Name: Un time-lapse, libre de etiquetas, cuantitativa fase estudio de células cancerosas humanas latentes y activos de imagen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Aprende a caracterizar fenotipos angiogénicos y no angiogénicos de células de osteosarcoma humano mediante imagen de fase cuantitativa sin etiquetas. Este método integrado analiza simultáneamente morfología, proliferación y motilidad celular.

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Los autores reconocen con gratitud el apoyo de la Breast Cancer Research Foundation y la Fundación de investigación médica avanzada.

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el Comité de bioseguridad institucional Hospital infantil de Boston.
1. preparación de la célula
<ol><li>
Descongelación KHOS-A y células -N
	<ol>
<li>Medio de cultivo, es decir, en calor Dulbecco modificado medio de Eagle suplementado con 10% de suero de ternero fetal (vol/vol) (FBS) y 1% (vol/vol) penicilina/estreptomicina.</li>
		<li>Tomar los viales criogénicos de células desde el tanque de nitrógeno líquido, sumerja el fondo de los frascos en agua caliente en un baño de agua de 37 ° C y agitar suavemente los frascos criogénicos para acelerar el proceso de descongelación. Mantenga la tapa de los frascos criogénicos de ponerse en contacto con agua para evitar la contaminación. Tan pronto como las células son descongeladas, esterilizar el frasco criogénico por rociar solución de etanol 70% y limpiar la cubeta.</li>
		<li>En campana de flujo laminar, aspirar inmediatamente la suspensión de células del frasco criogénico y suspender suavemente en medio de cultivo 10 mL calentado (descrito en la 1.1.1). De centrífuga suspensiones celulares a 200 x g durante 5-7 minutos.</li>
		<li>Resuspender el precipitado de células con medio de cultivo 10 mL calentado y transvasar a un matraz T75. Pipetee suavemente varias veces para suspender las células con una pipeta de 10 mL.</li>
		<li>Coloque el matraz en una incubadora de 37 ° C con 5% (vol/vol) CO2 y un ambiente humidificado. Permitir que las células a conectar durante al menos 12 h.</li>
		<li>Incube las células durante aproximadamente 3-7 días hasta 80-100% confluente. Cambiar el medio de cultivo cada 2-3 días.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
División KHOS-A y células -N
	<ol>
<li>Quitar los medios de cultivo del frasco.</li>
		<li>Lavar las células con PBS estéril 5 mL (1 x) sin calcio y magnesio, para eliminar las células no adherentes o fracción.</li>
		<li>Añadir solución de tripsina-EDTA de 0,05% 1 mL en el matraz y agitar brevemente el frasco para asegurar que la tripsina-EDTA se dispersa uniformemente.</li>
		<li>Incube el frasco para 2-3 minutos en un incubador de 37 º C o 3-5 min a temperatura ambiente. Compruebe las células bajo un microscopio con aproximadamente 400 aumentos para asegurarse de que las células son redondeadas para arriba y separadas.</li>
		<li>Una vez que las células son separadas, añadir 10 mL medio de cultivo y pipetee suavemente el medio de arriba y abajo varias veces para romper los agregados de células en una suspensión unicelular utilizando una pipeta de 10 mL.</li>
		<li>Contar las células usando un contador de células. La suspensión de células de la semilla en frascos de T75 nueva en una densidad de 2 × 106 células o una proporción de 1:4.</li>
		<li>Permitir a las células a crecer hasta 80-100% de confluencia antes de sembrar para el experimento QPI.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Siembra KHOS-A y -N celdas QPI
	<ol>
<li>Semilla de KHOS-A y -N células en placas de 6 pozos en la densidad de 50.000 300.000 células/pozo con medio de cultivo 5 mL después de contar con un contador de células. Nota: La densidad de siembra depende de la tasa de proliferación celular y el período de proyección de imagen para < 100% confluencia durante la adquisición de imágenes.</li>
		<li>Incube las células durante al menos 12 h permitir el accesorio.</li>
		<li>Cambiar el medio con medios frescos antes de QPI.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. QPI adquisición
<ol><li>
Cubreobjetos, establecer
	<ol>
<li>Limpiar el cubreobjetos por enjuague varias veces con agua desionizada y esterilizar con solución de etanol 75% por inmersión durante 15 minutos, poner el cubreobjetos en una campana de flujo laminar estéril para secar.</li>
		<li>Coloque cuidadosamente el cubreobjetos sobre una placa de 6 pozos para evitar burbujas obvio. Asegúrese de que la parte inferior de la hoja de cubierta se encuentra inmerso en los medios de cultivo (mínimo 5 mL/pocillo).</li>
		<li>Coloque la placa en la incubadora (37 ° C, 5% CO2y ambiente humidificado) se equilibren para por lo menos 15 minutos. Si la niebla se forma en la hoja de cubierta, use un hisopo de algodón estéril para limpiar limpio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Proyección de imagen de células con un microscopio
