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DOI: 10.3791/57033-v
Polina Zjablovskaja*1,2, Petr Danek*1, Miroslava Kardosova1, Meritxell Alberich-Jorda1,2
1Department of Hemato-Oncology,Institute of Molecular Genetics of the ASCR, 2Childhood Leukaemia Investigation Prague, Department of Paediatric Haematology and Oncology, 2nd Faculty of Medicine,Charles University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Aquí se presentan protocolos detallados para el cultivo de la línea de célula 32D/G-CSF-R precursor mieloide murinas, realizar infecciones virales y llevar a cabo ensayos de proliferación y diferenciación. Esta línea celular es conveniente para el estudio de desarrollo de las células mieloides y el papel de los genes de interés en el crecimiento de las células mieloides y diferenciación neutrofílica.
El objetivo general de este experimento es modificar genéticamente las células mieloides murinos 32D-G-CSF-R mediante la sobreexpresión o el silenciamiento del gen de interés y determinar el efecto de estos cambios en la proliferación y diferenciación neutrofílica de la línea celular. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la hematología, como por ejemplo, cómo la proteína de interés puede estar involucrada en el crecimiento y la diferenciación de las células precursoras mieloides. La principal ventaja de esta línea celular es que posee una capacidad de proliferación ilimitada, es susceptible a manipulaciones genéticas, el costo es relativamente bajo y permite un grado de simplificación biológica requerido en ciertos enfoques experimentales.
El demostrador del procedimiento será hoy Petr Danek, un estudiante de doctorado en mi laboratorio. Prepare 250 mililitros de RPMI-1640 Medio suplementado con suero bovino fetal al 10% inactivado por calor y 10 nanogramos por mililitro de interleucina-3 murina. Luego prepare 50 mililitros de medio de diferenciación.
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