Evaluación sistemática de bienestar en ratones para procedimientos con anestesia General

El objetivo general de este protocolo es evaluar el bienestar de los ratones después de que se sometieron a procedimientos que incluyen anestesia general y proporcionar datos científicamente sólidos para respaldar la clasificación de gravedad de acuerdo con la directiva de la UE 2010/63. Este protocolo puede ayudar a responder preguntas clave sobre el bienestar animal en el campo de la ciencia de los animales de laboratorio, como el grado de angustia causado por los procedimientos que involucran anestesia general. La principal ventaja de este protocolo es que el bienestar de cada ratón individual se evalúa de una manera científica basada en animales y este protocolo se puede adaptar e integrar fácilmente en otros estudios planificados.

La primera vez que tuvimos la idea de este protocolo fue cuando especulamos que si la anestesia repetida causaba más estrés en ratones de laboratorio que una sola exposición, faltarían datos con base científica. En este paso, prepare una caja de vidrio con un área de piso de aproximadamente 220 milímetros por 290 milímetros y una altura de 390 milímetros. Cubra el piso con aproximadamente 0,5 centímetros de material de cama.

Luego, esparce un puñado de material de cama usado de la jaula de la casa encima del nuevo material de cama para reducir la angustia causada por el nuevo entorno. Proporcionar comida y agua. Transfiera suavemente el ratón a la jaula de observación y permita que el ratón se habitúe al nuevo entorno durante al menos 30 minutos.

Para la escala de muecas del ratón, use una cámara de alta definición para la fotografía. Tome continuamente entre 30 y 40 fotografías para cada punto de tiempo en uno o dos minutos. Para probar el comportamiento de excavación según Deacon y Jirkof, prepare las madrigueras colocando 140 gramos de gránulos de comida en una botella de agua de plástico opaco estándar.

A continuación, coloque la botella de agua de plástico llena de gránulos de comida paralela a la pared trasera de la jaula de observación. Después de dos horas, pesa los gránulos de comida que quedan en la madriguera. Realice la prueba dos veces dos días antes del procedimiento como referencia.

En este paso, prepare una jaula con material de cama nuevo para el período de observación de 24 horas en el que los ratones se alojan individualmente. El período de observación de 24 horas comienza después de la mueca del ratón, la escala y el comportamiento de excavación. La duración de la vivienda individual se mantiene al mínimo.

Mientras tanto, se mide la actividad en jaulas domésticas, la ingesta de alimentos, el comportamiento de construcción de nidos y los niveles de metabolitos de corticosterona fecal. A continuación, esparce un puñado de material de cama usado sin heces de la jaula de casa encima del nuevo material para reducir la angustia. Proporcionar un nido de algodón cuadrado estandarizado de un peso definido solo como enriquecimiento ambiental.

Después de eso, monte el sensor de infrarrojos en la parte superior de la jaula para medir la actividad de la jaula doméstica. Proporcione gránulos de comida estándar y agua ad libitum y coloque al ratón en la jaula. A la mañana siguiente, marque el nido de acuerdo con la escala de cinco puntos de Deacon aproximadamente dos horas después de que se encienda la luz.

Además, pese cualquier pieza de nido sin rasgar que represente al menos el 5% del peso inicial del nido. A continuación, coloque la parte superior de la jaula en rejilla en un ángulo de 45 grados con respecto al lado más largo de la jaula. Encienda el temporizador y monitoree o grabe video a los ratones durante 10 minutos desde una distancia de aproximadamente 1,5 metros.

Fíjate en todas las veces que el ratón se sube a la parte superior de la jaula con las cuatro patas en la parte superior de la jaula o sale de la parte superior de la jaula con una o más patas en el suelo de la jaula seguido de un análisis. La experiencia única de anestesia, así como la anestesia repetida, aumentaron las puntuaciones de diferencia en la escala de muecas del ratón en comparación con el control 30 minutos después de la exposición. A los 150 minutos después de la última anestesia, las puntuaciones de diferencia en la escala de muecas de todos los ratones volvieron a los niveles de control.

Para el comportamiento de excavación, solo la anestesia repetida redujo significativamente el porcentaje de peso de los gránulos de comida que los ratones retiraron de la madriguera en comparación con el control. Para el comportamiento de construcción de nidos, no hubo diferencias significativas en las puntuaciones de nidos entre una sola experiencia de anestesia, anestesia repetida y el control. En el paradigma exploratorio libre, la anestesia repetida redujo significativamente el número de exploraciones en comparación con el control y la duración total de la exploración frente a una sola anestesia un día después de la última anestesia.

Ocho días después de la última anestesia, ya no hubo diferencias entre los grupos de estudio. Al intentar este protocolo, es importante recordar que hay que manipular ratones mediante métodos de túnel y/o ventosas. Recoger a los ratones por la cola puede inducir estrés y ansiedad, lo que a su vez afecta al bienestar y también puede influir en los resultados del protocolo.

Este protocolo puede adaptarse fácilmente e integrarse en estudios planificados para evaluar el impacto de un procedimiento en el bienestar de los ratones. Dependiendo del procedimiento y del diseño del estudio, se debe elegir la prueba más adecuada de este protocolo. Después de ver este video, tendrá una buena comprensión de cómo evaluar el bienestar de los ratones sometidos al procedimiento de anestesia general.

El protocolo ayuda a clasificar la gravedad del procedimiento de una manera científica basada en animales.