Método para el etiquetado de las transcripciones en los Escherichia coli las células para una sola molécula de la fluorescencia In Situ hibridación experimentos

El objetivo general de este protocolo es etiquetar transcripciones individuales en E. Coli para sondas de ADN marcadas con fluorescencia para su visualización en experimentos de FiSH de una sola molécula. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biología de sistemas, como la caracterización de las transcripciones de la capacidad célula a célula del campo de interés. Así como las transcripciones de la localización de la pared celular.

La principal ventaja de esta técnica es que proporciona cantidad de información sobre las estadísticas de los procesos transcripcionales. Para comenzar el protocolo, cultive E.Coli MG1655 en medio LB durante la noche en un agitador orbital, a 260 RPM y 37 grados Celsius. Al día siguiente, diluya el cultivo durante la noche a uno por 100 en medio fresco y mida su densidad óptica en un espectrofotómetro, hasta un valor de 0,2 a 0,4.