Posicionamiento adecuado y la contención de una rata de extremidades para la proyección de imagen enfocada de alta resolución del hueso utilizando la microarquitectura In Vivo Micro-tomografía computada

Este documento indica a los usuarios de escáneres de tomografía micro computada (µCT) en vivo cómo anestesiar, correctamente la posición y sujetar las extremidades de una rata para el mínimo movimiento durante la proyección de imagen de alta resolución de la tibia. El resultado es imágenes de alta calidad que pueden ser procesados para cuantificar con precisión la microarquitectura ósea.

El objetivo general de este procedimiento es posicionar y sujetar correctamente una extremidad trasera de rata para la adquisición de imágenes enfocadas de alta resolución de la microarquitectura ósea de la tibia proximal y el fémur distal mediante tomografía microcomputarizada in vivo. Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre la adquisición de imágenes in vivo por micro TC y proporciona orientación para el posicionamiento y la sujeción adecuados de la extremidad posterior. La principal ventaja de este procedimiento es que se pueden adquirir imágenes altamente consistentes y luego usarlas para cuantificar los cambios en la microarquitectura ósea que ocurren durante los estudios longitudinales.

Coloque a la rata en posición supina sobre una cama de escáner de fibra de carbono. Después de confirmar el nivel adecuado de sedación por falta de respuesta al pinzamiento de los dedos del pie, aplique lubricación oftálmica en los ojos del animal. Sujete el pie en un tubo de espuma maleable con los dedos que se extienden fuera de un extremo y aplique cera dental para sujetar el pie firmemente dentro de la espuma, teniendo cuidado de que la espuma no se extienda sobre la región de interés.

Selle herméticamente el tubo con cinta adhesiva e inserte la espuma en el tubo. Confirme un ajuste hermético entre la espuma y el tubo y deslice el tubo en el lecho del escáner de rayos X. Extiende la extremidad trasera hasta que la pata esté tensa.

Confirmando la falta de sobreextensión palpando la posición de la articulación de la rodilla y tirando de la extremidad trasera opuesta y la cola hacia el torso. Extender la extremidad trasera lejos del torso hasta que la pierna esté tensa asegura que la radiografía pase a través de todas las regiones del hueso en un patrón lo más similar posible. A continuación, seque el lado adhesivo de varios trozos de cinta adhesiva y utilice la cinta modificada para asegurar la extremidad trasera y la cola no extendidas, de modo que permanezcan fuera del campo de visión de escaneo.

A continuación, fije las caderas, los hombros, la cabeza y el cono de la nariz a la cama de exploración. Envuelva al animal en una envoltura veterinaria para limitar la pérdida de calor y obtenga imágenes del animal mediante microtomografía computarizada utilizando los parámetros experimentales apropiados de acuerdo con los protocolos estándar. Cuando se hayan obtenido todas las imágenes, permita que el animal se recupere en una jaula individual parcialmente calentada con monitoreo hasta que esté completamente recostado.

La posición adecuada de la extremidad trasera de la rata implica que la pata esté completamente extendida y que todo el pie y el tobillo estén sujetos con espuma, lo que da como resultado una imagen adquirida de calidad suficiente para el análisis de la microarquitectura trabecular y cortical. La colocación y restricción insuficientes de la extremidad posterior pueden dar lugar a imágenes con artefactos de movimiento, mientras que una cola que no se elimina completamente del campo de visión de exploración interferirá con la atenuación de los rayos X por las muestras de exploración y alterará las mediciones de la densidad mineral de la médula ósea y los tejidos. Una vez dominado, este procedimiento se puede realizar correctamente en 5-10 minutos.

Al realizar este procedimiento, es importante estar siempre consciente de la frecuencia respiratoria, el nivel de sedación y la cantidad de exposición a la radiación de la rata. Este procedimiento puede modificarse y utilizarse para evaluar otros sitios esqueléticos, como el fémur distal y las vértebras de la madera. Además, este procedimiento puede modificarse y utilizarse para otras especies de roedores como los ratones.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo posicionar y sujetar correctamente la extremidad trasera de la rata, para obtener imágenes enfocadas y consistentes de alta resolución de la microarquitectura ósea de la tibia proximal.