL</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM Cabezal de cámara de tres chips</td><td>Karl Storz</td><td>20221030</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM SLII Unidad de control de cámara</td><td>Karl Storz</td><td>20223011-1</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>Monitor de pantalla plana de 15" EndoVue</td><td>Karl Storz</td><td>9415NN</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz Mainz</td></tr><tr><td>Telescopio HOPKINS Straight Forward diámetro 1,9 mm; longitud 10 cm esterilizable en autoclave transmisión de luz de fibra óptica incorporada</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>funda de protección y examen</td><td>Karl Storz</td><td>61029C</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

A pesar de las ventajas de la fácil aplicabilidad y rentabilidad, los modelos de ratones de cáncer colorrectal basados ​​en la inyección de células tumorales tienen limitaciones severas y no simulan con precisión la biología tumoral y la diseminación de células tumorales. Se han introducido modelos de ratón genéticamente modificados para superar estas limitaciones; Sin embargo, tales modelos son técnicamente exigentes, especialmente en órganos grandes como el colon en el que sólo se desea un solo tumor. Como resultado, se desarrolló un modelo inmunocompetente, modificado genéticamente, de cáncer colorrectal que desarrolla tumores muy uniformes y puede usarse para estudios de biología tumoral así como para ensayos terapéuticos. El desarrollo tumoral se inicia mediante la infección quirúrgica segmentaria del colon distal con el virus adeno-cre en ratones mutantes condicionalmente compuestos. Los tumores pueden ser fácilmente detectados y monitorizados vía colonoscopia. Aquí describimos la técnica quirúrgica de la infección segmentaria adeno-cre deEl colon, la vigilancia del tumor vía colonoscopia de alta resolución y presentan los tumores colorrectales resultantes.

Si se realiza adecuadamente,&gt; 85% de los animales desarrollan tumores. La mortalidad del procedimiento quirúrgico aquí presentado es &lt;5%, la mortalidad de la colonoscopia es prácticamente inexistente. En la mayoría de los ratones, se detecta una sola lesión; En aproximadamente el 30% se pueden detectar 2 - 3 adenomas pequeños que usualmente se fusionan a un solo tumor dentro de 2 a 3 semanas después de la inducción del tumor. <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page...

Se presenta un protocolo para el establecimiento de un modelo genético de ratón de cáncer colorrectal por infección segmentaria de adenovirus y su vigilancia mediante colonoscopia de alta resolución.

Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

El objetivo general de este procedimiento es lograr una infección segmentaria por adeno-cre en el colon de un modelo de ratón genéticamente modificado. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer colorrectal, o CCR, ya que proporciona un excelente modelo para estudiar la biología y el tratamiento del CCR. La principal ventaja de esta técnica es que cualquier laboratorio con experiencia en cirugía de roedores pequeños puede utilizar este modelo para producir tumores altamente reproducibles y fácilmente accesibles localizados en el colon.Comience colocando un ratón anestesiado en posición supina y aplique ungüento en los ojos del animal. Sujete el ratón en una posición segura y luego confirme el nivel adecuado de sedación mediante una compresión en el dedo del pie. Realice una incisión media de aproximadamente 15 milímetros en la piel del abdomen inferior.Luego, utilice pinzas para sujetar la musculatura de la pared abdominal y haga una incisión cuidadosa en el músculo con tijeras para abrir la cavidad abdominal. Después de identificar el colon distal, sujete cuidadosamente el tejido con una pinza delicada aproximadamente 15 milímetros proximal al ano.

a-genetically-engineered-mouse-model-of-sporadic-colorectal-cancer

Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Dos técnicas se pueden utilizar para establecer este modelo: la inyección de una suspensión de células de cáncer en la pared del ciego o el trasplante de un trozo de tumor subcutáneo en el ciego. Este modelo es útil para el estudio de la evolución natural del cáncer colorrectal y ensayo de nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer colorrectal.

Modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

Se demuestra un protocolo en el que la administración del agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por tres ciclos de la sódico pro-inflamatoria agente sulfato de dextrano (DSS) rápida y consistente genera tumores de colon en ratones con similitudes morfológicas y moleculares a las que se observan en la colitis humana asociada a cáncer.

Modelado Colitis asociada a cáncer con azoximetano (AOM) y Sodio sulfato de dextrano (DSS)

Este video describe el protocolo para generar un modelo de ratón de cáncer colorrectal de xenoinjerto ortotópico derivado del paciente para estudiar la progresión de las células de cáncer colorrectal en ratones diabéticos/con inmunodeficiencia combinada grave (NOD/SCID) no obesos. Este modelo murino ayuda a comprender el crecimiento del tumor primario y el patrón de metástasis.

Generación de un modelo de ratón PDOX de cáncer colorrectal: estudio de la progresión del cáncer colorrectal en un modelo murino

Este video describe el protocolo para establecer un modelo de ratón de metástasis espontánea de xenoinjertos derivados de pacientes con cáncer colorrectal o PDX. Estos modelos de xenoinjertos imitan parcialmente las características de los carcinomas humanos y comprenden los aspectos críticos de las neoplasias malignas humanas, incluidas la invasión y la metástasis.

Modelos de ratón con metástasis espontánea: una plataforma para estudiar el potencial metastásico de las células de cáncer colorrectal inyectadas ortotópicamente

Este video describe la generación de un modelo de ratón colorrectal por infección segmentaria de adeno-cre. El segmento de colon infectado conduce a la tumorigénesis dentro de este segmento de la mucosa, lo que resulta en adenomas que finalmente progresan a carcinoma invasivo y metastásico. Este modelo es una plataforma atractiva para estudios de biología del cáncer y ensayos terapéuticos preclínicos.

Infección segmentaria por Adeno-Cre: una técnica para generar cáncer colorrectal aislado utilizando modelos de ratón modificados genéticamente

Describimos el establecimiento de tumores colorrectales ortotópicos mediante la inyección de células tumorales o organoides en el ciego de ratones y el subsiguiente aislamiento de células tumorales circulantes (CTC) de este modelo.

Aislamiento de células tumorales circulantes en un modelo de ratón ortotópico de cáncer colorrectal

El objetivo de este manuscrito es describir el modelo de ratón KitV558Δ/+ y las técnicas para la disección y el procesamiento exitosos de especímenes de ratón.

Técnicas moleculares e inmunológicas en un modelo de ratón genéticamente modificado de tumor del estroma gastrointestinal

Este protocolo describe la implantación ortotópica de células cancerosas derivadas del paciente en la pared del ciego de ratones inmunodeficientes. El modelo recapitula la enfermedad metastásica del cáncer colorrectal avanzado y permite la evaluación de nuevos fármacos terapéuticos en un escenario clínicamente relevante de metástasis pulmonares y hepáticas.

La implantación ortotópica de células cancerosas derivadas de pacientes en ratones recapitula el cáncer colorrectal avanzado

Este estudio se centra en la inducción subcutánea in vivo de células luminiscentes de cáncer colorrectal en un modelo murino y la posterior medición de la luminiscencia mediante un sistema de imagen. El procedimiento tiene como objetivo establecer un modelo de crecimiento tumoral reproducible para el seguimiento en tiempo real y la evaluación terapéutica.

Inyección subcutánea de células de cáncer colorrectal humano en ratones desnudos atímicos para evaluar la eficacia antitumoral

Aquí se presenta un procedimiento para implantar células de cáncer de páncreas que expresan proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotópicamente en el páncreas de ratones Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para evaluar la progresión tumoral y la metástasis.

Fluorescente modelo de ratón ortotópico de cáncer de páncreas

Aprenda a establecer un modelo de ratón de cáncer colorrectal mediante infección segmental adeno-cre. Este método permite monitorear tumores coloniales localizados con colonoscopia de alta resolución para investigaciones oncológicas reproducibles.

Un modelo de ratón de ingeniería genética de cáncer colorrectal esporádico

Explorar más videos