Name: Un método para definir los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad de microbioma de Colon en un modelo de Tumor de Colon murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Aprende a evaluar los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad del microbioma intestinal en un modelo de tumor de colon murino. Este protocolo mejora la reproducibilidad experimental mediante la normalización previa del microbioma.

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Agradecemos a B. Dalley en el centro de genómica de la Universidad de Utah para la secuenciación de la biblioteca y K. Boucher en el centro de Bioestadística de la Universidad de Utah para asesoramiento estadístico y el acceso a estos núcleos técnicos apoyados por el premio del Instituto Nacional del cáncer CA042014 P30. El proyecto descrito fue apoyado por el nacional cáncer Institute subvenciones P01 CA073992 y CA128891 K01 y la Fundación de cáncer Huntsman.

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<li>Bice, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+Enrichment+Induces+Pericyte+and+IgA-Dependent+Wound+Repair+and+Lifespan+Extension+in+a+Colon+Tumor+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+reports%22%5BJournal%5D)">Environmental Enrichment Induces Pericyte and IgA-Dependent Wound Repair and Lifespan Extension in a Colon Tumor Model.</a> Cell reports. 19 (4), 760-773 (2017).</li>
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<li>Knight, R., Caporaso, J. G. QIIME: Summarize Taxa Through Plots. QIIME. , Available from: 
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<li>Moon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertically+transmitted+faecal+IgA+levels+determine+extra-chromosomal+phenotypic+variation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Vertically transmitted faecal IgA levels determine extra-chromosomal phenotypic variation.</a> Nature. 521 (7550), 90-93 (2015).</li>
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<li>Zhu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+intestinal+lumen+microbiota+in+an+animal+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Analysis of the intestinal lumen microbiota in an animal model of colorectal cancer.</a> PLoS One. 9 (6), 90849(2014).</li>
<li>Evans, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exercise+prevents+weight+gain+and+alters+the+gut+microbiota+in+a+mouse+model+of+high+fat+diet-induced+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Exercise prevents weight gain and alters the gut microbiota in a mouse model of high fat diet-induced obesity.</a> PLoS One. 9 (3), 92193(2014).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen ningún conflicto de intereses.

Este procedimiento permite el análisis de la microbiota aislada de heces tras enriquecimiento ambiental de normal o de tumor con animales. Porque estos son grandes experimentos que implican la crianza para obtener muchos animales de diversos sexos y genotipos, normalizando el microbioma entre animales antes del inicio del experimento es esencial evitar que EE no relacionadas con efectos sobre el microbioma biodiversidad.
Coherencia entre NE y EE, se lleva a cabo el proceso de cría para asegura...

