Name: Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen für Induktion der linken Ventricular Hypertrophie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Lernen Sie die minimal-invasive transversale Aortenkonstriktion bei Mäusen zur Induktion der linksventrikulären Hypertrophie. Diese Methode vereinfacht die Herzkrankheitsforschung erheblich.

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Diese Arbeit wurde unterstützt durch einen Zuschuss (Nr. 32016) der Herz-Kreislauf-Stiftung Schweiz, RT

männliche C57BL/6J Mäuse (10 Wochen, 25-30g, n = 60) werden in diesem Protokoll verwendet. Tiere erhalten humane Pflege im Einklang mit den Leitlinien formuliert durch das französische Ministerium der Landwirtschaft und der Hochschulbildung und Forschung, und alle Eingriffe gemäß Richtlinie des 24. November 1986 der Europäischen Gemeinschaft () 86/609/EWG) und die französischen Gesetze. Das Protokoll wurde genehmigt durch das &#34; regionalen Ethik-Kommission für Tier-Experimente-CREMEAS &#34; (#2016092816207606).
 1. Vorbereitung für die Operation <ol><li>pflegen die Mäuse für eine Woche nach Ankunft in der Tierstation auf einem 12h / 12h hell/dunkel-Zyklus Standardkäfige mit Lebensmitteln (für Details siehe Tabelle der Materialien) und Wasser zur Verfügung Anzeige Libitum.</li>
	<li>Am Tag der Operation, legen Sie die Mäuse in einzelnen Käfigen ein paar Minuten vor der Induktion der Anästhesie, um keinen zusätzlichen Stress für das Tier zu vermeiden. Alle chirurgischen Instrumente am Tag vor der Operation sterilisieren.</li>
	<li>Intra peritoneally eine einzelne Dosis von einer Mischung von Ketamin (51,4 mg/kg) und Xylazin (3,3 mg/kg) in Kochsalzlösung verdünnt zu injizieren (0,9 % NaCl).</li>
	<li>Stellen Sie sicher, die Tiefe der Narkose durch das Fehlen der Reflex-Zeh-Retreat.</li>
	<li>Hals und Brust des Tieres mit einem handelsüblichen Rasiermesser rasieren und desinfizieren Sie den rasierten Bereich mit 70 % Alkohol.</li>
	<li>Legen Sie das Tier Rückenlage auf einer sauberen Korken arbeiten und die Pfoten mit Klebeband fixieren.</li>
</ol> 2. Operation <ol><li>Sterile OP-Technik ist im gesamten Verfahren verwendet. In einer spontan atmenden Tier, führen einen longitudinale Mittellinie zervikalen Einschnitt über 10 mm mit einem 11-Klinge-Messer von supra sternalen Kerbe in der Mitte Brust um aussetzen des Brustbeins ( Abbildung 1).</li>
	<li>Die Schilddrüse durch die Übergabe einer 4/0 Monofile Polypropylen Aufenthalt Naht mit einem Crile-Wood Nadelhalter einfahren und kleben Sie es auf das Pad arbeiten.</li>
	<li>Trennen unverblümt die Pre trachealen Muskeln durch Mikro-chirurgische Pinzetten, die Luftröhre aufzudecken.</li>
	<li>Folie sanft die glatte Spitze gebogen mikrochirurgischen Pinzetten mit den geschlossenen Backen über die Luftröhre und hinter dem Brustbein.</li>
	<li>Durch vorsichtig öffnen und schließen die Backen der glatten Spitze gekrümmte mikrochirurgische Zange durchführen eine stumpfe Dissektion unter die Pre trachealen Muskeln und hinter dem Brustbein der Pleura wegziehen.</li>
	<li>Rechts supra clavicular Muskeln mit der glatt-Kreissägeblätter direkt Mikro-chirurgische Zange fassen und sanft die Brust des Tieres hochziehen.</li>
	<li>Schieben Sie den minderwertigen Kiefer Knochen Nipper unter dem Brustbein und führen eine 3-4 mm oberen teilweise Sternotomie ( Abbildung 2). Den unteren Teil des Mini-Sternotomie leicht nach links lenken.</li>
	<li>7/0 Monofile Polypropylen Aufenthalt Naht von innerhalb, außerhalb durchlaufen die zweite Intercostalneuralgie Platz auf jeder Seite des Mini-Sternotomie, Mikro-chirurgische Nadel Halterung befestigen. Übernachten in der Nähe von Costo sternale Winkel zur Vermeidung von Verletzungen, Intercostalneuralgie und interne thorakalen Gefäße oder Rippenfell.</li>
	<li>Der sternalen Kanten mit 7/0 Monofile Polypropylen Aufenthalt Nähte auf jeder Seite zu verbreiten und mit Klebeband an die Arbeit-Pad befestigen.</li>
