Name: Análisis de la marcha automática en ratones con lesión de la constricción crónica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Aprende a analizar la alodinia mecánica en ratones con lesión por constricción crónica mediante un sistema automatizado de análisis de marcha. Este método permite evaluar objetivamente la función sensorial y los parámetros locomotores en modelos de dolor neuropático.

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Esta investigación fue apoyada por Chungnam University, Corea Instituto Nacional de Medicina Oriental (KIOM) y una donación de Corea salud tecnología R &#38; D proyecto a través de la Corea salud industria desarrollo Institute (KHIDI), financiado por el Ministerio de salud &#38; Bienestar, República de Corea (número: HI15C0007).

todos los experimentos se llevaron a cabo con arreglo a las normas éticas de la Asociación Internacional para el estudio del dolor y fueron aprobados por el cuidado institucional de animales y uso en la Universidad Nacional de Chungnam ( Daejeon, Corea del Sur).
 1. inducción de CCI en nervio ciático <ol><li>casa ICR ratones machos pesa 20-25 g en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a temperatura ambiente controlada (mantenida a 20-25 ° C) y humedad (40-60%), con libre acceso a los alimentos y agua. Permite un periodo de aclimatación para los ratones en la sala de cuidado de los animales de al menos 1 semana antes de la cirugía.
	<ol><li>En vivienda, observar el aspecto y comportamiento de los ratones y no utilice ratones anormal actividad locomotor. 
		Nota: Un día antes de la cirugía de la CCI, medir la sensibilidad mecánica de la pata trasera mediante la aplicación de filamentos de von Frey y realizar el análisis de la marcha automática para obtener los valores de referencia normal. Luego, asignar ratones al azar a los grupos experimentales y control.</li>
	</ol></li> <li>En el día de la cirugía, anestesiar ratones inyectando 2,2,2-tribromoethanol (250 mg/kg, intraperitoneal (IP)). 
	Nota: Use equipo de protección personal como bata quirúrgica, guantes y mascarilla.
	<ol><li>Pesar 2,5 g de tribromoethanol 2,2,2 y añadir 2-metil-2-buthanol a volumen final de 5 mL. Mantener la solución lejos de la luz (por ejemplo, utilizar un envase oscuro o envuelva en papel).</li>
		<li>Reactivos de permitir disolver totalmente por calentamiento a 40 ° C y agitación durante 10-30 min.</li>
		<li>Agregar agua a volumen final de 200 mL de destilado y revuelva hasta que se mezcle bien.</li>
		<li>Almacenar las alícuotas a 4 º C y mantener en la oscuridad. Después de dos semanas, el anestésico debe reemplazarse con nuevas alícuotas.</li>
		<li>Inyectar un volumen de 20 μl por peso de 1 g. Por ejemplo, si el peso del cuerpo del ratón es 25 g, dan 500 μl de solución. La duración típica de esta anestesia es de 1 h. 
		Nota: Esta solución se convertirá en tóxica cuando se expone a la luz o calor, así que tenga cuidado para evitar la exposición a la luz y calor. Recomienda una vía de inyección IP.</li>
	</ol></li> <li>Cuando el raton cae en la anestesia profunda, coloque en la mesa de operaciones con el lado dorsal hacia arriba (es decir, prono) y esterilizar el área mediados de-muslo externo de la derecha con una torunda de alcohol al 70%. 
	Nota: Confirmar anestesia profunda, comprobando la falta de respuesta o estímulo en las patas traseras o la cola de presión.</li>
	<li>Inducir la CCI en el nervio ciático derecho del ratón.
	<ol><li>Hacer una incisión en la piel alrededor del área del mediados de-muslo de 1.0-1.5 cm de longitud con una hoja de bisturí.</li>
		<li>Sin rodeos, disecar los músculos del muslo con el micro mosquito pinza hemostática para exponer el nervio ciático.</li>
		<li>Ligar el nervio ciático expuesto 3 veces con intervalos de 1.0-1.5 mm mediante una sutura de catgut crómico 4-0. 
		Nota: Asegúrese de trompas sueltos por atar apagado el nervio ciático aparezca leve temblor en la pata trasera ipsolateral. El grupo sham de ratones recibió la misma abertura quirúrgica bajo condiciones similares excepto sin la ligadura del nervio.</li>
	</ol></li> <li>Cerrar la abertura quirúrgica con 3-4 suturas interrumpidas simples usando seda 5-0 y esterilizar con povidona yodada para la desinfección de la zona externa de la cirugía.</li>
	<li>Después de la cirugía, colocar el ratón en una jaula limpia en una almohadilla de calefacción. Cuando los animales se recuperen de la anestesia, devolverlos a su jaula casa. 
