Name: Métodos para pupa períodos de prueba y medición de pigmentación de ala de Drosophila guttifera (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Aprenda a estadiar períodos pupales y medir la pigmentación alar en Drosophila guttifera. Este método permite analizar el desarrollo morfológico y los mecanismos evolutivos de la pigmentación en insectos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos a Sean B. Carroll y Thomas Werner para proporcionar acciones mosca, Naoyuki fusible para el equipo, Byung Seok Jin para su asistencia en rodaje, Kiyokazu Agata para tutoría y Elizabeth Nakajima para la edición de inglés. Este trabajo fue apoyado por KAKENHI 17K 19427 y Takeda Science Foundation.

<ol><li>Carson, H. L., Hardy, D. E., Spieth, H. T., Stone, W. S. The evolutionary biology of the Hawaiian Drosophilidae. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCarson%2C+HL+%22Essays+in+evolution+and+genetics+in+honor+of+Theodosius+Dobzhansky%22">Essays in evolution and genetics in honor of Theodosius Dobzhansky</a>. Hecht, M. K., Steere, W. C. , Springer (Meredith Corporation). New York. 437-543 (1970).</li>
<li>Markow, T. A., O'Grady, P. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkow%2C+TA+%22Drosophila%3A+a+guide+to+species+identification+and+use%22">Drosophila: a guide to species identification and use</a>. , Academic Press. New York. (2006).</li>
<li>Patterson, J. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPatterson%2C+JT+%22The+Drosophilidae+of+the+southwest%22">The Drosophilidae of the southwest</a>. 4313, University of Texas Publication. 7-216 (1943).</li>
<li>Setoguchi, S., Takamori, H., Aotsuka, T., Sese, J., Ishikawa, Y., Matsuo, T. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10164-014-0399-z">Sexual dimorphism and courtship behavior in Drosophila prolongata.</a> J Ethol. 32 (2), 91-102 (2014).</li>
<li>Werner, T., Jaenike, J. <a target="_blank" href="http://humanities.lib.rochester.edu/drosophilaguide/">Drosophilids of the Midwest and Northeast</a>. , River Campus Libraries, University of Rochester. Rochester. (2017).</li>
<li>Arnoult, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emergence+and+diversification+of+fly+pigmentation+through+evolution+of+a+gene+regulatory+module%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Emergence and diversification of fly pigmentation through evolution of a gene regulatory module.</a> Science. 339 (6126), 1423-1426 (2013).</li>
<li>Camino, E. M., Butts, J. C., Ordway, A., Vellky, J. E., Rebeiz, M., Williams, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evolutionary+origination+and+diversification+of+a+dimorphic+gene+regulatory+network+through+parallel+innovations+in+cis+and+trans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The evolutionary origination and diversification of a dimorphic gene regulatory network through parallel innovations in cis and trans.</a> PLoS Genet. 11 (4), e1005136(2015).</li>
<li>Gompel, N., Prud'homme, B., Wittkopp, P. J., Kassner, V. A., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chance+caught+on+the+wing%3A+cis-regulatory+evolution+and+the+origin+of+pigment+patterns+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Chance caught on the wing: cis-regulatory evolution and the origin of pigment patterns in Drosophila.</a> Nature. 433 (7025), 481-487 (2005).</li>
<li>Glassford, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-option+of+an+ancestral+Hox-regulated+network+underlies+a+recently+evolved+morphological+novelty%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">Co-option of an ancestral Hox-regulated network underlies a recently evolved morphological novelty.</a> Dev. Cell. 34 (5), 520-531 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancer+modularity+and+the+evolution+of+new+traits%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Enhancer modularity and the evolution of new traits.</a> Fly. 9 (4), 155-159 (2015).</li>
<li>Koshikawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gain+of+cis-regulatory+activities+underlies+novel+domains+of+wingless+gene+expression+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Gain of cis-regulatory activities underlies novel domains of wingless gene expression in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (24), 7524-7529 (2015).</li>
<li>McGregor, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+evolution+through+multiple+cis-regulatory+mutations+at+a+single+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Morphological evolution through multiple cis-regulatory mutations at a single gene.</a> Nature. 448 (7153), 587-590 (2007).</li>
<li>Tanaka, K., Barmina, O., Kopp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+developmental+mechanisms+underlie+the+evolutionary+diversification+of+Drosophila+sex+combs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Distinct developmental mechanisms underlie the evolutionary diversification of Drosophila sex combs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (12), 4764-4769 (2009).</li>
<li>Werner, T., Koshikawa, S., Williams, T. M., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+novel+wing+colour+pattern+by+the+Wingless+morphogen%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a novel wing colour pattern by the Wingless morphogen.</a> Nature. 464 (7292), 1143-1148 (2010).</li>