	<li>Sanft beiseite bewegen Pre trachealen Muskeln, mediastinale Fett und Thymus mit glatten Spitze gebogen mikrochirurgische Zange um den Aortenbogen unter Niedrigstrom-Vergrößerung (2-3x) zu visualisieren ( Abbildung 3). Seien Sie besonders vorsichtig, nicht zu berühren oder beschädigen der parietalen Pleura um Pneumothorax Entwicklung zu verhindern.</li>
	<li>Setzen die Weichteile unter den Aortenbogen durch Zange ( Abb. 4 A) binden und sanft seinen Rachen zu verbreiten. Bereiten Sie einen Tunnel in das weiche Gewebe unter der Aortenbogen mit zweiten binden Zange durch sanft öffnen und Schließen der Kiefer in den Weichteilen.</li>
	<li>Pass ein Segment von 6/0 Seide Ligatur durch das Auge einer Ligatur Beihilfe ( Abbildung 4 B) hielt in der linken Hand unter dem Aortenbogen eingefädelt und durch binden Zange hielt in der rechten Hand zwischen dem Ursprung der abrufen die linken und rechts innominate gemeinsame Halsschlagadern ( Abbildung 5).</li>
	<li>27-Gauge-Nadel auf eine Länge von 5 mm geschnitten und stumpf beidseitig durch Drücken sie mit einem Crile Nadelhalter. Die abgestumpften 27-Gauge-Nadel neben dem Aortenbogen ( Abbildung 6) mit glatt-Kreissägeblätter direkt Mikro-chirurgische Pinzetten und binden Sie die Naht eng um die Nadel und der Aorta zwischen links und rechts innominate gemeinsame Halsschlagader Arterien mit zwei binden Pinzette ( Abbildung 7). Um die Naht fest zu binden, führen Sie eine erste Doppelknoten, gefolgt von vier zusätzliche Knoten. Stellen Sie sicher, dass alle Knoten flach sind.</li>
	<li>Nach Unterbindung, schnell aber vorsichtig zu entfernen, die Nadel um eine 0,4 mm Durchmesser Verengung zu erreichen und eine reproduzierbare quer 65-70 % Aortenstenose Verengung.</li>
	<li>Suchen Sie nach Blutstillung des Weichgewebes rund um den Aortenbogen, der sternalen Kanten und Pre-trachealen Muskeln. Platzieren Sie resorbierbare blutstillende Gaze Nässen Blut beobachtet wird. 7/0 Monofile Polypropylen bleiben Nahtmaterial verwendet für die Verbreitung der sternalen Kanten entfernen.</li>
	<li>Pass eine einfache 6/0 Monofile Polypropylen Naht mit einem Mikro-chirurgische Nadelhalter von außerhalb, innerhalb der linken zweiten Intercostalneuralgie Raum und dann von innen außerhalb der direkt zweite Intercostalneuralgie Raum. Übernachten in der Nähe von Costo sternale Winkel zur Vermeidung von Verletzungen, Intercostalneuralgie und interne thorakalen Gefäße oder Rippenfell.</li>
	<li>Zusammenbringen der sternalen Kanten durch das Binden von 6/0 Monofile Polypropylen Naht mit einem Crile-Wood Nadelhalter.</li>
	<li>Schließen die Haut mit einem 5/0 Monofile Polypropylen mit Naht in einer Schicht eine Crile-Wood Nadelhalter.</li>
	<li>Führen Sie die Schein identisch zu der Verengung Operation aber ohne eine Naht in der Aorta zu binden.</li>
</ol> 3. Postoperative Erholung <ol><li>die Tiere sehr genau beobachten. übertragen Sie die Maus in einen einzelnen Käfig und legen Sie es in Bauchlage.</li>
	<li>Erlauben die Maus wieder unter ein wärmendes Licht bis voll wach (weniger als 1 h nach Induktion der Anästhesie).</li>
	<li>0,1 mg/kg von Buprenorphin injizieren für postoperative Analgesie, intraperitoneal. subkutane Injektionen von 0,1 mg/kg von Buprenorphin alle 8 h für die ersten drei Tage wiederholen, wie angegeben.</li>
	<li>Legen die betriebenen Mäuse in Standardkäfige (maximal 3 Mäuse pro Käfig) und mindestens 2 Mäuse pro Käfig.</li>
</ol> 4. Herz-Ernte <ol><li>am Tag der Analyse einschläfern die Maus mit einer Lösung von Ketamin 300 mg/kg und Xylazin 20 mg/kg in Kochsalzlösung durch intraperitoneale Injektion.</li>
	<li>Zunächst das Blut von der minderwertigen Vena Cava zu ernten und dann durch die gleiche Linie spritzen 5 mL der Lösung von 2,6 mM EDTA in Kochsalzlösung.</li>
	<li>Herzen zu ernten, entfernen Sie die Vorhöfe und Gewicht das Herz (linker und rechter Ventrikel ohne Atrien).</li>
	<li>Links von der rechten Ventr trennenICLE mit dem Septum in den linken Ventrikel Teil übrig. Wiegen beide Gewebeproben und Einfrieren in flüssigem Stickstoff.</li>
</ol>

