Establecimiento de un imitador valiosa de la enfermedad de Alzheimer en modelo Animal de rata por la inyección Intracerebroventricular de proteína Beta amiloide compuesta

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de las enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer. La principal ventaja de esta técnica es que imita la enfermedad de Alzheimer en el modelo animal de rata mediante inyección intracerebroventricular de A-beta 25 a 35, combinada con tricloruro de aluminio y factor de crecimiento transformante humano recombinante beta uno. También proporciona un protocolo experimental rápido y relativamente simple con una alta tasa de supervivencia animal, una alta tasa de éxito del modelo, así como una alta tasa de duplicación, que ha demostrado ser más económica.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la eficacia del cribado del fármaco contra la EA, ya que este modelo animal posee alteraciones de la memoria y alteraciones neuronales cercanas a los estados de los pacientes con EA. La demostración del procedimiento estará a cargo de Cheng Jianjun, un técnico de mi laboratorio. En una rata anestesiada, comience cortando el pelaje del vértice de la cabeza con unas tijeras quirúrgicas y desinfecte con yodóforo.

A continuación, haga una incisión en la piel de la cabeza a lo largo de la pantorrilla longitudinal media con bisturíes quirúrgicos y tijeras. Separe el tejido subcutáneo y la fascia, limpie el cráneo del cráneo con peróxido de hidrógeno al 0,3% y marque el bregma con un rotulador. A continuación, marque tres puntos, el núcleo talámico anterodorsal para inyectar RHTGF beta uno y fijar un tornillo, el ventrículo lateral, o VI, área para inyectar A-beta 25-35 y AICI3, y por último el lugar de fijación del segundo tornillo.

Taladre suavemente tres orificios de un milímetro de diámetro con un taladro de hueso flexible en los tres puntos marcados en el cráneo. Detenga el sangrado y limpie la superficie del cráneo repetidamente con algodón seco estéril. A continuación, inserte una aguja conectada a la bomba de microinyección en el cerebro a 4,2 milímetros de profundidad e inyecte suavemente un microlitro RHTGF beta one en el área publicitaria.

Conserve la microinyección dos minutos después de la inyección. A continuación, sácalo lentamente. Fije los dos tornillos en el cráneo, designados en los puntos marcados anteriormente, con un destornillador pequeño.

Después de la colocación del tornillo, ensamble el sistema de implantación de la cánula insertando primero la cánula ficticia en la cánula guía después de la desinfección con inmersión en alcohol al 75% durante 24 horas. Luego, inserte la cánula guía de tubo de acero inoxidable en el cerebro a 4,6 milímetros en el área del VI a través del orificio del cráneo, con la ayuda de un soporte de cánula en el aparato estereotáxico de la rata. A continuación, mezcle el material base de la dentadura postiza con el agua de la base de la dentadura postiza en una proporción de 1,5 gramos por mililitro.

Coloque la pasta para cubrir el pedestal de plástico de la cánula guía y dos tornillos para inmovilizar la cánula guía. Cubra toda la incisión de la piel para evitar infecciones cutáneas. Al día siguiente, extraiga la cánula ficticia e inserte la cánula interna en la cánula guía.

Atornille el tornillo de fijación para inmovilizar la cánula interna. Ajuste el tubo de polietileno que conecta la bomba de microinyección a la cánula interna y regule la velocidad de inyección a un microlitro por minuto. Microinyecte el A-beta 25-35 en el VI. Espere cinco minutos después de finalizar la inyección y extraiga suavemente la cánula interna.

A continuación, vuelva a insertar la cánula ficticia en la cánula guía. El día 15 después de la cirugía, desmonte el sistema de implantación de la cánula retirando el material base de la dentadura sólida con tijeras quirúrgicas y pinzas y desinfectando la herida con yodóforo. Finalmente, rellene el orificio del cráneo con cemento óseo y suture la piel con un método simple de sutura interrumpida.

Comience ennegreciendo el agua de la piscina con un poco de colorante negro para alimentos. Mantenga la profundidad del agua a 31,5 centímetros y la temperatura a 23 más o menos un grado centígrado. A continuación, coloca una plataforma circular de plexiglás transparente de 1,5 centímetros por debajo de la superficie del agua.

A continuación, divida el grupo en cuatro cuadrantes iguales por líneas imaginarias para la recopilación de datos descriptivos. Coloque la plataforma oculta en el primer cuadrante, o Q uno, del laberinto de agua. Finalmente, capture los comportamientos de natación de las ratas a través de una cámara de video, sobre el laberinto de agua conectado a un software de análisis de gráficos basado en computadora.

Estos resultados indican que el grupo de ratas operadas simuladamente siempre nadaba libremente, mientras que las ratas del grupo tratadas con A-beta compuesto siempre nadaban alrededor del perímetro de la piscina en natación adaptativa en el laberinto acuático de Morris. Durante los cuatro días de cribado de ratas modelo con deterioro de la memoria, todas las ratas tuvieron tiempos progresivamente decrecientes para encontrar la plataforma oculta. Además, las latencias del grupo tratado con A-beta compuesto para encontrar la plataforma oculta fueron significativamente más largas que las del grupo operado simuladamente, lo que demuestra que el A-beta compuesto puede elevar el deterioro del reaprendizaje de la memoria en ratas.

En el ensayo de retención de memoria de un día, el grupo tratado con A-beta compuesto tomó menos tiempo de natación, distancia de natación y número de cruce en 60 segundos, en comparación con los del grupo operado simuladamente. Por último, además de los cambios patológicos, el número de neuronas también se redujo significativamente en el hipocampo y la corteza cerebral en el grupo tratado con A-beta compuesto en comparación con el grupo operado simuladamente. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 20 a 30 minutos si se realiza correctamente.

Al intentar este procedimiento, es importante recordar que debe evitar que la cánula guiada se caiga del tornillo cerebral. Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como la prueba del laberinto, para responder a preguntas adicionales, como si el modelo de AD imitado tuvo éxito. Tras su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la neurociencia exploraran las enfermedades neurodegenerativas in vivo.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo configurar modelos animales de EA imitadores exitosos a través de la inyección intracerebroventricular de A-beta 25 a 35 combinada con tricloruro de aluminio y factor de crecimiento transformante humano recombinante beta uno en ratas. No olvide que trabajar con polimetacrilato de metilo puede ser extremadamente peligroso, y siempre se deben tomar precauciones como el uso de máscaras y guantes mientras se realiza este procedimiento.