<li>Wittkopp, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecific+polymorphism+to+interspecific+divergence%3A+genetics+of+pigmentation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intraspecific polymorphism to interspecific divergence: genetics of pigmentation in Drosophila.</a> Science. 326 (5952), 540-544 (2009).</li>
<li>Lawrence, P. A., Morata, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartments+in+the+wing+of+Drosophila%3A+a+study+of+the+engrailed+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Compartments in the wing of Drosophila: a study of the engrailed gene.</a> Dev Biol. 50 (2), 321-337 (1976).</li>
<li>Bainbridge, S. P., Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staging+the+metamorphosis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Embryol.+Exp.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Staging the metamorphosis of Drosophila melanogaster.</a> J. Embryol. Exp. Morphol. 66, 57-80 (1981).</li>
<li>Ashburner, M., Golic, K. G., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAshburner%2C+M+%22Drosophila%3A+A+Laboratory+Handbook%22">Drosophila: A Laboratory Handbook</a>. , 2nd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (2005).</li>
<li>Fukutomi, Y., Matsumoto, K., Agata, K., Funayama, N., Koshikawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pupal+development+and+pigmentation+process+of+a+polka-dotted+fruit+fly%2C+Drosophila+guttifera+%28Insecta%2C+Diptera%29%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genes+Evol%22%5BJournal%5D)">Pupal development and pigmentation process of a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera (Insecta, Diptera).</a> Dev Genes Evol. 227 (3), 171-180 (2017).</li>
<li>Koshikawa, S., Fukutomi, Y., Matsumoto, K. Drosophila guttifera as a model system for unraveling color pattern formation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKoshikawa%2C+S+%22Diversity+and+evolution+of+butterfly+wing+patterns%3A+an+integrative+approach%22">Diversity and evolution of butterfly wing patterns: an integrative approach</a>. Sekimura, T., Nijhout, H. F. , Springer. New York. in press (2017).</li>
<li>True, J. R., Edwards, K. A., Yamamoto, D., Carroll, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+wing+melanin+patterns+form+by+vein-dependent+elaboration+of+enzymatic+prepatterns%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila wing melanin patterns form by vein-dependent elaboration of enzymatic prepatterns.</a> Curr Biol. 9 (23), 1382-1391 (1999).</li>
<li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+Image+to+ImageJ%3A+25+years+of+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li>
<li>Izumitani, H. F., Kusaka, Y., Koshikawa, S., Toda, M. J., Katoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeography+of+the+Subgenus+Drosophila+%28Diptera%3A+Drosophilidae%29%3A+evolutionary+history+of+faunal+divergence+between+the+Old+and+the+New+Worlds%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Phylogeography of the Subgenus Drosophila (Diptera: Drosophilidae): evolutionary history of faunal divergence between the Old and the New Worlds.</a> PLoS ONE. 11 (7), e0160051(2016).</li>
<li>Resh, V. H., Cardé, R. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aResh%2C+VH+%22Encyclopedia+of+Insects%22">Encyclopedia of Insects</a>. , 2nd ed, Academic Press. Burlington. (2009).</li>
<li>DeLean, A., Munson, P. J., Rodbard, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+analysis+of+families+of+sigmoidal+curves%3A+application+to+bioassay%2C+radioligand+assay%2C+and+physiological+dose-response+curves%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves: application to bioassay, radioligand assay, and physiological dose-response curves.</a> Am J Physiol. 235 (2), E97-E102 (1978).</li>
<li>Robertson, C. W. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jmor.1050590207/abstract">The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological changes.</a> J Morphol. 59 (2), 351-399 (1936).</li>
<li>McKinney, M. L., McNamara, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMcKinney%2C+ML+%22Heterochrony%3A+the+evolution+of+ontogeny%22">Heterochrony: the evolution of ontogeny</a>. , Plenum Press. New York. (1991).</li>
<li>Hardie, D. C., Gregory, T. R., Hebert, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+pixels+to+picograms%3A+a+beginners%27+guide+to+genome+quantification+by+Feulgen+image+analysis+densitometry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">From pixels to picograms: a beginners' guide to genome quantification by Feulgen image analysis densitometry.</a> J Histochem Cytochem. 50 (6), 735-749 (2002).</li>
<li>Koshikawa, S., Miyazaki, S., Cornette, R., Matsumoto, T., Miura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+size+of+termites+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Isoptera%29+and+wood+roaches+%28Insecta%2C+Dictyoptera%2C+Cryptocercidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissenschaften%22%5BJournal%5D)">Genome size of termites (Insecta, Dictyoptera, Isoptera) and wood roaches (Insecta, Dictyoptera, Cryptocercidae).</a> Naturwissenschaften. 95 (9), 859-867 (2008).</li>
</ol>

Los autores no tienen conflicto de interés.