<ol><li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiac+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
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<li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice%3A+necropsy+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li>
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<li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).</li>
</ol>

Die Autoren haben keinen Interessenkonflikt, offen zu legen.

Das Ziel dieses Protokolls ist, eine schrittweise Darstellung der Operationstechnik für minimal-invasive quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen zu präsentieren. Ausführliche technische Beschreibung der transversalen Aortenstenose Verengung bei Mäusen wurde von anderen Autoren2,8berichtet. Aber diese Ermittler operieren nach Intubation und Beatmung von Tieren. Die Verwendung von einen zusätzlichen Schritt der Intubation Beatmung erhöht die Komplexität und die Dau...

In den letzten Jahren wurde die Studie an Herzversagen im durchgeführt lebensfähig Tiermodelle1. Im Vergleich zu großen Tiermodellen der Herzinsuffizienz, haben kleiner Tiermodelle zahlreiche potenzielle Vorteile. Neben niedrigeren Kosten für Gehäuse und Wartung sind kleiner Tiermodelle für mehr Forscher aufgrund der weniger komplexen Einrichtungen benötigt2zugänglich.
Herzinsuffizienz Mausmodellen bieten viele der gleichen Vorteile wie die Ratte-Modelle. Zusätzlich zu reduzierten Gehäuse kostet3, Maus-Modelle profitieren von der Verfügbarkeit der relevanten transgenen und Knockout (KO)-Stämme. Die Möglichkeit der Zelle typspezifische, induzierbaren KO oder transgene Strategien machen der Maus ein unschätzbares Werkzeug, die Pathogenese der Herzinsuffizienz zu studieren und zu versuchen, neue therapeutische Schemata3identifizieren.
Unter der Maus Modelle der Herzinsuffizienz verwendet derzeit4, quer Aortenstenose Verengung (TAC), erstmals von Rockman5 beschrieben wurde, ist das bevorzugte Modell erzeugen Druck Überlast-induzierte linken ventricular Hypertrophie (LVH)1 , 3. der größte Vorteil dieses Modells ist die Möglichkeit, die Schichtung der LVH2, obwohl ventrikuläre links Umbau in Reaktion auf TAC ist variabel zwischen verschiedenen Mausstämme. Insbesondere entwickeln C57BL/6 Mäusen schnelle LV-Dilatation nach TAC, die nicht mit anderen Stämmen4,6,7auftreten können.
Das plötzliche Auftreten von Bluthochdruck mit TAC Ursachen erreicht eine ca. 50 % Zunahme der LV Masse innerhalb von 2 Wochen, damit die Aktivität der pharmakologischen oder molekulare Interventionen mit dem Ziel modulieren die Entwicklung des LVH4rasch prüfen. Die akute Induktion von schwerer Hypertonie durch TAC ist nicht genau reproduzieren der progressiven linken ventricular Hypertrophie und Umbau in der klinischen Einstellung der Aortenstenose oder arterielle Hypertonie beobachtet. Dennoch ist dieses Modell von vielen Forschern verwendet, um zu identifizieren und neue therapeutische Targets in Herzinsuffizienz4ändern.
TAC in Mäusen die Durchführung erfordert größere chirurgische Kompetenz als erforderlich für andere Techniken verwendet, um LVH und anschließende Herzinsuffizienz2induzieren. Die meisten Autoren führen Sie diesen Vorgang durch Sondenschaft und Belüften der tierischen2,8, die macht dieses Verfahren mehr anspruchsvoll und zeitraubend und fügt die chirurgische Belastung für das Tier. Nur wenige Forscher haben in ihrer Studie mit kurzen Verweis auf den chirurgischen Eingriff9,10,11minimalinvasive TAC verwendet.
Ziel dieses Protokolls ist es, Schritt für Schritt beschreiben eine vereinfachte und benutzerfreundliche Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung in den Mäusen, Hervorhebung der kritischen Phasen des Verfahrens. Anhand dieser wichtigen Schritte kann man diese Technik leicht durchführen.