	<ol>
<li>Abra el software al iniciar el sistema, incluyendo la calibración del uno mismo del tiempo de exposición, contraste del patrón y el ruido de holograma. Asegúrese de que los valores son aceptables (se muestra en la gama del verde o amarillo).</li>
		<li>Coloque la placa de 6 pozos en el escenario del microscopio QPI.</li>
		<li>Haga clic en "Capturar vivo" y seleccione "Manual" en "Enfoque de Software". Grueso se centran las imágenes de la fase de células mediante el ajuste de la distancia de trabajo en "Ajuste del microscopio" para obtener líneas de células en imágenes de fase. Cambiar a "Automático" en "Enfoque de Software".</li>
		<li>Haga clic en "Nuevo experimento" para crear un nuevo experimento. Comience con la selección de las posiciones de adquisición de imagen utilizando el ratón o las flechas en el teclado numérico. Después de cada selección, haga clic en "Recordar". Normalmente se seleccionan localidades de 3 a 5 para cada muestra.</li>
		<li>Configurar los intervalos de proyección de imagen y período de tiempo en la sección de "Timelapse". Nota: Para seguir claramente las células cancerosas, los intervalos deben ser menos que 5 min 48 horas se define como el período de tiempo para la combinación de análisis QPI.</li>
		<li>Iniciar el experimento haciendo clic en "Capture", que automáticamente se centrará y adquieren las imágenes en los puntos de tiempo de ajuste.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Análisis de los datos
<ol><li>
Análisis de la morfología de células
	<ol>
<li>Haga clic en "Identificar las células". Ajustar el ajuste numérico de "Umbral de fondo" para que áreas de la célula se separan bien del ruido de fondo. Ajustar el número de configuración de "Tamaño del objeto" para asegurarse de que cada célula tiene un núcleo. Mantener parámetros constantes para las muestras que deben compararse, ya que pueden afectar las mediciones de área y volumen finales. Modificar manualmente los segmentos de la célula mediante el uso de "Cambios manuales," si es necesario.</li>
		<li>Utilizar la función "Analizar los datos" en el software para analizar las células. Iniciar un nuevo análisis de datos haciendo clic en "Nuevo análisis". Arrastre las imágenes seleccionadas en los "Marcos de la fuente" ficha célula morfología parámetros y area de célula (μm2), espesor óptico (μm) y volumen (μm3) para cada célula individual. Elegir scatter parcela o histograma modo y exportar los datos como tablas o figuras.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Análisis de la proliferación de células
	<ol>
<li>Seleccione por lo menos 5 imágenes para los diferentes puntos temporales de interés (por ejemplo, inicial, 12 h, 24 h, 36 h y 48 h). Número récord de células que es proporcionado por el software.</li>
		<li>Para estimar el tiempo de duplicación, parcela número de células después de la normalización con los números iniciales y ajuste con las curvas de crecimiento exponencial.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Análisis de movimiento de la célula
	<ol>
<li>Utilice la función de "Seguimiento de las células" en el software. Haga clic en "Nuevo análisis" para iniciar un nuevo análisis de datos. Serie de arrastre de imágenes durante un período de tiempo seleccionado (p. ej., 4 h después de la incubación de 24 h) en la ficha de "Marcos de la fuente" elija al azar 10-30 células pulsando células bajo la modalidad de selección "Añadir células". Excluir las celdas de los bordes y los del campo de visión.</li>
		<li>Revise cuidadosamente el seguimiento de la serie de imágenes. En caso de que el sistema pierde la pista de una célula o pistas de la celda equivocada, ajustar manualmente la célula de seguimiento haciendo clic en "Identify" para identificar las células o hacer clic en "Modificar ubicación" bajo la modalidad de "Select" para modificar la ubicación de la célula.</li>
		<li>Elegir entre trama rosa de trayectorias de la célula en "Movimiento solar" o parcela para los otros parámetros relacionados con el movimiento en "Características de la trama," como la velocidad de la motilidad (μm/h), motilidad (μm), migración (μm) y la franqueza de migración. Exportar datos a tablas o figuras.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+cancer%2C+vascular%2C+rheumatoid+and+other+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease.</a> Nature Medicine. 1 (1), 27-31 (1995).</li>
<li>Hanahan, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+and+emerging+mechanisms+of+the+angiogenic+switch+during+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis.</a> Cell. 86 (3), 353-364 (1996).</li>