Describimos aquí los protocolos para la definición de etapas de pupal, eliminación del pupario de observación detallada, duración de etapas de pupal de medición medición de la intensidad de manchas negras sobre un ala en D. guttifera. Estos protocolos pueden ser aplicados para muchos Drosophila y relacionados con mosca de especies, especialmente con la pigmentación de la mariposa.
Profunda observación y descripción de los eventos del desarrollo más detallados permitiría mayor...

Algunos de los rasgos morfológicos de Drosophila se diversifican entre especies1,2,3,4,5. Podemos abordar la cuestión de la diversidad morfológica cómo surge mediante la comparación de los mecanismos de generación de estas morfologías. Ejemplos de tales morfologías son tricomas larvarias, peines sexuales para adultos, aparato genital externo, pigmentación abdominal y ala pigmentación6,7,8,9, 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15. para estudiar las diferencias morfológicas entre los adultos, observación y análisis de las etapas de pupas son importantes, porque el destino de rasgos adultos se determina en las últimas etapas larvales y morfogénesis posterior procede durante el período de pupa.
En estudios de Biología del desarrollo de Drosophila melanogaster, 'horas APF' (horas después de la formación pupal) es el método común para indicar una etapa pupal16. Este sistema emplea tiempo absoluto después de la formación pupal y es muy conveniente para los experimentos de la rutina. Sin embargo, velocidad de desarrollo puede diferir entre pupas, puede verse afectada por pequeñas diferencias genéticas, epigenéticas o microambiental, y por lo tanto, con el mismo tiempo absoluto después de la formación pupal no garantiza que las pupas son al mismo etapa de desarrollo. En muchos casos, son preferibles para comparar a varios individuos etapas definidas por características morfológicas. Sobre todo, una comparación entre especies requiere precisa puesta en escena y la comparación entre correspondientes (homólogos).
Bainbridge y Bownes17 reconoce 20 etapas de pupal (P1 a P15(ii)) basado en las características morfológicas de pupas de Drosophila melanogaster . Esta puesta en escena es el sistema más ampliamente utilizado de la puesta en escena del desarrollo morfológico18. En un estudio anterior, se realizó estadificación pupal de Drosophila guttifera para establecer una base para ala pigmentación estudios19. D. guttifera tiene un patrón de lunares negros en sus alas y es una de las especies modelo de ala pigmentación formación20. Aunque nos referimos a los criterios morfológicos descritos en el Bainbridge y 'Bownes investigación17, directamente midiendo duraciones de etapa observaciones serie19, en lugar de utilizar Bainbridge y 'Bownes estimación de las duraciones de la fase de de frecuencia observada. Aquí describimos el método de puesta en escena pupal y medición de duración de etapas de pupal de Drosophila en Fukutomi et al19.
Para estudiar el mecanismo del desarrollo de la pigmentación de ala, que necesitamos saber cuando en estadios de pupas o adulto se produce la pigmentación. Fukutomi et al. 19 había cuantificado densidades ópticas (ODs) de la pigmentación durante etapas de pupas y adulto por análisis de imágenes de imágenes de ala. La pigmentación de las alas de Drosophila se piensa para ser causado por la acumulación de melanina negra21. Para la cuantificación de Sao, se utilizaron imágenes de escala de grises y ImageJ software (https://imagej.nih.gov/ij/)22 . Para reconocer y cuantificar la pigmentación específica de lugar (ΔOD), restamos el OD fuera de un lugar de la do dentro de un lugar. Para hacer este método reproducible y objetiva, se deben determinar los lugares de medición de OD con venas de las alas como puntos de referencia. En este artículo, describimos en detalle este método de cuantificación de la pigmentación de ala de Drosophila guttifera.