<table><tbody><tr><td>Operationsmikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZX2-TR30</td><td></td></tr><tr><td>Rasierer</td><td>Rowenta</td><td>Nomad TN3650FO</td><td></td></tr><tr><td>Nähte:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen 7/0</td><td>Ethicon</td><td>BV-1X</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen 6/0</td><td>BBraun</td><td>C0862061</td><td></td></tr><tr><td>Silk 6/0 Ligatur&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen 4/0</td><td>Ethicon</td><td>8683</td><td></td></tr><tr><td>Polypropylen 5/0</td><td>Ethicon</td><td>Z303</td><td></td></tr><tr><td>Medikamente:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Merial</td><td>Imalg&egrave; ne 1000, LBM154AD</td><td></td></tr><tr><td>Xylazin</td><td>Bayer</td><td>Rompun 2%, KP09PPC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphin</td><td>Ceva</td><td>Vetergesic, 072013</td><td></td></tr><tr><td>Instruments:&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Knochenzange Feine</td><td>chirurgische Werkzeuge</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>Ligatationshilfe</td><td>feine chirurgische Werkzeuge</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>Bindezange</td><td>feine chirurgische Instrumente</td><td>18026-10</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter Crile-Wood</td><td>feine chirurgische Werkzeuge</td><td>12003-15</td><td></td></tr><tr><td>Mikrochirurgische Zange &nbsp;</td><td>Feine chirurgische Werkzeuge</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>Zange für die Mikrochirurgie&nbsp;</td><td>Feine chirurgische Werkzeuge</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Gewebezange</td><td>Feine chirurgische Werkzeuge</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Nadelhalter für die Mikrochirurgie</td><td>Feinchirurgische Werkzeuge</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Mikrochirurgische Schere</td><td>Feine chirurgische Werkzeuge</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>Mayo-Schere</td><td>Feine chirurgische Werkzeuge</td><td>14511-15</td><td></td></tr><tr><td>Messer mit 11 Klingen</td><td>Fine Surgical Werkzeuge</td><td>10011-00<</td><td></td></tr><tr><td>strong>RNA-Extraktion und qPCR:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TriReagenz</td><td>Euromedex</td><td>TR-118-200</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Mini-Kit</td><td>Qiagen</td><td>74704</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorimetrischer RNA-Assay</td><td>Fisher Scientific</td><td>10034622</td><td></td></tr><tr><td>RNA 6000 Nano-Kit</td><td>Agilent</td><td>5067-1511</td><td></td></tr><tr><td>cDNA-Kit mit hoher Kapazität</td><td>Fisher Scientific</td><td>10400745</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Master Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>10157154</td><td></td></tr><tr><td>Taqman BNP-Primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255770_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ANP-Primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255747_g1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ACE Primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00802048_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Col1a1 Primer&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00801666_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman TGFb Primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01178820_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Gapdh Primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>ABIPrism&nbsp; Thermocycler</td><td>Applied Biosystems</td><td>7000</td><td></td></tr><tr><td>Software:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>Prism 7</td><td></td></tr><tr><td>TierfutterAlleinfuttermittel</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>für erwachsene Ratten/Mäuse</td><td>Sicher</td><td>UB220610R</td><td></td></tr></tbody></table>

technik der minimal-invasiven quer aortenstenose verengung bei mäusen für induktion der linken ventricular hypertrophie

