Utilizando el T-laberinto modificado para evaluar los resultados funcionales de la memoria después de un paro cardíaco

El objetivo general de este laberinto en T modificado es evaluar el aprendizaje funcional y la memoria después de la isquemia cerebral inducida por un paro cardíaco. Estos compañeros de equipo modificados pueden ayudar a responder a la función del hipocampo en enfermedades que causan déficits de memoria a corto plazo, como el paro cardíaco. La principal ventaja del laberinto T modificado es su diseño relativamente simple.

Eso es lo suficientemente potente como para medir la memoria de aprendizaje funcional después de la isquemia. Además, el análisis de datos es simple y directo. Dado que el paro cardíaco asfixiante provoca principalmente déficits de memoria a corto plazo, el laberinto en T modificado también se puede aplicar a otras enfermedades del sistema nervioso central, que causan déficits de memoria a corto plazo.

Como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson y el accidente isquémico transitorio. Después del cateterismo femoral, arterial y venoso, ajuste los parámetros fisiológicos según sea necesario modulando el volumen sistólico, el oxígeno o los niveles de óxido nitroso. A continuación, utilice una jeringa de un mililitro conectada con un adaptador de talón de señuelo de calibre 23 para administrar bromuro de vecuronio a través de la vena femoral y espere dos minutos.

Asegúrese de que la presión arterial esté en o alrededor de 100 milímetros de mercurio. Inducir la apnea durante seis minutos desconectando el tubo endotraqueal del ventilador. Bloquee aún más el tubo endotraqueal con una jeringa de un mililitro para asegurar una apnea completa.

Durante el último minuto de apnea, ajuste la frecuencia respiratoria del ventilador a 80 respiraciones por minuto y aumente el oxígeno a dos litros por minuto con cero por ciento de óxido nitroso para expulsar cualquier resto de isoflurano u óxido nitroso que quede en el ventilador. Después de los seis minutos de apnea, retire la jeringa de un mililitro del tubo endotraqueal. Vuelva a conectar el tubo endotraqueal al ventilador.

A continuación, use una jeringa de un mililitro conectada con un adaptador de talón de señuelo de calibre 23 para administrar epinefrina a través de la vena femoral. Administrar compresiones torácicas manuales con los dedos pulgar, índice y medio sobre el tórax de los animales, con ligeros movimientos circulares sobre los ejes X y Z, hasta el retorno de la circulación espontánea. A continuación, utilice otra jeringa de un mililitro conectada con un adaptador de talón de señuelo de calibre 23 para administrar bicarbonato de sodio a través de la vena femoral, inmediatamente después de volver a la circulación espontánea, para aliviar la acidosis respiratoria.

10 minutos después de la reanimación, vuelva a medir los gases en sangre para determinar el estado ácido-base. Use un hemostático para pinzar la arteria y la vena femoral. Retire lenta y suavemente los catéteres arteriales y venosos con pinzas de punta roma.

A continuación, legue la arteria y la vena femoral con una sutura de seda 5 O para evitar el sangrado. Cierre la piel que recubre el sitio quirúrgico con una sutura de seda 3 O utilizando la técnica de sutura interrumpida, para minimizar la posibilidad de reapertura de la herida. Después de que la rata comience a respirar por sí sola, de 30 a 60 minutos después de la reanimación, desconéctela del ventilador y retire suavemente el tubo endotraqueal.

Coloque a la rata en la incubadora para bebés durante la noche. Finalmente, transfiera la rata a la jaula individual y devuélvala a la instalación de animales con comida regular y agua. El día antes de la cirugía, manipule cada rata durante cinco minutos y nunca eleve la rata de la jaula cuando la manipule.

Luego levántalo suavemente por la cola con una mano, mientras la otra mano sostiene sus patas, y déjalo saltar de la mano a la jaula cinco veces. Separe cada rata en jaulas individuales para que no dominen por comida o peleen. Luego, tres días después de la cirugía simulada o ACA, transfiera a la rata con la jaula a una habitación tranquila y oscura antes del comienzo de la primera carrera.

Solo encienda una lámpara de escritorio de baja potencia y colóquela en la esquina de la sala de pruebas para mantener una iluminación mínima. Deja que la rata se adapte a la oscuridad durante 10 minutos. A continuación, extiende una fina capa de ropa de cama para cubrir todo el suelo del laberinto y coloca a la rata en el brazo de inicio.

Permita que cada rata explore el brazo de la portería derecha o izquierda. Después de que la rata se comprometa con uno de los brazos de la portería, cuando las cuatro patas de la rata hayan entrado en el brazo de la portería, bloquee la unión en T entre el brazo de inicio y el brazo de la portería opuesta para evitar que la rata entre en el brazo de la portería opuesta. Deja a la rata en el laberinto durante 30 segundos.

Luego levanta la rata y colócala de nuevo en su jaula durante aproximadamente 30 segundos. A continuación, retire el bloque de unión en T del laberinto en T. Vuelva a colocar la rata en el brazo inicial y repita la prueba para determinar la alternancia espontánea.

Haga que las ratas realicen cuatro carreras por día con un descanso de 10 minutos después de las dos primeras carreras. Finalmente, cambie la ropa de cama durante el descanso de 10 minutos y entre animales para eliminar el sesgo olfativo. Limpie el laberinto en T con etanol al 75% seguido de agua destilada al final de cada día experimental.

Los resultados de la prueba de alternancia espontánea sugieren que la tasa de alternancia de tres días consecutivos en el grupo ACA fue significativamente menor en comparación con el grupo control. Esto se debe al hecho de que las ratas sometidas a ACA desarrollaron un aumento en la preferencia lateral en comparación con los controles. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo utilizar este laberinto en T modificado para evaluar el déficit de memoria a corto plazo después de la isquemia cerebral en un roedor.

Al intentar este laberinto en T modificado, es importante bloquear suavemente el brazo opuesto después de que la rata ingrese a uno de los brazos de la portería. Además, el laberinto en T debe realizarse en una habitación oscura con una iluminación mínima, lo que reduce la ansiedad de las ratas.