<li>Harper, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+tumor+angiogenesis%3A+mechanisms+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22EXS%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of tumor angiogenesis: mechanisms and therapeutic implications.</a> EXS. (96), 223-268 (2006).</li>
<li>Naumov, G. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+human+tumor+dormancy%3A+an+angiogenic+switch+from+the+nonangiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">A model of human tumor dormancy: an angiogenic switch from the nonangiogenic phenotype.</a> Journal of the National Cancer Institute. 98 (5), 316-325 (2006).</li>
<li>Fang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+metalloproteinase-2+is+required+for+the+switch+to+the+angiogenic+phenotype+in+a+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Matrix metalloproteinase-2 is required for the switch to the angiogenic phenotype in a tumor model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (8), 3884-3889 (2000).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+switch+of+dormant+tumors+to+fast-growing+angiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Transcriptional switch of dormant tumors to fast-growing angiogenic phenotype.</a> Cancer Research. 69 (3), 836-844 (2009).</li>
<li>Hu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+signature+for+angiogenic+and+nonangiogenic+non-small-cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Gene expression signature for angiogenic and nonangiogenic non-small-cell lung cancer.</a> Oncogene. 24 (7), 1212-1219 (2005).</li>
<li>Harper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+vascular+endothelial+growth+factor+expression+by+the+zinc+finger+transcription+factor+ZNF24%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Repression of vascular endothelial growth factor expression by the zinc finger transcription factor ZNF24.</a> Cancer Research. 67 (18), 8736-8741 (2007).</li>
<li>Jia, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+repression+of+VEGF+by+ZNF24%3A+mechanistic+studies+and+vascular+consequences+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Transcriptional repression of VEGF by ZNF24: mechanistic studies and vascular consequences in vivo.</a> Blood. 121 (4), 707-715 (2013).</li>
<li>Jia, D., Huang, L., Bischoff, J., Moses, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+endogenous+zinc+finger+transcription+factor%2C+ZNF24%2C+modulates+the+angiogenic+potential+of+human+microvascular+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">The endogenous zinc finger transcription factor, ZNF24, modulates the angiogenic potential of human microvascular endothelial cells.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 29 (4), 1371-1382 (2015).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+dormancy+of+human+liposarcoma+is+associated+with+impaired+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+journal%3A+official+publication+of+the+Federation+of+American+Societies+for+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Prolonged dormancy of human liposarcoma is associated with impaired tumor angiogenesis.</a> FASEB journal: official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 20 (7), 947-949 (2006).</li>
<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+micro+RNAs+governing+the+switch+of+dormant+tumors+to+the+fast-growing+angiogenic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Consensus micro RNAs governing the switch of dormant tumors to the fast-growing angiogenic phenotype.</a> PloS One. 7 (8), e44001(2012).</li>
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<li>Almog, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+changes+induced+by+the+tumor+dormancy-associated+microRNA-190%5BTitle%5D)+AND+%22Transcription%22%5BJournal%5D)">Transcriptional changes induced by the tumor dormancy-associated microRNA-190.</a> Transcription. 4 (4), 177-191 (2013).</li>
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<li>Folkman, J., Watson, K., Ingber, D., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+angiogenesis+during+the+transition+from+hyperplasia+to+neoplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Induction of angiogenesis during the transition from hyperplasia to neoplasia.</a> Nature. 339 (6219), 58-61 (1989).</li>
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<li>Lee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Phase+Imaging+Techniques+for+the+Study+of+Cell+Pathophysiology%3A+From+Principles+to+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors%22%5BJournal%5D)">Quantitative Phase Imaging Techniques for the Study of Cell Pathophysiology: From Principles to Applications.</a> Sensors. 13 (4), 4170-4191 (2013).</li>
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</ol>