<table><tbody><tr><td>Drosophila guttifera</td><td>The Drosophila Species Stock Center en la U.C. San Diego</td><td>15130-1971.10</td><td>Drosophila guttifera, una especie de mosca de la fruta utilizada en este artículo</td></tr><tr><td>Frasco de plástico</td><td>Hightech</td><td>MKC-30</td><td>Frasco de plástico, para el mantenimiento de moscas</td></tr><tr><td>Tapones de zumbido Tapones de frasco Tapones de frasco y frascos para viales de vidrio</td><td>Fisher Scientific</td><td>AS-271</td><td>Tapón de celulosa, para el mantenimiento de la pasta de moscas</td></tr><tr><td>Azúcar blanda blanca</td><td>Mitsui Sugar</td><td>J-500g</td><td>Azúcar blanda blanca, para alimentos estándar de harina de maíz/azúcar/levadura/agar</td></tr><tr><td>Harina</td><td>de maíz Nippon Flour Mills</td><td>F</td><td>Harina de maíz, para alimentos estándar de harina de maíz/azúcar/levadura/agar</td></tr><tr><td>Sémola de maíz - C</td><td>Nippon Flour Mills</td><td>GC</td><td>Sémola de maíz - C, para alimentos estándar de harina de maíz/azúcar/levadura/agar</td></tr><tr><td>Polvo</td> <td>de agarMatsuki Kanten Sangyo</td><td>No.602</td><td>Agar en polvo, para harina de maíz estándar / azúcar / levadura / agar</td></tr><tr><td>alimento Levadura de cerveza seca</td><td>Asahi Food & Cuidado de la salud</td><td>Y2A</td><td>Levadura de cerveza seca, para alimentos estándar de harina de maíz/azúcar/levadura/agar</td></tr><tr><td>P-hidroxibenzoato de butilo</td><td>Nacalai Tesque</td><td>06327-02</td><td>P-hidroxibenzoato de butilo, para alimentos estándar de harina de maíz/azúcar/levadura/agar</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Wako</td><td>057-00456</td><td>Etanol, para alimentos estándar de harina de maíz/azúcar/levadura/agar</td></tr><tr><td>Microtubo de fondo plano</td><td>Ina Optica</td><td>CF-0150</td><td>Microtubo de 1,5 mL, para recogida de pupas</td></tr><tr><td>CAPSULEFUGE</td><td></td><td>Tomy PMC-060</td><td>Mini microcentrífuga, para la recogida de pupas</td></tr><tr><td>Esterilizado Schale NB</td><td>Sansei Medical</td><td>01-013 Placa de</td><td>Petri de plástico (diámetro 90 mm x altura 15 mm)</td></tr><tr><td>Gradilla para tubos de suero</td><td>Iwaki</td><td>9796-050</td><td>Se utiliza como cámara húmeda, para la observación de pupas</td></tr><tr><td>Corning Falcon Placa de cultivo de tejidos Easy-Grip</td><td>Corning 353001</td><td></td><td>Placa de Petri de plástico (diámetro 35 mm x altura 10 mm)</td></tr><tr><td>Placa de cultivo de tejidos estándar Falcon</td><td>Corning</td><td>353002</td><td>Placa de Petri de plástico (diámetro 60 mm x altura 15 mm)</td></tr><tr><td>Chincheta</td><td>Kokuyo</td><td>51233709</td><td>Chincheta, para hacer agujeros en la tapa del microtubo</td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td>Microscopio estereoscópico, para la observación morfológica</td></tr> Cámara <tr><td>digital</td><td>Olympus</td><td>DSE-330-A Cámara</td><td>digital, para la toma de imágenes</td></tr><tr><td>Cinta adhesiva de doble cara NICETACK</td><td>Nichiban</td><td>NW-15SF</td><td>Cinta adhesiva de doble cara, para eliminar el pupario</td></tr><tr><td>Pinzas Dumont #5</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td>Pinzas, para eliminar el pupario</td></tr><tr><td>Van Gogh VISUAL Pincel</td><td>Talens Japan</td><td>GWVR-#5/0</td><td>Pincel, para eliminar el pupario</td></tr><tr><td>Placa de cultivo celular Greiner CELLSTAR de 12 pocillos</td><td>Merck</td><td>665-180</td><td>Placa de cultivo celular de 12 pocillos, para medir la duración de los períodos de pupa</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Wako</td><td>191-01665</td><td>NaCl, para PBS</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Nacalai Tesque</td><td>285-14</td><td>KCl, para PBS</td></tr><tr><td>Na2HPO4&middot; 12H2O</td><td>Wako</td><td>196-02835</td><td>Na2HPO4&middot; 12H2O, para PBS</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Nacalai Tesque</td><td>28721-55</td><td>KH2PO4, para PBS</td></tr><tr><td>Filtro escalonado de densidad neutra (ND) 0.04 - 3.0</td><td>Edmund Optics</td><td>64-384 Filtro de</td><td>densidad escalonado, para la calibración de la medición de la pigmentación</td></tr><tr><td>Software ImageJ</td><td>NIH</td><td>1.8.0-101</td><td>Software ImageJ, para la medición de la intensidad de las manchas negras en un ala (https://imagej.nih.gov)</td></tr><tr><td>FINE FROST portaobjetos de vidrio</td><td>Matsunami Glass Ind</td><td>FF-001</td><td>Portaobjetos de vidrio, para la medición de la intensidad de las manchas negras en un ala Cubierta de</td></tr><tr><td>vidrio de microscopio cuadrado 18 x 18</td><td>Matsunami Glass Ind</td><td>C018181</td><td>Cubreobjetos, para la medición de la intensidad de las manchas negras en un ala</td></tr></tbody></table>