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Transversale Aortenstenose Verengung (TAC) bei Mäusen ist eines der am häufigsten verwendeten chirurgischen Techniken für die experimentelle Untersuchung von Druck Überlast-induzierte Herzinsuffizienz linksventrikulären Hypertrophie (LVH) und seine Weiterentwicklung überlassen. In der Mehrzahl der gemeldeten Untersuchungen ist dieser Vorgang mit Intubation und Beatmung des Tieres das macht es anspruchsvoll und zeitraubend und fügt die chirurgische Belastung für das Tier. Das Ziel dieses Protokolls ist eine vereinfachte Technik der minimal-invasiven TAC ohne Intubation und Beatmung von Mäusen zu beschreiben. Wichtige Schritte der Technik werden betont, um geringe Mortalität und hohe Effizienz bei der Induktion von LVH zu erreichen.
Männlichen C57BL/6 Mäusen (10 Wochen alten, 25-30 g, n = 60) wurden mit einer einzigen intraperitoneale Injektion einer Mischung von Ketamin und Xylazin betäubt. Spontan atmen Tier nach einer 3-4 mm oberen teilweise Sternotomie, ein Segment von 6/0 Seide Naht durch das Auge einer Ligatur Beihilfe eingefädelt war unter den Aortenbogen übergeben und über einen abgestumpften 27-Gauge-Nadel gebunden. Sham-betrieben Tiere unterzog die gleiche OP-Vorbereitung, aber ohne Aortenstenose Verengung. Die Wirksamkeit des Verfahrens bei der Induktion von LVH ist durch eine signifikante Zunahme der Herz/Körper-Gewichts-Verhältnis bescheinigt. Dieses Verhältnis erhält man bei 3, 7, 14 und 28 Tage nach der Operation (n = 6-10 in jeder Gruppe und jedem Zeitpunkt). Mit unserer Technik wird LVH TAC im Vergleich zum Schein Tiere von Tag 7 bis Tag 28 beobachtet. Operative und späten (über 28 Tage) Todesfälle sind beide mit 1,7 % sehr gering.
Zusammenfassend unsere kostengünstige Technik der minimal-invasiven TAC bei Mäusen führt sehr geringe operative und postoperative Sterblichkeit und ist hoch effizient bei der Induktion von LVH. Das operative Vorgehen vereinfacht und reduziert die Belastung auf das Tier setzen. Es kann einfach durchgeführt werden, indem Sie kritische Schritte in diesem Protokoll beschrieben.

Operative und späten überleben Das operative überleben war sehr hoch, 98,3 % (59/60) für die gesamte Serie (TAC und Schein betrieben Tiere). Der nur operative Tod war durch eine Blutung Komplikation in einer Maus für Schein Betrieb geplant. Postoperative Überleben während des Beobachtungszeitraums von 28 Tagen war auch ausgezeichnet, von 98,3 % (58 von 59). Die nur späte postoperative Tod kam in eine TAC-Maus am Tag (D) 16, möglicherweise der kardialen Ursprungs.
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Ziel dieses Protokolls ist es, Schritt für Schritt beschreiben die Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung (TAC) bei Mäusen. Durch Beseitigung der Intubation und Belüftung sind obligatorisch für häufig verwendete Standardverfahren, minimal-invasive TAC das operative Vorgehen vereinfacht und reduziert die Belastung auf das Tier setzen.

Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen für Induktion der linken Ventricular Hypertrophie