Estudios de enriquecimiento ambiental (EE) utilizan parámetros complejos de vivienda para afectar la estimulación social (viviendas grandes jaulas, grandes grupos de animales), estimulación cognitiva (chozas, túneles, materiales de anidación, plataformas) y actividad física (correr ruedas). EE se ha utilizado por muchos laboratorios para entender los efectos del aumento de la actividad y mejora las interacciones sociales y cognitivas en el inicio de la enfermedad y la progresión usando una amplia gama de modelos de ratón, incluyendo alopecia inducida por barbería, enfermedad de Alzheimer, El síndrome de Rett y enfermedad tumoral y digestivo varios modelos1,2,3,4,5,6.
Se han desarrollado varios modelos de ratón para estudiar tumorigenesis de colon en ratones. Quizás el modelo más bien definido es el ratón de ApcMin . El ratón de ApcMin fue desarrollado en el laboratorio de William Paloma en 19907y se ha utilizado como un modelo de ratón de mutaciones en el gen APC que están comúnmente asociados con cáncer colorrectal humano. A diferencia de los seres humanos que las mutaciones APC , ApcMin ratones desarrollan principalmente pequeños tumores intestinales, con muy rara ocurrencia de tumores de colon. Sin embargo, un alelo Tcf4Het con una sola mutación heterozigótica de nocaut knockin en Tcf4, enormemente aumenta tumorigenesis de colon cuando se combina con el alelo ApcMin del8. Recientemente, este modelo de ratón de tumorigenesis de colon se ha utilizado para determinar los efectos de la EA en la tumorigénesis de colon6. En el Bice et al. estudio, los efectos fisiológicos y fenotípicos de la EA en machos y hembras de cuatro líneas de ratón diferente (wild-type (WT), Tcf4Het / + Apc+ / +, Tcf4+ + ApcMin / +, y Tcf4 Het / + APCMin / +)) se definieron. Quizás el hallazgo más interesante fue que EE aumenta significativamente la vida de hombres y mujeres animales de con tumores de colon. Esto demostró que la EE puede reducir por lo menos algunos de los síntomas asociados con la tumorigénesis de colon y mejorar la salud animal. Notable, esta vida útil mejorada en varones no es consecuencia directa de la tumorigénesis reducida y en su lugar estaba ligado a la iniciación de una respuesta, incluyendo mejorado microbioma biodiversidad6de cicatrización tumor.
Se han publicado varios estudios específicos de EE con resultados interesantes. Sin embargo, desde un punto de vista técnico, resultados importantes a menudo no son traducibles a otros laboratorios. Mantener idénticas metodologías EE entre distintos laboratorios es un tema muy complejo, no sólo por dispositivos de enriquecimiento y vivienda usada, pero también ropa de cama, alimentos, ventilación, cría, genética, actividad en la sala y Protocolo de animales requisitos, entre otros9,10,11. Un ejemplo es la integración animal, donde los animales deben estar estable integrados en la colonia de ratón, por lo tanto normalizar la composición genética del fondo y la dieta, para evitar efectos relacionados no tratamiento. Además, muchos estudios EE se han completado antes de la realización de la importancia de la microbioma en enfermedad y la forma en que las prácticas de cría de ratón comunes pueden afectar la composición del microbioma intestinal10,12.
Colocación de estrategia y animales de cría en EE puede aumentar el estrés si no se realiza correctamente. Desde estudios EE utilizan gran número de animales machos y hembras y varios genotipos, montaje experimental puede ser difícil dado el requisito para los animales de varias camadas para combinarse. Por lo tanto, una cría y destete estrategia fue desarrollado para permitir la combinación de animales destetados del genotipo correcto de diferentes camadas. La razón primaria de esto era normalizar la microbiota entre camadas y a reducir el estrés cuando los animales fueron trasladados al ambiente experimental. El microbioma se transmitió desde la presa10. Diversidad microbiana a la Colonia, las hembras fueron compradas en laboratorios Jackson e integradas en la colonia durante un mes antes de que la experimento comenzó9,10,12. Normalizar más biodiversidad de microbioma entre animales, las hembras fueron alojadas conjuntamente antes de la cría. Después de cría, viviendas comunales durante la crianza y la capacidad para escapar de cachorros de enfermería mejoraron los niveles de estrés de la atención materna13,14, posiblemente favorecer la normalización del microbioma. Para evitar que EE no relacionadas con efectos sobre el microbioma, esta casa común de todos los animales experimentales prevenir estrés adicional y luchando que se produjo cuando la combinación de varios machos de diferentes camadas en una jaula experimental. Finalmente, se incluyeron números iguales de animales de todos los genotipos en las jaulas. Esto proporcionó la oportunidad para la biodiversidad de la microbiota mejorada a través de genotipos y quitado la contribución de coprofagia (tendencia del animal a consumir heces) o posibles diferencias conductuales específicas de genotipo al estudio general.
Este protocolo proporciona una estrategia que amplía estudios previos de EE para incluir aspectos conocidos de la investigación microbioma, incluyendo integración de microbiota animal y transmisión de Colonia para la normalización de la microbiota, para permitir a más poblaciones de microbioma uniforme entre los animales de experimentación. Teniendo en cuenta estas precauciones es esencial debido a la capacidad de tratamiento no relacionados con microbiota diferencias para confundir los resultados del estudio. Eliminación de EE no relacionadas con cambios microbiota permitirá a los investigadores definir específicamente el papel de la EA en la composición de la microbiota durante el desarrollo de la enfermedad y la progresión.