	Nota: En este estudio no se emplearon antibióticos. La CCI + GBP grupo IP gabapentina (GBP) a una dosis de 50 mg/kg una vez al día como control positivo.</li>
</ol> 2. Medición de la alodinia mecánica (prueba de von Frey) Nota: evaluar la frecuencia de la respuesta de retirada a los estímulos mecánicos utilizando 1 g de filamentos de von Frey a la superficie plantar de la pata trasera ipsolateral.
<ol><li>En cada día del examen, traer ratones a la sala de ensayo conductual y aclimatar los ratones en su propia jaula casa por al menos 30 min antes de la prueba. 
	Nota: Use equipo de protección personal como bata quirúrgica, guantes y máscara de.</li>
	<li>Poner el ratón en una caja de acrílico transparente en el piso de malla metálica y aclimatar el ratón durante 30 minutos</li>
	<li>Suavemente aplicar 1 g de filamentos de von Frey a la superficie plantar de la pata trasera hasta que el filamento dobla.</li>
	<li>Estimulación de filamento de aplicar a la Cierva ipsolateral de la pata 10 veces con intervalos por lo menos 10 de s y anote el resultado. 
	Nota: En este estudio, el número de respuestas de retirada pata de 10 estudios clínicos se muestra como porcentaje de la frecuencia de retirada de la pata (PWF, %). La prueba de von Frey se realizó cada dos días después de la cirugía CCI.</li>
</ol> 3. Realizar análisis automatizado de la marcha Nota: el sistema de análisis de marcha visualiza cada impresión de la pata mientras el animal está caminando y analiza automáticamente diversos parámetros de la marcha, tales como impresión de la pata pata de intensidad, la longitud de zancada, postura fase, secuencia de paso, oscilación, velocidad de swing, etc. en este estudio, mostramos que el área de impresión de la pata y solo postura después de convertir los datos en el porcentaje de cambio entre contralateral izquierda versus ipsolateral de la pata trasera derecha. Así, un resultado del 50% indica que el tamaño de la impresión de la pata y la duración de la zona de pata en contacto con el suelo, entre los lados izquierdo y derecho son los mismos. Además, valores más bajos de datos cercana al 0% indican que el tamaño y la duración del contacto están disminuidas en la pata trasera ipsolateral en comparación con el lado contralateral (ver panel B de la figura 2 y Figura 3).
<ol><li>Para aclimatación, mantener los ratones dentro del dispositivo de análisis de marcha durante 10 minutos una vez al día comenzando 5 días antes de la cirugía CCI. 
	Nota: Prueba de análisis de marcha incluyendo la aclimatación debe realizarse en la oscuridad.</li>
	<li>Traer los ratones a la sala de prueba para análisis de la marcha y aclimatar en su jaula casa por al menos 30 min antes de la prueba.
	<ol><li>En la ficha Configuración del menú del programa, establecer el &#34; longitud de calzada &#34; 30 cm, y set la &#34; maxima duración &#34; a 5 s y el &#34; máximo de funcionamiento variación &#34; al 50%.</li>
		<li>Seleccionar una cámara de registra de la &#39; configuración &#39; ficha de la &#39; programa &#39; menú.</li>
		<li>Seleccionar &#34; abrir la adquisición &#34; de la &#39; adquirir &#39; ficha de la &#39; programa &#39; menú.</li>
		<li>Tras el mensaje de estado, haga clic en el &#39; snap fondo &#39; botón para tomar una imagen de fondo de la pasarela de vacío (es decir, espacio en blanco).</li>
	</ol></li> <li>Haga clic en el &#39; iniciar adquisición &#39; botón y colocar un ratón en la pasarela; la grabación comienza automáticamente según el movimiento del ratón. 
	Nota: Cuando el ratón entra claramente a través de la pasarela, el programa automáticamente clasifica este movimiento como &#34; obediente ejecutar &#34; con un icono verde. Si el software no pudo detectar la huella, el experimentador verás un icono rojo y debe repetir la grabación. Al menos cinco carreras compatibles con éxito son necesarios para el análisis.</li>
	<li>Después de la prueba, seleccione &#39; clasificar ejecuta &#39; desde la ficha de adquisición de la &#39; programa &#39; menú.</li>
	<li>Seleccionar las pistas para análisis y haga clic en el &#39; auto clasificar &#39; botón. 
	Nota: Después de la clasificación, todos los parámetros de estadística se guardan automáticamente y el experimentador puede encontrar los resultados haciendo clic en &#34; vista ejecutar estadísticas &#34; en el menú analyze.</li>
</ol>

