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Confocal Imaging of Neuropeptide Y-pHluorin: A Technique to Visualize Insulin Granule Exocytosis in Intact Murine and Human Islets

De neuropéptido Y-pHluorin de la proyección de imagen confocal: una técnica para visualizar la exocitosis de gránulos de insulina en islotes humanos y murinos intactos

Full Text
9,702 Views
09:41 min
September 13, 2017

DOI: 10.3791/56089-v

Madina Makhmutova1, Tao Liang2, Herbert Gaisano2, Alejandro Caicedo1, Joana Almaça1

1Department of Medicine,University of Miami, 2Department of Medicine,University of Toronto

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Se describe un protocolo para la visualización de exocitosis de la insulina en los islotes intactos usando pHluorin, una proteína verde fluorescente sensible al pH. Islotes aislados están infectados con adenovirus codificación pHluorin acoplado al carga vesícula del neuropéptido Y. Esto permite la detección de eventos de fusión de gránulos de insulina mediante microscopía confocal.

El objetivo general de este ensayo es visualizar la exocitosis de los gránulos de insulina en tiempo real en islotes pancreáticos intactos mediante microscopía confocal. Este método responderá preguntas clave en el campo de la diabetes. Por ejemplo, ¿qué regula la exocitosis de la insulina?

Esto es crítico porque la fusión de gránulos es el evento más importante en la vida de una célula mejor. La principal ventaja de esta técnica es que podemos utilizar islotes intactos, podemos ver eventos de fusión en las células dentro de su entorno nativo. Madina Mahkmutova, estudiante de doctorado de nuestro laboratorio, hará una demostración de la técnica.

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