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls besteht darin, eine minimalinvasive transversale Aortenkonstriktion bei Mäusen zu etablieren. Diese Methode kann helfen, zentrale Fragen zur Durchführung der transversalen Aortenkonstriktion bei Mäusen zu beantworten, beispielsweise wie ein Durchgang unter dem Aortenbogen angelegt wird. Die wichtigsten Vorteile dieser Technik sind ihre Einfachheit, Benutzerfreundlichkeit und die Tatsache, dass keine Intubation und Beatmung der Mäuse erforderlich ist.Ich werde das Verfahren gemeinsam mit unserer Postdoktorandin Simona Nemska demonstrieren, die die präoperative Tiervorbereitung und die postoperative Überwachung durchführen wird. Rasieren Sie am Tag des Eingriffs den Hals und die Brust eines anästhetisierten Mäuschen und desinfizieren Sie die freigelegte Haut mit 70 % Ethanol. Nachdem die angemessene Sedierungstiefe durch Zupressen der Zehen überprüft wurde, befestigen Sie das Tier in Rückenlage auf einer sauberen Korkunterlage.Verwenden Sie anschließend eine Klinge Nummer 11, um einen 10 Millimeter langen longitudinalen medianen Halschnitt von der Juguliskuhle bis zur Brustmitte vorzunehmen, um das Sternum freizulegen. Führen Sie mit einer Crile-Wood-Nadelhalterzange eine 4-0-Monofilament-Polypropylen-HalteNaht ein, um die Schilddrüse zu reponieren, und befestigen Sie die Naht mit Klebeband am Arbeitsfeld.Bewegen Sie dann die Arbeitsunterlage unter ein Operationsmikroskop und verwenden Sie mikrochirurgische Pinzetten, um die prätrachealen Muskeln stumpf zu trennen, um die Luftröhre freizulegen. Führen Sie die geschlossenen Spitzen eines Paars gebogener mikrochirurgischer Pinzetten vorsichtig über die Luftröhre und hinter das Sternum und öffnen und schließen Sie die gebogenen Pinzetten sorgfältig, um die Pleura stumpf zu dissezieren. Verwenden Sie die gerade mikrochirurgische Pinzette, um die rechten supraklavikulären Muskeln zu fassen, und ziehen Sie vorsichtig am Brustkorb nach oben.Indem Sie die untere Spitze der Knochenquetsche unter das Brustbein schieben, führen Sie eine drei bis vier Millimeter lange obere partielle Sternotomie durch, wobei Sie den unteren Teil der Mini-Sternotomie leicht nach links richten. Führen Sie mit einer mikrochirurgischen Nadelhalterin eine 7-0-Monofil-Polypropylen-HalteNaht von innen nach außen durch den zweiten Interkostalraum auf jeder Seite der Mini-Sternotomie. Verwenden Sie 7-0-Monofil-Polypropylen-HalteNähte, um die Brustbeinkanten auf jeder Seite auseinanderzuziehen.Verwenden Sie die gebogenen Pinzetten, um die prätrachealen Muskeln, das Mediastinalfett und den Thymus vorsichtig beiseitezuschieben, um die Aortenbogenunterseite unter geringer Vergrößerung sichtbar zu machen. Um das darunterliegende Weichgewebe freizulegen, führen Sie Bindenpinzetten mit geschlossenen Spitzen unter den Bogen ein und öffnen Sie die Pinzetten vorsichtig. Verwenden Sie eine zweite Bindepinzette, um durch vorsichtiges Öffnen und Schließen der Pinzette im Weichgewebe einen Tunnel unter dem Aortenbogen zu bilden.Führen Sie dann ein Stück 6-0-Seidenligatur, das durch das Auge eines Ligaturhilfsgeräts gefädelt ist, unter der Aortenbogen, wobei Sie eine Knotenzange verwenden, um die Naht zwischen dem Ursprung der rechten Arteria anonyma und der linken Arteria carotis communis herauszuholen. Der schwierigste Schritt des gesamten Verfahrens ist das Einführen der Naht unter den Aortenbogen. Wenn beim Erstellen des Tunnels unter dem Bogen ausreichende Sorgfalt angewandt wird, erleichtert dies die anschließende