<ol><li>Loeser, J. D., Treede, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kyoto+protocol+of+IASP+Basic+Pain+Terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The Kyoto protocol of IASP Basic Pain Terminology.</a> Pain. 137 (3), 473-477 (2008).</li>
<li>Colloca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17002(2017).</li>
<li>Vranken, J. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20021340">Mechanisms and treatment of neuropathic pain.</a> Cent Nerv Syst Agents Med Chem. 9 (1), 71-78 (2009).</li>
<li>DeLeo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+neuropathic+pain+model%3A+sciatic+cryoneurolysis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of a neuropathic pain model: sciatic cryoneurolysis in the rat.</a> Pain. 56 (1), 9-16 (1994).</li>
<li>Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+segmental+spinal+nerve+ligation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat.</a> Pain. 50 (3), 355-363 (1992).</li>
<li>Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+behavioral+model+of+neuropathic+pain+disorders+produced+in+rats+by+partial+sciatic+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury.</a> Pain. 43 (2), 205-218 (1990).</li>
<li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33 (1), 87-107 (1988).</li>
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<li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+up-down+method+%28SUDO%29+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Mol Pain. 10, 26(2014).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Chen, H., Du, J., Zhang, Y., Barnes, K., Jia, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+Reliable+Gait+Evaluation+Method+for+Rodent+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a Reliable Gait Evaluation Method for Rodent Studies.</a> J Neurosci Methods. , (2017).</li>
<li>Kang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinociceptive+Profile+of+Levo-tetrahydropalmatine+in+Acute+and+Chronic+Pain+Mice+Models%3A+Role+of+spinal+sigma-1+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antinociceptive Profile of Levo-tetrahydropalmatine in Acute and Chronic Pain Mice Models: Role of spinal sigma-1 receptor.</a> Sci Rep. 6, 37850(2016).</li>
<li>Huehnchen, P., Boehmerle, W., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+paclitaxel+induced+sensory+polyneuropathy+with+%26%2334%3BCatwalk%26%2334%3B+automated+gait+analysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of paclitaxel induced sensory polyneuropathy with &#34;Catwalk&#34; automated gait analysis in mice.</a> PLoS One. 8 (10), e76772(2013).</li>
<li>Vrinten, D. H., Hamers, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27CatWalk%27+automated+quantitative+gait+analysis+as+a+novel+method+to+assess+mechanical+allodynia+in+the+rat%3B+a+comparison+with+von+Frey+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">'CatWalk' automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat; a comparison with von Frey testing.</a> Pain. 102 (1-2), 203-209 (2003).</li>
<li>Martinov, T., Mack, M., Sykes, A., Chatterjea, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+changes+in+tactile+sensitivity+in+the+hind+paw+of+mice+using+an+electronic+von+Frey+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring changes in tactile sensitivity in the hind paw of mice using an electronic von Frey apparatus.</a> J Vis Exp. (82), e51212(2013).</li>
<li>Ferland, C. E., Laverty, S., Beaudry, F., Vachon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gait+analysis+and+pain+response+of+two+rodent+models+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Gait analysis and pain response of two rodent models of osteoarthritis.</a> Pharmacol Biochem Behav. 97 (3), 603-610 (2011).</li>
<li>Mogil, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypolocomotion%2C+asymmetrically+directed+behaviors+%28licking%2C+lifting%2C+flinching%2C+and+shaking%29+and+dynamic+weight+bearing+%28gait%29+changes+are+not+measures+of+neuropathic+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">Hypolocomotion, asymmetrically directed behaviors (licking, lifting, flinching, and shaking) and dynamic weight bearing (gait) changes are not measures of neuropathic pain in mice.</a> Mol Pain. 6, 34(2010).</li>
<li>Ferreira-Gomes, J., Adaes, S., Castro-Lopes, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+movement-evoked+pain+in+osteoarthritis+by+the+knee-bend+and+CatWalk+tests%3A+a+clinically+relevant+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Assessment of movement-evoked pain in osteoarthritis by the knee-bend and CatWalk tests: a clinically relevant study.</a> J Pain. 9 (10), 945-954 (2008).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Actualmente, medición del allodynia mecánico mediante el uso de filamentos de von Frey es el más ampliamente utilizado método en modelos animales de dolor para demostrar hipersensibilidad táctil. Como modelos animales de dolor neuropático han seguido a desarrollar, la metodología de evaluación para la función sensorial ha sido también mejorada8,9,10,15. En esos informes, se ha sugerido que esta...