métodos para pupa períodos de prueba y medición de pigmentación de ala de drosophila guttifera

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Diversificada especies de Drosophila (mosca de la fruta) proporcionan oportunidades para el estudio de mecanismos de desarrollo y los cambios genéticos responsables de cambios evolutivos. En particular, la etapa adulta es una rica fuente de caracteres morfológicos para la comparación interespecífica, incluyendo ala pigmentación comparación. Para estudiar las diferencias del desarrollo entre especies, observación detallada y adecuada puesta en escena se requiere para la comparación exacta. Aquí describimos protocolos de puesta en escena de períodos pupas y cuantificación de la pigmentación de ala en una lunares mosca de la fruta Drosophila guttifera. En primer lugar, describimos el método de observación morfológica detallada y definición de etapas de pupal basadas en morfologías. Este método incluye una técnica para quitar del pupario, que es la carcaza externa quitinosa de la pupa, para permitir la observación detallada de la morfología pupal. En segundo lugar, describimos el método para medir la duración de etapas pupas definidas. Finalmente, describimos el método para la cuantificación de la pigmentación ala basada en análisis de imágenes mediante imágenes digitales y el software ImageJ. Con estos métodos, podemos establecer una base sólida para comparar procesos de desarrollo de rasgos adultos durante etapas de pupal.

El período pupal de D. guttifera se divide en 17 etapas (P1 - P15(ii); imágenes de representante de tres etapas (P1, P5 - 6, P10) se muestran la figura 3y 17 todas las etapas se ilustran en la figura 4). Aunque Bainbridge y Bownes17 reconocidas 20 etapas en D. melanogaster, algunas de estas etapas pueden no aplicarse a D. guttifera. El orden de los dos eventos del desarrollo, la ...

Se describen los protocolos de presentar períodos de pupas y medición de la pigmentación de ala de Drosophila guttifera . Puesta en escena y cuantificación de pigmentación proporcionan una base sólida para el estudio de los mecanismos del desarrollo de rasgos adultos y permiten la comparación interespecífica de desarrollo rasgo.

Métodos para pupa períodos de prueba y medición de pigmentación de ala de Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

El objetivo general de este experimento es escenificar los períodos de pupa y medir la pigmentación de las alas de Drosophila guttifera. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biología evolutiva del desarrollo, como cómo se desarrollan los patrones de pigmentación en Drosophila. La principal ventaja de esta técnica es que podemos obtener información detallada sobre el desarrollo morfológico y el proceso de pigmentación.Aunque este método puede proporcionar información sobre el desarrollo morfológico y el proceso de pigmentación de Drosophila guttifera, se puede aplicar a otras especies de Drosophila. Para comenzar a eliminar el pupario, coloque un trozo de cinta adhesiva de doble cara en un trozo de toalla de papel. Coloque una pupa en la cinta adhesiva de doble cara, con el lado ventral hacia arriba.Localiza el espacio entre la cara anterior del pupario y la pupa interna. Agarre y extraiga el pupario alrededor de este espacio, usando fórceps. Y exponer la cara anterior de la cabeza de la pupa.Inserte la punta de una pinza moviéndola paralela al eje antero-posterior. Levante la punta de las pinzas para romper localmente el pupario. Repite esta acción

methods-for-staging-pupal-periods-measurement-wing-pigmentation

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

La variación fenotípica de rasgos puede ser consecuencia de mutaciones en cis-elemento regulador (CRE) secuencias de patrones genéticos que controlan la expresión. Métodos derivados de su uso en Drosophila melanogaster cuantitativamente se puede comparar los niveles de la distribución espacial y temporal de la expresión génica mediada por la modificación o naturales variantes CRE.

