23 de febrero de 2018
Presentamos un método eficiente de estudiar lente alojamiento utilizando una camilla manual de la lente. Los imitadores de protocolo fisiológico alojamiento tirando los zonules conectado alrededor de la cápsula de la lente, de tal modo, que estira la lente.
El objetivo general de esta técnica es proporcionar un método más factible y económico para estudiar con precisión la biomecánica del cristalino. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la biomecánica ocular sobre cómo cambia el cristalino con la pérdida de acomodación y la aparición de la presbicia. La principal ventaja de esta técnica es que monitorea con precisión la capacidad de la lente para adaptarse a un bajo costo de material y una alta robustez de procedimiento.
Después de obtener la muestra de ojo, agarre firmemente el costado del ojo y use una cuchilla de afeitar para hacer una pequeña incisión a lo largo del costado a tres milímetros de distancia de la córnea lo suficientemente profunda como para llegar al vítreo. Con unas tijeras esterilizadas, continúe cuidadosamente la incisión alrededor del ojo con las pinzas para extraer el tejido ocular posterior una vez que se haya extirpado. Aísle el cristalino, las zonules y el vítreo adherido con pinzas según sea necesario para desconectar las zonules y el cuerpo ciliar de los músculos ciliares mientras se mantiene la conexión con el cristalino.
A continuación, retire el exceso de vítreo para que la lente pueda quedar plana sobre el estirador manual de lentes. Tenga cuidado de mantener intactos el cristalino, las zonules y una cantidad mínima de vítreo mientras elimina el exceso de vítreo. Para montar la camilla, inserte la suela de los zapatos de 10 milímetros y sus correspondientes topes de zapatos en la placa inferior de la camilla de modo que quede un espacio de cinco mililitros entre la pared posterior de la hendidura del zapato y el zapato en sí.
Con pinzas curvas, coloque la lente extraída boca arriba en el centro de la placa inferior de modo que las zapatas soporten la lente sobre el orificio central. Encaja la parte superior correspondiente de los zapatos en su lugar, recortando solo las zonules y el vítreo. A continuación, inserte las placas en la carcasa de la placa y el tornillo del tapón en el orificio situado en el lateral de la placa inferior e inserte la carcasa de la placa en la base.
Para medir la lente, coloque un sistema de imágenes directamente sobre el aparato a la distancia adecuada para obtener imágenes y coloque una regla en el campo de visión para el tamaño y el escalado precisos de las imágenes en el procesamiento posterior. A continuación, gire la llave con firmeza pero suavidad en el sentido de las agujas del reloj para estirar la lente y obtener imágenes de la misma. Para garantizar la consistencia de una muestra a otra, es esencial girar la llave suavemente mientras se estira la lente.
Cuando se hayan adquirido todas las imágenes, gire la llave en sentido contrario a las agujas del reloj para restaurar la muestra a su estado de reposo y obtener las imágenes del estado de reposo final de la lente. Para analizar los datos, cargue las imágenes en el software de análisis de imágenes adecuado y utilice el punto para seleccionar al menos 40 puntos alrededor de la circunferencia de la lente. En el menú Analizar, seleccione medir para obtener la ubicación de cada punto seleccionado y ajuste los puntos de ubicación con MathLab para obtener un radio y chi cuadrado del ajuste.
A continuación, utilice la regla fotografiada para convertir el radio de píxeles y el error en métricas y realice un análisis de prueba t de dos colas emparejado para comparar una lente individual antes y después del estiramiento. En este análisis representativo de 10 muestras de ojo porcino, las lentes demostraron un aumento de más del 4% con respecto a sus radios originales, lo que valida el protocolo de estiramiento de la lente con consistencia y precisión tanto en la literatura como en la precisión. Cuando se probaron lentes humanos, se observó una disminución drástica en la elasticidad del cristalino en correlación con la edad del donante, como se esperaba de estudios previos de elasticidad del cristalino.
Una vez dominada, esta técnica de estiramiento de la lente se puede completar en menos de 10 minutos si se realiza correctamente. Al estirar la lente, es importante recordar proporcionar una fuerza de tracción continua hasta que se haya alcanzado el tornillo de tope para minimizar la variabilidad entre las muestras. Con esta técnica de estiramiento manual de la lente, podemos controlar la rigidez del cristalino de pacientes con una variedad de patologías patológicas, incluidos pacientes con diabetes, cataratas o presbicia.
Tras su desarrollo, esta técnica abrió el camino para que los investigadores en el campo de la biomecánica ocular exploraran las propiedades del cristalino durante las fases de pérdida de acomodación y/o inicio de la presbicia. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo usar un estirador de lentes manual para obtener información biomecánica valiosa sobre la lente. No olvide que trabajar con tejido biológico puede ser extremadamente peligroso y que siempre se deben tomar precauciones como usar ropa de laboratorio adecuada y esterilizar todos los instrumentos antes de su uso al realizar este procedimiento.
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Este artículo presenta un método para estudiar la acomodación del cristalino mediante un estirador manual de cristalinos. La técnica simula la acomodación fisiológica estirando el cristalino a través de las zónulas conectadas a la cápsula del cristalino.
Simular la acomodación del cristalino con un estirador de lentes manual permite investigar de forma rentable y reproducible los cambios biomecánicos relacionados con la presbicia y otras patologías oculares. Este enfoque apoya la validación temprana de objetivos y la reducción de riesgos mecanicistas para terapias dirigidas a la rigidez del cristalino relacionada con la edad. Los requisitos simplificados de muestras y los resultados cuantitativos robustos del método facilitan la evaluación general del portafolio de la biomecánica del cristalino en la investigación traslacional.
Este protocolo manual de estiramiento del cristalino se integra en la continuidad desde el descubrimiento hasta la fase preclínica en biomecánica ocular, apoyando tanto la investigación basada en hipótesis como la validación traslacional.