Los cambios patológicos del sistema nervioso inducidos por trauma, disfunción metabólica, inflamación, infección, isquemia, o enfermedad autoinmune ocasionalmente dar lugar a dolor neuropático, que se define como un dolor que se presenta como una consecuencia directa de una lesión o enfermedad que afectan el sistema somatosensorial1. El dolor neuropático es generalmente insoportable y por desgracia, analgésicos convencionales generalmente no producen suficiente de alivio de dolor2. Una característica importante del dolor neuropático contiene dolor espontáneo y evocado por el estímulo(, alodinia o hiperalgesia). Allodynia es una respuesta nociceptiva que se produce a estímulos normalmente no dolorosos, como toque de luz cálido estímulo. Hiperalgia indica una respuesta de mayor dolor a estímulos mecánicos o térmicos nocivos3. Aunque estos dos síntomas críticamente deterioran la calidad de vida de la paciente, alodinia mecánica evocada por la estimulación táctil suave es el síntoma más agravante porque contacto suave es difícil de evitar en la vida cotidiana.
Investigar el mecanismo subyacente y nuevos analgésicos para el tratamiento del dolor neuropático, la medida exacta de la respuesta al dolor es esencial. Se han desarrollado numerosos modelos animales de dolor neuropático las respuestas nociceptivas en el trasero de la pata área debido a su alta accesibilidad4,5,6,7. Así, se han realizado evaluaciones de respuesta de dolor más en la superficie plantar o dorsal de la pata trasera mediante la aplicación de estímulos mecánicos utilizando instrumentos especiales, como los filamentos de von Frey. Una el método más frecuentemente utilizado es el y por el método descrito por Dixon8 y más adelante modificado versiones9,10. Sin embargo, investigadores muy cualificados y con experiencia se requiere para realizar la prueba de von Frey y los resultados pueden ser subjetivos.
El sistema de análisis automatizado de la marcha puede investigar trastornos neurológicos y neuromusculares mediante la medición de diversos parámetros de caminar libremente mover roedores. En una gran variedad de modelos animales de lesión del nervio, pueden evaluarse el grado de nocicepción y el efecto antinociceptivo de varios tratamientos sin agregar un dolor estimulación11,12,13, 14. este sistema de análisis puede detectar parámetros de marcha estáticos y dinámicos, tales como: área de impresión (el área de la impresión completa de la pata que entra en contacto con el suelo) de la pata, pata de intensidad (intensidad media de la zona de pata contacto), (la longitud de la zancada postura de distancia entre colocaciones sucesivas de la misma pata), fase (la duración de contacto con el suelo de una sola pata trasera), secuencia de paso (el orden en que las cuatro patas se colocan en el piso), swing (la duración de la fase de oscilación) y velocidad (computado del oscilación de longitud de la zancada y duración de la oscilación expresada en píxeles por segundo). Este artículo muestra cómo utilizar un sistema de análisis y proporciona una breve comparación de los datos de la prueba de von Frey utilizando ratones neuropático de constricción crónica lesión (CCI).

