Name: Evaluación de lactato de sangre y Plasma insulina durante el ejercicio de alta intensidad por cateterización de la vena Antecubital (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: Aprende a obtener muestras sanguíneas de la vena antecubital durante ejercicio de alta intensidad en cicloergómetro. Este protocolo permite evaluar dinámicas hormonales y metabólicas en tiempo real.

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Los autores desean reconocer el Dr. P. Karagiannis para leer el periódico y profesor T. Hoyo por su apoyo técnico.

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el Comité de ética local (Comité de ética de la Universidad de Doshisha: 15033) y en estricta conformidad con las normas establecidas por la declaración de Helsinki. Se obtuvo consentimiento informado de todos los participantes. Los participantes fueron los atletas recreativos masculinos (edad, 20,1 ± 1,2 años; peso 69,7 ± 6,2 kg; altura, 176.1 ± 5,8 cm; cuerpo grasa 13.6 ± 1,5% y VO2max, 52,6 ± 6,6 mL/min1/kg1).
1. establecimiento del Protocolo de ejercicio
Nota: El presente estudio consistió en la evaluación de sangre hormonal y dinámica de metabolitos por la muestra de sangre de la vena antecubital durante un protocolo HIIE.
<ol><li>Pedir el tema para llevar a cabo un cálido hasta con 5 min de bicicleta ergométrica a baja intensidad. Después del calentamiento, permita que el tema reposar 5 minutos.</li>
	<li>Pedir el tema para realizar la siguiente HIIE en el ergómetro del ciclo de pierna: tres peleas de ejercicio de alta intensidad 30 s separados por 4 minutos de descanso (figura 1). Nota: Los 30 combates de s deben establecerse en una intensidad igual al 90% el promedio de potencia de un test de Wingate previamente realizado. Consulte en otra parte8 para obtener una descripción completa de la prueba de Wingate.</li>
	<li>Para calcular la carga de trabajo de los 30 combates de s, utilice las siguientes ecuaciones: Trabajo = fuerza x distancia (ecuación 1) Fuerza = masa x aceleración (ecuación 2) Trabajo = (masa x aceleración) x distancia (ecuación 3) Nota: En este modelo, la masa es la carga de trabajo (kg), y la aceleración es de 9.81 m/s2. La distancia es el diámetro de la rueda (1,622 m). Porque la rueda gira 3.7 rotación de /peal tiempo, la distancia por rotación pedal es de 3.7 x 1.662. Además, debido a la frecuencia de pedaleo es 90 rev/min1, tenemos que multiplicar una distancia pedal por 90. Trabajo = carga de trabajo x 9.81 x 3.7 x 1.622 x 90 (ecuación 4) Carga de trabajo = trabajo / (9.81 x 3.7 x 1.622 x 90) (ecuación 5)</li>
</ol>2. la cateterización
Nota: Los tubos y vacutainers debe etiquetarse antes para no perder tiempo.
<ol><li>Envuelva un torniquete en el brazo elegido para la cateterización. Para ello, coloque una banda elástica en la parte posterior del brazo elegido. Estiramiento de la banda, hacer un lazo con la banda alrededor del brazo y atar el elástico.</li>
	<li>Seleccionar la vena antecubital visible y esteriliza la piel con alcohol o etanol.</li>
	<li>Inserte la punta de la cánula esterilizada en la vena en un ángulo aproximado de 15° con la piel. Nota: La cánula debe insertarse desde proximal hacia distal. Si la canulación es exitosa, se debe observar una masa de sangre.</li>
	<li>Fijar la cánula con la mano y retirar la aguja suavemente. Nota: Para mantener el ángulo de la aguja durante el ejercicio, los tejidos de algodón pueden utilizarse entre la piel y la aguja. Fijar esta estructura con una cinta.</li>
	<li>Conectar un vacutainer con heparina y aspirado para la primera muestra de sangre (aproximadamente 2,5 mL). Inmediatamente después, refrigerar la muestra de sangre poniendo en una caja de hielo para no más de 40 minutos. Pida a un asistente para ayuda, si gases de sangre van a ser analizados.</li>
	<li>Conecte un tubo al catéter e inyectar heparina para toda la longitud del tubo para evitar la coagulación de la sangre. Cerca de la mariposa.</li>
	<li>Con cinta, estabilizar el catéter. Asegúrese de que en este momento, la movilidad del brazo del sujeto no interfiera con la colección de sangre. Para confirmar esta condición, asegúrese de que la posición de la aguja no se ve afectada por cualquier movimiento.</li>
</ol>3. muestreos de sangre
<ol><li>Retirar la heparina utilizando un vacutainer hasta hay sólo sangre en el catéter. Cuando se observa el retroceso de sangre, recoger la muestra como se describe en el paso 2.5.</li>
	<li>Después de la recolección de muestra, inyectar heparina otra vez en el tubo del catéter para evitar la coagulación de la sangre. Después de esta acción, se puede repetir paso 2.5 para colección de muestras varias.</li>
	<li>Después se recoge la última muestra, con cuidado retire el tubo de la canalización y limpiar la piel con alcohol. Para evitar el posible sangrado, pedir el tema para mantener el algodón esterilizado en el lugar donde se realizó el cateterismo.</li>
	<li>Después se recoge la sangre en los tubos vacutainer, con cuidado pasa aproximadamente 1,5 mL de sangre a un tubo de 1,5 mL y mantener los tubos en hielo.</li>
	<li>Medida sangre lactato de la sangre restante con detección de lactato. El mismo día, obtener el plasma de las muestras de sangre (alrededor de 1,5 mL de sangre).</li>
	<li>Para la separación del plasma, centrifugar las muestras de sangre durante 5 minutos a 5000 x g a 4 oC y separar el sobrenadante en un tubo nuevo de 1,5 mL.</li>
	<li>Repetir la centrifugación una vez más para purificar el plasma.</li>
	<li>Después de la separación del plasma, almacenar las muestras a-80 oC hasta el análisis de la hormona.</li>
	<li>Medir la insulina del plasma usando un kit de ELISA como por el fabricante de protocolo (véase Tabla de materiales).</li>
</ol>