No hay conflicto de interés declarado.

En este estudio, describimos una en vitro, no invasivo y libre de etiqueta método usando QPI para caracterizar cuantitativamente los fenotipos angiogénicos y no angiogénico de las células de osteosarcoma humano. Varios parámetros celulares han sido analizados simultáneamente por este método integrado, alto rendimiento, incluyendo el área celular, espesor de la célula, volumen celular, tasa de proliferación, doble tiempo, franqueza de migración, velocidad de la motilidad, migración y movilidad.
<p class="jove...

Uno de los primeros puestos de control en el desarrollo y progresión de un tumor sólido es la adquisición del fenotipo angiogénico, un sello distintivo del cáncer. Esta progresión consiste en una variedad de procesos bioquímicos y moleculares1,2,3. Un desafío técnico en el estudio de esta etapa clave en la progresión tumoral es la falta de herramientas que continuamente y cuantitativamente caracterizar y diferenciar fenotipos angiogénicos y no angiogénico de las células de cáncer vivas de una manera imparcial. Los análisis tradicionales se utilizan para investigar los comportamientos celulares de células angiogénicas y no angiogénico generalmente requieren instrumentos y reactivos costosos, por ejemplo, ensayos de proliferación y migración de célula4,5, 6,7,8,9,10,11,12,13,14 o complementarios en vivo evaluaciones4,5,6,8,15,16, así como que requieren uso intensivo y considerable experiencia consumo de tiempo y mano de obra.
Recientemente, fase cuantitativa imaging (QPI) ha emergido como una técnica novedosa que permite la evaluación de lapso de tiempo y libre de etiquetado de una variedad de célula morfología y comportamiento parámetros17,18,19, 20 , 21 , 22. a diferencia de la microscopía óptica convencional, QPI cuantifica las variaciones de desplazamiento de fase píxel por píxel después la luz pasa a través de un objeto óptico y reconstruye un holograma con espesor óptico se puede convertir y volumen, permitiendo así la directa Análisis de células vivas y las siguientes características: la proyección de imagen (1) cuantitativa, proyección de imagen (2) no-invasivo y Time-lapse, la proyección de imagen (3) libre de etiqueta y proyección de imagen (4) simultánea de múltiples parámetro. Estas características hacen de QPI una poderosa herramienta para evaluar y comprender los procesos patológicos a nivel celular.
En un reciente estudio, se utilizó QPI para caracterizar cuantitativamente y diferenciar angiogénicos KHOS-A y no angiogénico KHOS-N fenotipos de células de osteosarcoma humano de una manera sistemática y cuantitativa, la combinación de análisis de la morfología de la célula, proliferación y motilidad23. Usando software de análisis de imágenes, un panel de células morfológica y comportamiento parámetros fueron comparados cuantitativamente entre las células de osteosarcoma humano angiogénicos y no angiogénico y se identificaron cinco diferencias características entre estos dos fenotipos. Este nuevo enfoque ofrece una plataforma integrada y cuantitativa para evaluar una variedad de características celulares biológicamente relevantes.

<table><tbody><tr><td>Matraz T75</td><td>Corning, NY, EE. UU</td><td>. 353136</td><td></td></tr><tr><td>placas de 6 pocillos&nbsp;</td><td>Corning, NY, EE.UU.</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s medio Eagle modificado (DMEM)</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, EE. UU.</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)&nbsp;</td><td>Atlanta Biologicals, GA, EE. UU.</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina Estreptomicina</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, EE. UU.</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific, MA, EE. UU</td><td>. 10010023</td><td></td></tr><tr><td>Beckman Z1 Contador de Coulter</td><td>Beckman Coulter, IN, EE. UU</td><td>. Z1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>HoloMonitor M4</td><td>Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Suecia</td><td></td><td>M4 Microscopio</td></tr><tr><td>Hololid</td><td>Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Suecia</td><td>PHI 8020</td><td></td></tr><tr><td>HStudioM4</td><td>Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Suecia</td><td>HStudioM4</td><td>Software</td></tr></tbody></table>

un time-lapse, libre de etiquetas, cuantitativa fase estudio de células cancerosas humanas latentes y activos de imagen

