Técnicas quirúrgicas para la colocación del catéter y nefrectomía 5/6 en modelos murinos de Diálisis Peritoneal

Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la diálisis peritoneal sobre las alteraciones peritoneales o sistémicas en respuesta a la exposición a líquidos, ya sea en condiciones urémicas o no urémicas. Las principales ventajas de esta técnica son que se pueden inyectar grandes cantidades de líquido por vía intraperitoneal durante un largo periodo de tratamiento y que permite el uso de animales modificados genéticamente. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia y el diagnóstico del deterioro peritoneal estructural y funcional, ya que facilita la realización de pruebas terapéuticas estratégicas potenciales y la evaluación de biomarcadores.

La primera vez que tuvimos la idea de este método fue cuando anticipamos la necesidad de utilizar ratones modificados genéticamente para iniciar las señales moleculares implicadas en el daño peritoneal. Para la colocación del catéter, después de afeitar los flancos y la espalda derecha de cada animal, confirme la falta de respuesta al pellizco de los dedos del pie y aplique ungüento en los ojos del animal. A continuación, coloque el primer animal en su flanco izquierdo sobre la mesa quirúrgica y desinfecte la piel expuesta con una solución de gluconato de clorhexidina al 1%.

Usa unas tijeras romas para hacer una incisión de 0,5 centímetros en la piel en el flanco derecho del cuerpo. Luego, separe cuidadosamente la piel de la capa muscular adyacente hasta que la piel que cubre todo el lomo del animal esté bien separada. Haga una incisión de un milímetro de diámetro en la capa muscular a través de la incisión en la piel e inserte la punta del catéter y el primer anillo de plástico en la incisión muscular.

Suturar la pared peritoneal firmemente alrededor del catéter con la sutura no absorbible 5-0 o 6-0, con un anillo de plástico dentro de la cavidad peritoneal y el otro entre el músculo y la piel. Las suturas deben prepararse antes de realizar la incisión y el músculo no debe soltarse hasta que se inserte el catéter. De lo contrario, dado que la incisión es muy pequeña, podría ser difícil volver a encontrarla.

Inserte el puerto de acceso en el espacio subcutáneo hacia la cola del ratón y cierre la herida con una segunda sutura. Luego, regrese al animal a su jaula después de la decúbito esternal completo. De cuatro a siete días después, para iniciar el tratamiento de diálisis peritoneal, primero cargue una jeringa con dos mililitros de líquido de diálisis peritoneal y desinfecte la piel que rodea el puerto con una solución de gluconato de clorhexidina al 1%.

Luego use una mano para sujetar al animal por la cola y el puerto de acceso, e inyecte el líquido en el puerto con la otra mano usando una aguja biselada. Para una nefrectomía 5/6 y la colocación de catéter, después de preparar a los animales para la cirugía, como se ha demostrado, haga una incisión de 0,5 centímetros en la piel del animal cerca de la parte inferior de las costillas. Abrir una pequeña incisión en el músculo para extraer el riñón izquierdo del peritoneo y extraer la cápsula y la glándula suprarrenal.

Use un cauterizador para quemar y cortar las extremidades del riñón y devolver el riñón a la cavidad peritoneal. A continuación, cierre el músculo y las heridas cutáneas con suturas insolubles 5-0 o 6-0 y devuelva al animal a su jaula cuando se haya recuperado por completo. Al día siguiente, haga una incisión de 0,5 centímetros en la piel del lado derecho del animal y separe la piel de la parte posterior del animal del músculo, como se ha demostrado.

Haga una incisión de 0,3 a 0,4 centímetros en el músculo y extraiga el riñón derecho de la cavidad peritoneal. Retire la cápsula y la glándula suprarrenal y use una sutura 5-0 o 6-0 no absorbible para ligar la vena renal, la arteria y el uréter. Ahora retire el riñón por completo e inserte el catéter de manera que el músculo se mantenga entre los dos anillos de plástico, como se ha demostrado, antes de cerrar la herida muscular.

Introducir el puerto de acceso en el espacio subcutáneo y cerrar la piel, tal y como se ha demostrado. A continuación, devuelva el animal a su jaula con supervisión hasta que se recupere por completo, y permita que el animal se recupere durante al menos 10 días antes de administrar el líquido hiperosmótico, como se ha demostrado. Los tejidos peritoneales periales de ratón obtenidos de la zona más distante del catéter, muestran un aumento del grosor y del reclutamiento celular durante la diálisis que se agrava aún más en los animales nefrectomís.

Las células epiteliales del timo también exhiben una morfología alterada debido a la degradación de la unión intercelular inducida por la diálisis peritoneal. Las muestras de suero de ratones nefrectomínicos indican que una nefrectomía 5/6 induce un estado urémico, aumentando los niveles de nitrógeno ureico durante el transcurso del experimento, en comparación con la línea de base. Además, cuando los riñones son completamente funcionales, los niveles de nitrógeno ureico permanecen similares al estado basal, incluso en ratones expuestos al líquido de diálisis peritoneal.

Estas técnicas se pueden completar en cinco a siete minutos. Sin nefrectomía, de 15 a 20 minutos. Para la cauterización del riñón izquierdo, de 20 a 25 minutos.

Para la extracción del riñón derecho y la colocación del catéter, si su metodología se realiza correctamente. Tras su desarrollo, esta técnica abrió el camino para que los investigadores en el campo de la diálisis peritoneal exploraran opciones terapéuticas para la preservación peritoneal en pacientes renales sometidos a tratamiento de diálisis peritoneal.