<ol><li>Wahl, P., Mathes, S., Köhler, K., Achtzehn, S., Bloch, W., Mester, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+active+vs.+passive+recovery+during+Wingate-based+training+on+the+acute+hormonal%2C+metabolic+and+psychological+response%5BTitle%5D)+AND+%22Growth+Horm+IGF+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of active vs. passive recovery during Wingate-based training on the acute hormonal, metabolic and psychological response.</a> Growth Horm IGF Res. 23 (6), 201-208 (2013).</li>
<li>Wahl, P., Mathes, S., Achtzehn, S., Bloch, W., Mester, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+vs.+passive+recovery+during+high-intensity+training+influences+hormonal+response%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Active vs. passive recovery during high-intensity training influences hormonal response.</a> Int J Sports Med. 35 (7), 583-589 (2014).</li>
<li>Nalbandian, H. M., Radak, Z., Takeda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+active+recovery+during+interval+training+on+plasma+catecholamines+and+insulin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sports+Med+Phys+Fitness%22%5BJournal%5D)">Effects of active recovery during interval training on plasma catecholamines and insulin.</a> J Sports Med Phys Fitness. , (2017).</li>
<li>Stolen, T., Chamari, K., Castagna, C., Wislff, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+Soccer%5BTitle%5D)+AND+%22Sport+Med%22%5BJournal%5D)">Physiology of Soccer.</a> Sport Med. 35 (6), 501-536 (2005).</li>
<li>Bangsbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+physiology+of+soccer--with+special+reference+to+intense+intermittent+exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand+Suppl%22%5BJournal%5D)">The physiology of soccer--with special reference to intense intermittent exercise.</a> Acta Physiol Scand Suppl. 619, 1-155 (1994).</li>
<li>MacInnis, M. J., Gibala, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+adaptations+to+interval+training+and+the+role+of+exercise+intensity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Physiological adaptations to interval training and the role of exercise intensity.</a> J Physiol. 595 (9), 2915-2930 (2017).</li>
<li>Emberts, T., Porcari, J., Dobers-Tein, S., Steffen, J., Foster, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+intensity+and+energy+expenditure+of+a+tabata+workout%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sports+Sci+Med%22%5BJournal%5D)">Exercise intensity and energy expenditure of a tabata workout.</a> J Sports Sci Med. 12 (3), 612-613 (2013).</li>
<li>Smith, J. C., Hill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+energy+systems+during+a+Wingate+power+test%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Sports+Med%22%5BJournal%5D)">Contribution of energy systems during a Wingate power test.</a> Br J Sports Med. 25 (4), 196-199 (1991).</li>
<li>Dotan, R., Bar-Or, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Load+optimization+for+the+Wingate+Anaerobic+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol+Occup+Physiol%22%5BJournal%5D)">Load optimization for the Wingate Anaerobic Test.</a> Eur J Appl Physiol Occup Physiol. 51 (3), 409-417 (1983).</li>
<li>Carrasco-Benso, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose+tissue+expresses+intrinsic+circadian+rhythm+in+insulin+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Human adipose tissue expresses intrinsic circadian rhythm in insulin sensitivity.</a> FASEB J. 30 (9), 3117-3123 (2016).</li>
<li>Hatfield, D. L., Nicoll, J. X., Kraemer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Circadian+Rhythm+on+Power%2C+Force%2C+and+Hormonal+Response+in+Young+Men%5BTitle%5D)+AND+%22J+Strength+Cond+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of Circadian Rhythm on Power, Force, and Hormonal Response in Young Men.</a> J Strength Cond Res. 30 (3), 725-732 (2016).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