<table><tbody><tr><td>0.9% Solución salina</td><td>JW Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td>Vehículo para medicamentos</td></tr><tr><td>Jeringa de 1 ml</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td>Dispositivo de inyección</td></tr><tr><td>2, 2, 2-tribromoetanol (97% de pureza)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>2-metil-2-butanol (99% de pureza)</td><td>Sigma</td><td>152463</td><td>Solvente para 2, 2, 2-tribromoetanol</td></tr><tr><td>Pasarela Sistema automatizado de análisis de la marcha</td><td>Noldus</td><td>N/A</td><td>Software de análisis automático de la marcha aniaml</td></tr><tr><td>Catgut crómico (4-0 grosor)</td><td>AILEE</td><td>C442</td><td>Ligadura para hacer una lesión crónica por constricción en el nervio ciático</td></tr><tr><td>Gabapentina</td><td>Sigma</td><td>Y0001280</td><td>Analgeisc, utilizado como fármaco de control positivo en este estudio</td></tr><tr><td>Pinzas de Graefe</td><td>F.S.T</td><td>11051-10</td><td></td></tr><tr><td>Almohadilla térmica</td> para instrumentos quirúrgicos<td>DAESHIN ELECTRONICS</td><td>M-303AT</td><td>Regulación de la temperatura corporal</td></tr><tr><td>ICR Ratón</td><td>Samtaco</td><td>N/A</td><td>Animal de experimentación</td></tr><tr><td>Mersilk (espesor 3-0)</td><td>ETHICON</td><td>W598H</td><td>Material de sutura para el cierre quirúrgico de la piel</td></tr><tr><td>Micro-Mosquito</td><td>F.S.T</td><td>13010-12</td><td>Instrumento quirúrgico</td></tr><tr><td>Microtijeras</td><td>F.S.T</td><td>14090-09</td><td>Quirúrgico instrumento</td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>F.S.T</td><td>12002-12</td><td>Instrumento quirúrgico</td></tr><tr><td>Povidona Yodada</td><td>Firson</td><td>N/A</td><td>Desinfectante para prevenir infecciones después de la cirugía</td></tr><tr><td>Hoja de bisturí</td><td>F.S.T</td><td>10010-00 (#10)</td><td>Instrumento quirúrgico para hacer una incisión</td></tr><tr><td>Mango de bisturí</td><td>F.S.T</td><td>10003-12 (#3)</td><td>Instrumento quirúrgico para hacer una incisión</td></tr><tr><td>Filamentos Von-Frey</td><td>North Coast</td><td>NC12775-99 Dispositivo de</td><td>medición para probar la función sensorial de la estimulación mecánica</td></tr></tbody></table>

análisis de la marcha automática en ratones con lesión de la constricción crónica

Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury

La prueba de von Frey es un método clásico que ha sido ampliamente utilizado para examinar la función sensorial de los animales de dolor neuropático. Sin embargo, tiene algunas desventajas como datos subjetivos y el requisito de un experimentador calificado y con experiencia. Hasta la fecha, una gran variedad de modificaciones han mejorado el método de von Frey, pero todavía tiene algunas limitaciones. Los informes recientes han sugerido que el análisis de la marcha producen datos más precisos y objetivos de los animales neuropáticos. Este protocolo muestra cómo realizar el análisis de la marcha automática para determinar el grado de dolor neuropático en ratones. Después de varios días de aclimatación, los ratones se les permitía caminar libremente en el piso de cristal para iluminar huellas. Entonces, la cuantificación de la huella y del paso fueron realizados a través de clips de vídeo con el análisis automático de diversos parámetros a pie, como área de impresión, oscilación tiempo pata, ángulo de pata, etc.
El objetivo principal de este estudio es describir la metodología de análisis de la marcha automática y brevemente compararla con los datos de la prueba sensorial clásica con filamentos de von Frey.

Hemos realizado la prueba de von Frey y automatizado de análisis de la marcha en ratones de la CCI hasta 10 días después de la cirugía de la CCI. Para el análisis estadístico, medidas repetidas de dos vías de análisis de varianza (ANOVA) determina los efectos generales, y se realizó análisis de post-hoc de Dunnett para determinar el valor de p entre los grupos experimentales.
Los resultados que se muestran en la <strong...

La evaluación precisa de la respuesta al dolor en un modelo animal neuropático es fundamental investigar la patofisiología del dolor enfermedades y desarrollar nuevos analgésicos. Presentamos un método sensible y objetivo para determinar la función sensorial del roedor hind de la pata por un sistema de análisis automatizado de la marcha.

Análisis de la marcha automática en ratones con lesión de la constricción crónica

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some ...

