Un ensayo de Blot punto cuantitativo para valoración de AAV y su uso para la evaluación funcional de la Asamblea del Virus Adeno-asociado-activar proteínas

Este método puede determinar tanto los títulos de vacío AV purificados como los no purificados y evaluar la capacidad del AAV AAP para promover el ensamblaje de serotipos-capsis AV afines y heterólogos. La principal ventaja de esta técnica es que es un método sencillo y económico que evita los inconvenientes de otros métodos de valoración de AAV. Aunque este método se ha utilizado comúnmente para la cuantificación del vector AAV, también se puede aplicar para abordar varias preguntas fundamentales sobre la biología de AAV, como se muestra en este protocolo.

En el día cero, después de cultivar células HEK 293 hasta un 90% de confluencia, prepare el reactivo de transfección mezclando los plásmidos en 96 microlitros de PBS sin calcio ni magnesio en tubos de microcentrífuga estériles de 1,5 mililitros. Como se indica en esta tabla, la cantidad total de ADN es de dos microgramos por pocillo. Agregue cuatro microlitros de solución de PEI a la mezcla de ADN plasmídico PBS.