En este estudio, fue cateterizada la vena antecubital, y muestras de sangre se colectaron con éxito durante un ejercicio de intervalo alto. Como un ejemplo del uso de esta metodología, se analizaron muestras de sangre para lactato de sangre y (después de la separación de plasma) para la insulina del plasma. La principal ventaja de este método es que permite la recogida de muestras de sangre en fin períodos del tiempo. Al mismo tiempo, tienen algunas limitaciones. Por ejemplo, las modalidades de ejercicio limitada que per...

La medición de marcadores metabólicos y endocrinos durante la actividad física es importante para entender las implicaciones fisiológicas de las modalidades de ejercicio diferente. En algunas modalidades de ejercicio (p. ej., ejercicio de alta intensidad intervalo (HIIE)), metabolitos de la sangre y los niveles hormonales fluctúan en relativamente a corto plazo1,2,3.
Muchos deportes (por ejemplo, fútbol, baloncesto y rugby) consisten en períodos cortos de ejercicio de alta intensidad, separados por ejercicio intenso bajo o períodos pasivos4,5. HIIE presenta similitudes con los deportes ya mencionados y por lo tanto es ampliamente utilizado como un método de entrenamiento para atletas6. Por otra parte, debido a su similitud con el deporte, HIIE se ha utilizado como modelo para el estudio de la fisiología de ejercicio7. La muestra de sangre es fundamental para medir las variables fisiológicas, y con frecuencia se utiliza para propósitos de la investigación y la evaluación de la condición física. Sin embargo, la muestra de sangre durante HIIE puede ser técnicamente difícil debido al corto tiempo entre colecciones de muestra. Como una solución a este problema, aquí presentamos un método para obtener muestras de sangre por la cateterización venosa antecubital en breve períodos de tiempo mientras que sujetos HIIE.

<table><tbody><tr><td>Cicloergómetro</td><td>Monark</td><td>MONARK Ergomedic 874 E</td><td></td></tr><tr><td>Catéter</td><td>Terumo</td><td>SR-FF2032</td><td></td></tr><tr><td>Vacutainer</td><td>Terumo</td><td>PZ-D03</td><td></td></tr><tr><td>Tubo para catéter</td><td>Terumo</td><td>SP-PTW30L02</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Terumo</td><td>PF-10HF10UA</td><td></td></tr><tr><td>Insulina ELISA kit</td><td>Abnova</td><td>ELISA KA0921</td><td></td></tr></tbody></table>

evaluación de lactato de sangre y plasma insulina durante el ejercicio de alta intensidad por cateterización de la vena antecubital

Evaluation of Blood Lactate and Plasma Insulin During High-intensity Exercise by Antecubital Vein Catheterization

La medición de marcadores metabólicos y endocrinos durante la actividad física es importante para entender las implicaciones fisiológicas de las modalidades de ejercicio diferente. Durante algunos ejercicio modalidades (p. ej., ejercicio de alta intensidad intervalo), metabolitos de la sangre y los niveles hormonales cambian en breve períodos de tiempo. En el presente estudio, se describe un método para cateterizar la vena antecubital, que permite la recogida de varias muestras de sangre durante el ejercicio. Insulina y las concentraciones de lactato venoso se midieron durante el ejercicio de alta intensidad por la aplicación del método descrito. El ejercicio consistió en episodios de tres de 30 s de ejercicio de alta intensidad, separados por 4 min de recuperación. Después del último período de recuperación, se realizó un test de Wingate. Antes y después de cada pelea s 30 antes y después de la prueba de Wingate se obtuvieron muestras de sangre de la vena antecubital. Como resultado, fue posible evaluar la insulina del plasma y variaciones del lactato de la sangre venosa durante el ejercicio.