Nahtplatzierung.Verwenden Sie nun die gerade Pinzette, um eine abgestumpfte Nadel mit 27 Gauge neben dem Aortenbogen zu positionieren, und benutzen Sie die beiden Knotenpinzetten, um die Naht eng um die Nadel und die Aorta zwischen den rechten Arteria-innominata- und linken Arteria-carotis-communis-Asten zu legen. Sobald die Naht befestigt ist, entfernen Sie die Nadel schnell, aber vorsichtig, um eine Verengung mit einem Durchmesser von 0,4 Millimetern und eine reproduzierbare transversale Aortenstenose von 65 bis 70 % zu erzielen. Nach Bestätigung der Blutstillung entfernen Sie die 7-0-Monofil-Polypropylen-Haltefäden, die zum Auseinanderziehen der Sternausrandungen verwendet wurden.Verwenden Sie einen mikrochirurgischen Nadelhalter, um einen einfachen 6-0-monofilamentösen Polypropylennäht von außen nach innen durch den linken zweiten Interkostalraum und von innen nach außen durch den rechten zweiten Interkostalraum zu führen. Verwenden Sie den Crile-Wood-Nadelhalter, um die Brustbeinkanten mit einem 6-0-monofilamentösen Polypropylennäht zusammenzuziehen. Und verschließen Sie die Haut mit einem laufenden 5-0-monofilamentösen Polypropylennäht in einer Schicht unter Verwendung eines Crile-Wood-Nadelhalters.Bringen Sie das Tier dann in Rückenlage in seinen Käfig zurück und halten Sie es unter Wärme und Überwachung, bis es sich vollständig erholt hat. Die Wirksamkeit der Induktion einer linksventrikulären Hypertrophie kann überprüft werden, indem das Verhältnis von Herzgewicht zu Körpergewicht der Scheuertiere mit dem der Versuchstiere drei, sieben, 14 und 28 Tage nach der Operation verglichen wird. Das Verhältnis steigt bei den bandagierten Tieren im Vergleich zu den Scheuertieren ab dem siebten postoperativen Tag signifikant an und bleibt bei den konstriktierten Tieren bis zum 28. Tag nach der Operation signifikant erhöht.Der beobachtete Anstieg der Herz-Körper-Gewichts-Verhältnisse beruht ausschließlich auf einem Anstieg des linksventrikulären Körpergewichtsverhältnisses, da das rechtsventrikuläre Körpergewichtsverhältnis über den gesamten Beobachtungszeitraum hinweg zwischen den Tieren mit Quer-Aortenkonstriktion und den sham-operierten Tieren vergleichbar bleibt. Zusätzlich ist die mRNA-Expression des atrialen natriuretischen Peptids, ein positiver Kontrollmarker für kardiale Hypertrophie in den linken Ventrikeln, bei den Tieren mit Aortenband am Tag 14 signifikant höher im Vergleich zu den Kontrolltieren mit Scheinoperation, was die Effizienz der Methode weiter bestätigt. Sobald die Technik beherrscht ist, kann sie bei korrekter Durchführung in 20 Minuten abgeschlossen werden.Bei der Durchführung dieses Verfahrens ist es wichtig, ein Ligationshilfsmittel und Klemmzangen zu verwenden, die denen ähneln, die in unserem Protokoll verwendet werden. Nach ihrer Entwicklung lieferte diese Technik ein zuverlässiges und vereinfachtes Modell, um die Mechanismen zu untersuchen, die an der Entstehung einer durch Drucküberlastung induzierten linksventrikulären Hypertrophie beteiligt sind. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man eine minimalinvasive transversale Aortenkonstriktion bei Mäusen durchführt, wobei ein besonderer Schwerpunkt auf dem Durchtritt unter dem Aortenbogen liegt.Vergessen Sie nicht, dass das Erstellen des Durchgangs unter dem Aortenbogen der kritischste Schritt des Verfahrens ist und die Verwendung einer Ligaturhilfe sowie von Klemmzangen das Verletzungsrisiko für den Bogen erheblich verringert.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Medicine