El objetivo general de este procedimiento es analizar la alodinia mecánica de ratones con una lesión crónica por constricción utilizando un sistema automatizado de análisis de la marcha. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la investigación del dolor al medir la función sensorial después de una lesión de nervios periféricos en roedores. La principal ventaja de esta técnica es que el sistema de análisis es rápido y fácil de usar y también puntúa automáticamente varios parámetros de la marcha.Para este estudio, aloje ratones machos ICR que pesen de 20 a 25 gramos en condiciones estándar durante al menos una semana. Selecciona a los ratones en función de su apariencia y comportamiento. No utilice ratones que presenten apariencias o comportamientos anormales, como pérdida de cabello, cicatrices y menos movimiento.Utilizando los ratones seleccionados, a partir de cinco días antes de la cirugía, recopile datos automatizados de la marcha a diario para tener una medición de referencia. Un día antes de la cirugía, realice la prueba de Von Frey con un filamento de un gramo en una pata trasera para obtener una respuesta basal. Equilibre las respuestas entre el grupo de lesiones y el grupo simulado.En cada día de prueba, lleve a los ratones a la sala de pruebas de comportamiento y aclimate a los ratones en su propia jaula doméstica durante al menos 30 minutos antes de la prueba. Cada dos días después de la cirugía, mida la alodinia mecánica con una prueba de Von Frey. Coloque el mouse en una caja acrílica transparente limpia sobre un piso de malla metálica y deje que se aclimate a la caja durante 30 minutos.A continuación, aplique suavemente un filamento Von Frey de un gramo en la superficie plantar de la pata trasera ipsilateral hasta que el filamento se doble. Repita este patrón de estimulación 10 veces observando si las patas se retiran. Espere al menos 10 segundos entre estimulaciones.Registre el número de retiros y puntúe su frecuencia para el análisis. Cada dos días, también realice la prueba de análisis de la marcha que debe hacerse en la oscuridad. Una vez más, aclimate a los ratones a la sala de pruebas en su jaula doméstica durante al menos 30 minutos.Para configurar el dispositivo de análisis de la marcha, vaya al control del software. En la pestaña de configuración, establezca la longitud de la pasarela en 30 centímetros, establezca la duración máxima de la carrera en cinco segundos y establezca la variación máxima de la carrera en 50%A continuación, seleccione una cámara registrada en la pestaña de configuración del menú del programa y luego seleccione abrir adquisición en la pestaña de adquisición. Después del mensaje de estado, haga clic en el botón de ajuste de fondo para tomar una foto de fondo de la pasarela vacía.Ahora coloque un mouse en la pasarela y deje que se aclimate al dispositivo durante 10 minutos. El aparato siempre debe lavarse con alcohol entre ratones. Una vez que el mouse se haya aclimatado al dispositivo, haga clic en el botón Iniciar adquisición.La grabación se inicia automáticamente según el movimiento del ratón. Cuando el ratón camina claramente por la pasarela, el programa clasificará automáticamente las carreras que cumplan con un icono verde. Si el software no detecta las huellas, se iluminará un icono rojo.Después de recopilar al menos cinco ejecuciones conformes, seleccione la opción clasificar ejecuciones en la pestaña Adquirir del menú del programa. Seleccione la ejecución que se debe analizar y haga clic en el botón de clasificación automática. Los resultados se guardan automáticamente.Para ver los resultados, haga clic en ver estadísticas de ejecución en el menú analizar. Se utilizó la prueba de Von Frey y el análisis automatizado de la marcha para evaluar a los ratones que se sometieron a la cirugía de ICC en 10 días consecutivos después de la operación. La frecuencia de retirada de la pata aumentó dos días después de la cirugía y se mantuvo durante 10 días.Este efecto podría reducirse significativamente con inyecciones postoperatorias diarias de gabapentina. Utilizando el software de análisis de la marcha, se pudo comparar el tamaño de las huellas de las patas traseras izquierda y derecha. Normalmente, las áreas son las mismas, lo que se indica con un valor del 50%.La cirugía de ICC tuvo un efecto significativo sobre la huella de la pata y ese efecto pudo reducirse significativamente con gabapentina. El software de análisis de la marcha también es capaz de detectar el cambio en la duración de la postura individual cuando el ratón soporta peso sobre una sola pata trasera. Esto se calcula y se muestra como un cambio porcentual.Esta métrica muestra el mismo efecto para la cirugía CCI y los tratamientos con gabapentina. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo operar y analizar los sistemas automatizados de análisis de la marcha para investigar la fisiopatología del dolor neuropático en modelos animales, como la lesión crónica por constricción.

automated-gait-analysis-in-mice-with-chronic-constriction-injury

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Análisis de la cinemática de la marcha en el plano sagital obtiene información muy precisa acerca de cómo se ejecuta el movimiento. Se describe la aplicación de estas técnicas para identificar los déficits de marcha para los ratones sometidos a desmielinización autoinmune mediada. Estos métodos pueden usarse para caracterizar los déficits de paso para otros modelos de ratón con locomoción deteriorada.