Como resultados representativos, utiliza este protocolo para medir variación de lactato e insulina de sangre en seis temas durante un HIIE en un ciclo ergómetro. Potencia de pico y potencia media para la prueba de Wingate fueron 732 ± 120 y 549 ± 84 Watts, respectivamente. Potencia media se utilizó para calcular la potencia de salida (494 ± 75 Watts) durante los 30 episodios de s de lo HIIE.
La figura 2</str...

Aquí presentamos un protocolo para obtener varias muestras de sangre de la vena antecubital durante el entrenamiento interválico de alta intensidad. Este protocolo puede ser útil para la medición de metabolitos sanguíneos y marcadores endocrinos durante el ejercen.

Evaluación de lactato de sangre y Plasma insulina durante el ejercicio de alta intensidad por cateterización de la vena Antecubital

The measurement of metabolic and endocrinal markers during physical activity is of relevance to understanding the physiological implications of different ...

El objetivo general de este experimento es obtener múltiples muestras de sangre venosa de un solo sujeto durante el ejercicio de cicloergómetro. Esta medida puede ayudar a responder preguntas clave en la fisiología porosa y la variación hormonal y metabolizada durante diferentes modalidades de ejercicio. La principal ventaja de esta técnica es que se pueden obtener múltiples muestras de sangre, incluso durante el ejercicio.La demostración de los procedimientos estará a cargo de Rie Oosaki, que colabora con nuestro laboratorio. Para evaluar la dinámica sanguínea, hormonal y de metabolitos de la vena antecubital durante el protocolo de ejercicio de intervalos de alta intensidad, primero haga que el sujeto realice un calentamiento de cinco minutos en el ergómetro a baja intensidad. Después de un descanso de cinco minutos, haga que el sujeto realice tres intervalos de ejercicio de alta intensidad de 30 segundos a una intensidad del 90 por ciento a la potencia promedio determinada a partir de una prueba de Wingate realizada anteriormente, separados por cuatro minutos de descanso por intervalo de ejercicio.Para la recolección de muestras de sangre, ate un torniquete alrededor del brazo seleccionado para el cateterismo e identifique la vena antecubital. Esterilice la piel con alcohol e inserte la punta de una cánula esterilizada en la vena antecubital y en un ángulo de aproximadamente 15 grados con respecto a la piel. Si la canulación es exitosa, se debe observar un rebote de sangre.Después de quitar la aguja, asegure la cánula y coloque un pañuelo de algodón debajo de la aguja. Retire la heparina con un tubo de recolección vacío y conecte un nuevo recipiente para la recolección de sangre a la cánula. Aspirar aproximadamente 2,5 ml de sangre y cerrar la mariposa, colocando inmediatamente la muestra en hielo.Luego, inyecte heparina a lo largo de todo el tubo para evitar la coagulación de la muestra de sangre y haga que el sujeto comience la siguiente serie de intervalos de ejercicio. Una vez recogida la última muestra, retire con cuidado el tubo de canulación y desinfecte la piel con más alcohol. Presione suavemente un trozo de algodón estéril sobre el lugar de recolección para minimizar el sangrado y transfiera 1,5 ml de sangre de cada muestra a tubos de microcentrífuga individuales de 1,5 ml con hielo.Utilice el detector de lactato, mida el lactato sanguíneo de cada muestra de sangre de 1 ml y centrifugue dos veces las alícuotas de la muestra de sangre de 1,5 ml. Transfiera los sobrenadantes a nuevos tubos de mirocentrífuga y vuelva a centrifugar las muestras en los sobrenadantes de transferencia a nuevos tubos. A continuación, almacene las muestras de plasma purificado a menos 80 grados centígrados hasta el análisis de insulina plasmática mediante ELISA.En este experimento representativo, los niveles plasmáticos de insulina disminuyeron en las seis muestras de sangre periférica de los pacientes durante el primer y tercer período de ejercicio de alta intensidad de 30 segundos, pero aumentaron durante el segundo intervalo en los períodos de recuperación. Sin embargo, el lactato plasmático disminuyó durante el segundo y tercer período de ejercicio de intervalo de alta intensidad de 30 segundos y aumentó durante el primer intervalo de 30 segundos y los períodos de recuperación. Al intentar este procedimiento, es importante recordar mantener las muestras de sangre a no más de 40 grados centígrados.Siguiendo este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como el análisis de Brodgar para responder preguntas adicionales sobre las variaciones del nivel de pH durante el ejercicio. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo recolectar muestras de sangre consecutivas de la vena antecubital durante el ejercicio de cicloergómetro.

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