Comparación cuantitativa de Cis-Elemento regulador (CRE) Las actividades de transgénicos Drosophila melanogaster</em

Un método para inmunoteñir y visualizar los órganos chordotonal en larvas y pupas...

Visualización de los propioceptores<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas y pupas

Este artículo describe una técnica para eliminar el pupario de un insecto mientras se mantiene la pupa interior intacta y, por lo tanto, apta para una investigación más profunda. El protocolo de ejemplo muestra el procedimiento con Drosophila guttifera; sin embargo, esta técnica es aplicable a otras especies de Drosophila.

Eliminación de pupario de insectos: un método para la investigación de pupas

En este trabajo se demuestra el uso de un microscopio confocal de barrido rápido de comportamiento de las células de imagen directamente a través de la pupa. Al dejar el caso de pupa intacta, este método permite la observación y medición de los procesos dinámicos de célula en una etapa de desarrollo de Drosophila que es difícil de estudiar directamente.

Imaging A través de la envoltura pupal de<em&gt; Drosophila melanogaster</em

La capacidad para detectar con precisión las transcripciones o las proteínas en los tejidos de la Drosophila es fundamental para el estudio de su abundancia y localización relacionada con el proceso de desarrollo. Aquí está la descripción de un sencillo procedimiento para disecar alas pupas. Estas alas pueden utilizarse como muestras en diversas técnicas (análisis de PCR, immunohistochemistry, etc.).

Un método rápido y eficiente para disecar alas Pupal de Drosophila apto para Immunodetections o ensayos PCR

El ovario del Drosophila es un sistema modelo excelente para estudiar el desarrollo del nicho de células madre. Aunque se han publicado métodos para disecar larvarios y adultos de los ovarios, disecciones de ovario pupa requieren técnicas diferentes que no han sido publicadas en detalle. Aquí describiremos un protocolo de disección, tinción y montaje pupas ovarios.

Disección y la coloración de los ovarios Pupal de Drosophila

Aquí, presentamos un método fácil de usar y versátil para realizar en proyección de imagen de procesos de desarrollo en general y músculo-Tendinosas de la morfogénesis en particular en la vida de pupas de Drosophila .

En Vivo Proyección de imagen del músculo-tendón morfogénesis en Drosophila pupa

Este protocolo está diseñado para evaluar la viabilidad de Drosophila en cada etapa del desarrollo, desde el embrión hasta el adulto. El método se puede utilizar para determinar y comparar la viabilidad de diferentes genotipos o condiciones de crecimiento.

Un método directo y simple para evaluar la viabilidad de Drosophila melanogasterde Embryo a Adult

Este protocolo está diseñado para la toma de imágenes y el análisis de la dinámica de la orientación celular y el crecimiento del tejido en la drosophila epitelia abdominal a medida que la mosca de la fruta sufre metamorfosis. La metodología descrita aquí se puede aplicar al estudio de diferentes etapas del desarrollo, tejidos y estructuras subcelulares en Drosophila u otros organismos modelo.

Imágenes y análisis de la orientación del tejido y la dinámica del crecimiento en el desarrollo de la Drosophila Epithelia durante las etapas pupales

Aquí, se presenta un protocolo para la obtención de imágenes en vivo a largo plazo de la pata de Drosophila durante la etapa de pupa, que implica la eliminación completa del pupario. Este protocolo también se puede aplicar a otros tejidos.

Imágenes en vivo a largo plazo del desarrollo de la pata de la pupa de Drosophila después de la extracción del pupario

Drosophila es un modelo poderoso para comprender los mecanismos fundamentales de la miogénesis. Este protocolo para la disección y preparación de hemisecciones de tórax permite el análisis microscópico del músculo de vuelo indirecto tanto de la etapa de pupa como de la adulta. Este protocolo permite obtener imágenes confocales de la morfología celular, la localización de proteínas, la estructura muscular y muchos otros aspectos de la miogénesis.

Disección de los músculos de vuelo indirecto de Drosophila melanogaster para enfoques de microscopía

Aprenda a estadiar períodos pupales y medir la pigmentación alar en Drosophila guttifera. Este método permite analizar el desarrollo morfológico y los mecanismos evolutivos de la pigmentación en insectos.

Métodos para pupa períodos de prueba y medición de pigmentación de ala de Drosophila guttifera

Explorar más videos