Medizin

Quer Aorta Verengung (TAC) in der Maus ist eine häufig verwendete experimentelle Modell zugrunde liegenden Mechanismen der Herzhypertrophie und Herzinsuffizienz Entwicklung zu studieren. Hier beschreiben wir Verfahren zur Einengung der Aorta zu einem reproduzierbaren Grad der Herzhypertrophie in Mäusen zu erzeugen.

Quer Aorten-Verengung in Mäuse

In diesem Video demonstrieren wir ein experimentelles Protokoll für minimalinvasive transversale Aortenverengung bei Mäusen, um die durch Drucküberlastung induzierte Herzinsuffizienz zu untersuchen.

Transversale Aortenbogenbandbildung im Mausmodell: eine minimalinvasive Technik bei Mäusen zur Induktion von hohem Druck im linken Ventrikel

Wir beschreiben einen schrittweisen Verfahren zum Bilden von Drucklast und der linksventrikulären Hypertrophie in Wistar-Ratten durch Verengung der aufsteigenden Aorta unter Verwendung einer kleinen Metallclips. Dieses Modell wird weitgehend für das Studium Umbau Veränderungen während der Herzhypertrophie und zur Identifizierung und Bewertung von Strategien für die Regression von solchen Änderungen verwendet.

Aufsteigend Aortakonstriktion bei Ratten zur Erstellung von Drucküberlast Herzhypertrophie Modell

Ein hochgradig reproduzierbares Modell für Myokardinfarkt bei Mäusen mit minimalinvasiven Manipulationen wird beschrieben. Das Modell kann einfach durchgeführt werden, was zu einer hohen Reproduzierbarkeit und Überlebensrate führt. Somit wird das beschriebene Modell die Anzahl der benötigten Tiere reduzieren, wie es das 3R-Prinzip (Replacement, Refinement and Reduction) verlangt.

Minimal-invasive chirurgische Verfahren zur Induktion Myokardinfarkt in Mice

Das Ziel dieses Protokolls ist es, nicht-invasiven Herz strukturelle und funktionelle Veränderungen in einem Mausmodell der Herzkrankheit durch Quer Aortakonstriktion geschaffen beurteilen zu können, unter Verwendung von B- und M-Mode-Echokardiographie und Farbe / Puls-Doppler-Bildgebung.

Beurteilung der Herz Morphologische und funktionelle Veränderungen in Maus-Modell der Quer Aortakonstriktion durch Echokardiographie

Minimal-invasive Quer Aortakonstriktion (MTAC) schont das Wesentliche der regelmäßigen Quer Aortakonstriktion (TAC), während die Verwendung eines Ventilators mit Intubation zu beseitigen. Es erweist sich als ein höchst wünschenswertes Verfahren zur Hochdurchsatz-Untersuchungen an der linksventrikulären Überlastung, vor allem in der translationalen Studien zu sein.

Minimal Invasive Quer Aortakonstriktion bei Mäusen

Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll der transversalen Aortenstenose Verengung (TAC) über eine laterale Thorakotomie. Diese Technik ist ein minimal-invasive, geschlossenen Brust chirurgischer Eingriff mit dem Ziel, drucküberlastung und Herzinsuffizienz bei Mäusen unter Verwendung der Standardeinstellungen TAC-Labor zu simulieren.

Eine geschlossen Kasten Modell quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen zu induzieren

Hier bieten wir einen nützlichen Ansatz für die Untersuchung des Mechanismus des rechtsventrikulären Versagens. Ein bequemerer und effizienterer Ansatz zur Verengung der Lungenarterie wird mit chirurgischen Instrumenten aus dem eigenen Haus etabliert. Darüber hinaus werden Methoden zur Bewertung der Qualität dieses Ansatzes durch Echokardiographie und Katheterisierung bereitgestellt.

Induktion des rechtsventrikulären Versagens durch Lungenarterienverengung und Bewertung der rechten ventrikulären Funktion bei Mäusen

Hier beschreiben wir ein Schritt-für-Schritt-Protokoll der chirurgischen Aortendepaling im etablierten Mäusemodell der Aortenverengung. Dieses Verfahren ermöglicht es nicht nur, die Mechanismen zu untersuchen, die dem linksventrikulären Reverse Remodeling und der Regression von Hypertrophie zugrunde liegen, sondern auch neue therapeutische Optionen zu testen, die die Myokardregeneration beschleunigen könnten.

Untersuchung des linksventrikulären Reverse Remodeling durch Aortendefletieren bei Nagetieren

Dieses Protokoll stellt eine verbesserte Methode zur Erlangung einer transienten myokardischen Hypertrophie mit resorbierbarer Naht dar, die nach dem Entfernen der Drucküberlastung eine abnehmende linksventrikuläre Hypertrophie simuliert. Es könnte für die Studien über myokardische hypertrophe Vorbedingungen wertvoll sein.

Betrieb der transversalen Aortenverengung mit resorbierbarer Naht zur Erlangung einer transienten Myokardhypertrophie

Das vorliegende Protokoll beschreibt eine modifizierte und vereinfachte Technik mit einem minimal-invasiven Verfahren der transversalen Aortenverengung (TAC) unter Verwendung eines selbst hergestellten Retraktors. Dieses Verfahren kann ohne Beatmungsgerät oder Mikroskop durchgeführt werden und führt zu einer Drucküberlastung, die schließlich zu Herzhypertrophie oder Herzinsuffizienz führt.

Eine modifizierte Technik zur transversalen Aortenverengung bei Mäusen

Lernen Sie die minimal-invasive transversale Aortenkonstriktion bei Mäusen zur Induktion der linksventrikulären Hypertrophie. Diese Methode vereinfacht die Herzkrankheitsforschung erheblich.

Technik der minimal-invasiven quer Aortenstenose Verengung bei Mäusen für Induktion der linken Ventricular Hypertrophie

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