A Time-lapse, Label-free, Quantitative Phase Imaging Study of Dormant and Active Human Cancer Cells

La adquisición del fenotipo angiogénico es un componente esencial de la dormancia del tumor a escapar. Aunque varios ensayos clásicos en vitro (p. ej., proliferación, migración y otros) y en vivo los modelos se han desarrollado para investigar y caracterizar los fenotipos de células angiogénicas y no angiogénico, estos métodos son tiempo intensivo de mano de obra y a menudo requieren reactivos caros instrumentos, como conocimientos significativos. En un reciente estudio, se utilizó una fase cuantitativa nueva imagen técnica (QPI) realizar caracterizaciones Time-lapse y etiquetado libre de células KHOS de osteosarcoma humano angiogénicos y no angiogénico. Un panel de parámetros celulares, incluyendo la morfología celular, la proliferación y movilidad, cuantitativamente fueron medidos y analizados usando QPI. Esta novela y el enfoque cuantitativo proporciona la oportunidad de forma continua y no invasiva estudiar procesos celulares importantes, comportamientos y características de las células cancerosas y otros tipos de células de una manera simple e integrada. Este informe describe el protocolo experimental, incluyendo la preparación de la célula, QPI adquisición y análisis de datos.

La figura 1 muestra una caracterización de la morfología de célula típica. Las imágenes se presentan como hologramas (figura 1A-B) y de imágenes 2D (figura 1-D). Espesores de célula óptica (calculadas a partir del índice de refracción y la longitud del camino óptico) se cuantifican mediante Perfil de línea o una medición de células enteras. Dispersión de parcelas de ...

Fenotipos de células de cáncer latente y activa se caracterizaron usando proyección de imagen de fase cuantitativa. Estudios de proliferación, la migración y la morfología de células fueron integrados y analizados en un método simple.

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The acquisition of the angiogenic phenotype is an essential component of the escape from tumor dormancy. Although several classic in vitro assays (e.g., ...

El objetivo general de este experimento es caracterizar cuantitativamente los fenotipos angiogénicos y no angiogénicos de las células de osteosarcoma humano de manera sistemática combinando análisis de la morfología, proliferación y motilidad de las células. Este método puede ayudar a responder preguntas clave con respecto al establecimiento y la progresión del cáncer humano. En particular, el escape de la latencia tumoral y el cambio endógeno.La principal ventaja de esta técnica es que los parámetros multicelulares se pueden analizar simultáneamente mediante este método integrado de alta dispersión. Esto incluye el área celular, el grosor celular, el volumen celular, la tasa de proliferación, el tiempo de duplicación, la velocidad de motilidad, la migración y la motilidad. Para comenzar, precaliente el medio de cultivo a 37 grados centígrados en un baño de agua.A continuación, extraiga los viales criogénicos de células de osteosarcoma humano angiogénico y no angiogénico del tanque de nitrógeno líquido. Sumerja el fondo de los viales en un baño de agua a 37 grados centígrados y agite suavemente los viales criogénicos para acelerar el proceso de descongelación. Tan pronto como se de

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Cancer Research

Investigación del cáncer

Este video demuestra la identificación sin etiquetas de la morfología y la bioquímica de los linfocitos a través de imágenes de fase cuantitativas en 3D. Esta técnica permite un análisis exhaustivo de los linfocitos, descubriendo sus estructuras y propiedades internas sin necesidad de procedimientos de etiquetado.

Imágenes cuantitativas tridimensionales de fase para caracterizar subtipos de linfocitos

Fuente: Parker, J. J., et al. Un modelo de cultivo de corte organotípico de glioblastoma humano para el estudio de la migración de células tumorales y los efectos específicos del paciente de los fármacos antiinvasivos. J. Vis. Exp. (2017)Este video muestra las imágenes de cortes de tejido de glioblastoma que expresan proteína verde fluorescente (GFP) a través de microscopía confocal. Las imágenes de alta resolución se capturan a intervalos constantes para rastrear el movimiento y la dirección...