Análisis cinemático de la marcha de plano sagital en ratones C57BL/6 sometidos a MOG35-55 inducida por encefalomielitis Autoinmune Experimental

En este estudio, se demuestra el uso del análisis cinemático de la marcha en plano ventral de imágenes para monitorear los cambios sutiles en la coordinación motora, así como la progresión de la neurodegeneración con edad en modelos de ratón (por ejemplo, endophilin mutante avanzada base líneas de ratón).

Análisis de la marcha de deficiencias motoras dependientes de la edad en ratones con neurodegeneración

Aquí se presenta un protocolo para recopilar y analizar la cinemática tridimensional de la locomoción cuadrúpeda en roedores para estudios preclínicos.

Análisis de gait cinemático 3D para estudios preclínicos en roedores

El análisis de huellas es una alternativa de bajo costo a los programas de análisis de marcha digitalizados para investigadores que cuantifican las anomalías del movimiento en ratones. Debido a su velocidad, simplicidad y potencial longitudinal, es ideal para la fenotipado conductual de modelos de ratón.

Análisis de la gait de bajo costo para el fenotipado conductual de modelos de ratón de enfermedad neuromuscular

El análisis automatizado de la marcha es una herramienta factible para evaluar la recuperación funcional en modelos de roedores de lesión del nervio periférico y lesión por contusión de la médula espinal. Si bien sólo se requiere una configuración para evaluar la función locomotora en varios modelos experimentales, el ajuste meticuloso de software duro y suave y el entrenamiento de los animales es muy importante.

Análisis automatizado de gaita para evaluar la recuperación funcional en roedores con daño de contusión de nervio periférico o médula espinal

Proporcionamos un protocolo para la evaluación del comportamiento motor a través de una batería de prueba de comportamiento en ratas después de una lesión por aplastamiento del nervio ciático.

Evaluación Multifactorial Del Comportamiento Motor En Ratas Después De La Lesión Unilateral Por Aplastamiento Del Nervio Ciático

El presente protocolo describe el seguimiento/evaluación tridimensional del movimiento para representar la alteración del movimiento de la marcha de las ratas después de la exposición a un entorno de desuso simulado.

Comprensión integral de la alteración de la marcha inducida por la inactividad en roedores

Se proporciona una tubería experimental para describir cuantitativamente el patrón locomotor de ratones que caminan libremente utilizando la caja de herramientas MouseWalker (MW), que va desde grabaciones de video iniciales y seguimiento hasta análisis posteriores a la cuantificación. Se emplea un modelo de lesión por contusión de la médula espinal en ratones para demostrar la utilidad del sistema MW.

Uso del MouseWalker para cuantificar la disfunción locomotora en un modelo de ratón de lesión de la médula espinal

Este protocolo establece una cadena de evaluación cinemática de la extremidad posterior de rata utilizando una prueba de cinta sin marcadores con autoetiquetado de trayectorias multiarticular impulsado por aprendizaje profundo, que permite la cuantificación reproducible del movimiento.

Seguimiento síncrono multiarticular basado en aprendizaje profundo para la cuantificación objetiva de la cinemática locomotora de las extremidades posteriores en ratas

Hemos desarrollado un programa de computadora para analizar la morfología neuronal. En combinación con dos herramientas existentes de código abierto de análisis, nuestro programa realiza análisis de Sholl y determina el número de neuritas, los puntos de ramificación, y consejos de las neuritas. Los análisis se realizan para que los cambios locales en la morfología de las neuritas se puede observar.

Automatizado de Análisis de la morfología neuronal Sholl digitalizados en múltiples escalas

Aprende a analizar la alodinia mecánica en ratones con lesión por constricción crónica mediante un sistema automatizado de análisis de marcha. Este método permite evaluar objetivamente la función sensorial y los parámetros locomotores en modelos de dolor neuropático.

Análisis de la marcha automática en ratones con lesión de la constricción crónica

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