Análisis clonal de precursores de células madre hematopoyéticas embrionarias usando índice célula clasificación combinada con células endoteliales nicho cultura Co

El objetivo general de este método es identificar las propiedades fenotípicas y el potencial de injerto de las células madre hematopoyéticas clonales o precursores de HSC durante el desarrollo embrionario murino. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la hematopoyesis del desarrollo sobre las contribuciones únicas del linaje de los precursores clonales de HSC durante el desarrollo embrionario. La principal ventaja de esta técnica es que los precursores hemogénicos se analizan a nivel de una sola célula.

Esto permite la identificación de las propiedades fenotípicas únicas que distinguen a los precursores raros de HSC. Comience agregando Aorta-Gonada-Mesonephros, AGM, tejidos diseccionados de embriones entre 9,5 y 11,5 días después del coito a un tubo cónico de 15 mililitros que contiene 10 mililitros de PBS suplementado con 10% de FBS en hielo. Cuando los tejidos se hayan asentado en el fondo del tubo, aspire el sobrenadante e inmediatamente agregue un mililitro de colagenasa al 0,25% a las muestras.