Imágenes de la migración de células tumorales en tejido de glioblastoma mediante microscopía confocal de barrido de lapso de tiempo

Imagen de lapso de tiempo se utiliza para evaluar el comportamiento de las células mamarias preneoplásicas primarias epiteliales derivadas de los modelos de ratón genéticamente modificadas de riesgo de cáncer de mama para determinar si existen correlaciones entre los parámetros de comportamiento específicas y distintas lesiones genéticas.

Time-lapse de imágenes de Primaria preneoplásicas células epiteliales mamarias derivadas de los modelos de ratones genéticamente modificados del cáncer de mama

Aquí, describimos un método de microscopía de lapso de tiempo a largo plazo para rastrear longitudinalmente células individuales en respuesta a terapias contra el cáncer.

A través del espejo: Microscopía de lapso de tiempo y de seguimiento longitudinal de las células individuales para el Estudio de la terapéutica contra el cáncer

Este protocolo describe el uso de la microscopía multifotónica para realizar extendida time-lapse de las interacciones multicelulares en tiempo real, en vivo a una resolución de una sola célula.

Prolongado lapso de tiempo intravital de imágenes de tiempo real multicelular Dinámica en el microambiente tumoral

Se describe un protocolo para la identificación de subtipos de linfocitos usando proyección de imagen de fase cuantitativa y un algoritmo de aprendizaje automático libre de etiqueta. Las mediciones de índice de refracción 3D tomogramas de linfocitos presentan 3D información morfológica y bioquímica de células individuales, que luego se analiza con un algoritmo de aprendizaje automático para la identificación de tipos de la célula.

Máquina de aprendizaje y sin etiqueta de identificación de subtipos de linfocitos usando proyección de imagen tridimensional fase cuantitativa

En este estudio se tomó la imagen de la actividad fagocítica de macrófagos contra las células cancerosas, específicamente las células del carcinoma mamario del ratón 4T1. El modelo de cocultivo de células vivas se estableció y observó utilizando una combinación de microscopía de contraste de interferencia fluorescente y diferencial. Esta evaluación se realizó utilizando un software de imágenes para desarrollar vídeo de lapso de tiempo multipunto.

Time-Lapse 2D Imaging of Phagocytic Activity in M1 Macrophage-4T1 Mouse Mammary Carcinoma Cells in Co-cultures

En este trabajo se presenta un protocolo para estudiar la tasa de inicio de la muerte celular programada mediante la obtención de imágenes continuas de las hojas inoculadas después de la inducción de la muerte celular.

Estudio de la iniciación de la muerte celular mediante un microscopio digital

Aquí, proporcionamos un método para el análisis de imágenes de células vivas que se puede utilizar para rastrear manualmente los linajes de los queratinocitos de paso 0 y que permite la recopilación de métricas de proliferación, incluido el destino de la división celular y la duración del ciclo celular.

Imágenes de células vivas con fotografía de lapso de tiempo para estudiar la cinética de proliferación de queratinocitos epidérmicos

Este protocolo presenta un enfoque multimodal que combina la espectroscopia Raman y la microscopía de fase tomográfica para el fenotipado no invasivo y sin etiquetas de células vivas de cáncer de mama humano. Incluye una línea de análisis fácil de usar y sin sesgos humanos para un análisis morfoquímico rápido y cuantitativo, que proporciona información molecular y estructural detallada con aplicaciones en la investigación del cáncer y la biología celular.

Un marco de imágenes multimodal para avanzar en el fenotipado de células vivas de cáncer de mama sin etiquetas

Este protocolo describe un flujo de trabajo basado en tomografía de difracción óptica sin marcas para la imagen en tiempo real y el análisis cuantitativo de la morfodinámica de los macrófagos. El método permite el seguimiento continuo de la morfología y migración de células individuales, proporcionando mediciones resueltas en el tiempo del área proyectada, el perímetro y la velocidad media de migración durante la imagen a largo plazo de células vivas.

Imagen en tiempo real sin etiquetar y análisis cuantitativo de la morfodinámica de macrófagos utilizando tomografía por difracción óptica

Aprende a caracterizar fenotipos angiogénicos y no angiogénicos de células de osteosarcoma humano mediante imagen de fase cuantitativa sin etiquetas. Este método integrado analiza simultáneamente morfología, proliferación y motilidad celular.

Un time-lapse, libre de etiquetas, cuantitativa fase estudio de células cancerosas humanas latentes y activos de imagen

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