<table><tbody><tr><td>Teklad Diets/Harlan Labs Chow</td><td>Harlan Labs</td><td>3980X</td><td>Comida irradiada estándar formulada por el Dr. Mario Capecchi en colaboración con Harlan Labs.</td></tr><tr><td>Ropa de cama Cell-Sorb Plus</td><td>Fangman Specialties</td><td>82010</td><td>Autoclave antes de su uso.</td></tr><tr><td>Sistema de tatuaje AIMS para neonatos</td><td>AIMS</td><td>NEO-9</td><td>https://animalid.com/neonate-rodent-tattoo-identification/32. Se pueden utilizar otros sistemas y tintas de tatuaje de grado animal con resultados similares, incluido el Aramis Micro Tattoo Kit.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 AllerZone Mouse Micro-Isolator System Completo con jaula, parte superior de filtro AllerZone y sistema modular de administración de dieta</td><td>Productos de laboratorio</td><td>82120ZF</td><td>Cada jaula EE requiere una de cada catálogo # 82120ZF, 82100ZF y 82101ZF, así como dos de 82109ZF. La comida está solo en un lado.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 Life Span Enrichment Device Productos</td> de <td>laboratorio</td><td>82109ZF</td><td>Cada jaula EE requiere una de cada catálogo # 82120ZF, 82100ZF y 82101ZF, así como dos de 82109ZF. La comida está solo en un lado.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 Jaula 13-7/8" de largo x 19-1/16" de ancho x 7-3/4" de profundidad</td><td>Productos de laboratorio</td><td>82100ZF</td><td>Cada jaula EE requiere una de cada catálogo # 82120ZF, 82100ZF y 82101ZF, así como dos de 82109ZF. La comida está solo en un lado.</td></tr><tr><td>Zyfone One Cage 2100 AllerZone Micro-Isolator filter top</td><td>Lab Products</td><td>82101ZF</td><td>Cada jaula EE requiere una de cada catálogo # 82120ZF, 82100ZF y 82101ZF, así como dos de 82109ZF. La comida está solo en un lado.</td></tr><tr><td>Túnel</td><td>Bio-Serv</td><td>K3323 o K3332</td><td>Conecte las jaulas entre sí y utilícelas para el enriquecimiento</td></tr><tr><td>Ojal para conectar el túnel a las jaulas</td><td>Fabricado por el Taller de Máquinas de la Universidad de Utah</td><td>n/a</td><td>Asegúrese de que el material sea resistente a la masticación y se pueda esterilizar en autoclave</td></tr><tr><td>Rueda de vía rápida</td><td>Bio-Serv</td><td>K3250 o K3251</td><td>Úselo con iglú de ratón y piso Iglú</td></tr><tr>de<td>ratón</td><td>Bio-Serv</td><td>K3328, K3570 o K3327</td><td>Uso con rueda y suelo Fast-track</td></tr><tr><td>Suelo iglú para ratón</td><td>Bio-Serv</td><td>K3244</td><td>Uso con iglú para ratón y Fast-Track</td></tr><tr><td>Mouse Hut</td><td>Bio-Serv</td><td>K3272, K3102 o K3271</td><td></td></tr><tr><td>Crawl Ball</td><td>Bio-Serv</td><td>K3330 o K3329</td><td></td></tr><tr><td>Bio-hut</td><td>Bio-Serv</td><td>K3352</td><td>Cabaña de pulpa de madera utilizada para albergar y anidar</td></tr><tr><td>Película adhesiva&nbsp;</td><td>VWR</td><td>60941-072</td><td>Úselo para cubrir temporalmente un orificio perforado en una jaula grande para evitar que los ratones escapen</td></tr><tr><td>Rack ventilado de flujo laminar</td><td>Techniplast</td><td>Bio-C36</td><td>El armario que hemos utilizado en este estudio no se suministra actualmente. El Bio-C36 es muy similar.</td></tr><tr><td>Tubo de microfuga de 1,5 mL: libre de ARNasa y ADNasa</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA Stool MiniKit</td><td>Qiagen</td><td>51504</td><td>Este kit suministra reactivos para 50 preparaciones de ADN. tampón de lisis de heces = ASL; tampón de lisis de cloruro de guanidinio = AL; Tampón de lavado 1 con cloruro de guanidinio = AW1; Tampón de lavado 2= AW2; Tampón de elución con EDTA = AE</td></tr><tr><td>Baño de agua (capaz de calentar hasta 95)</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td>Para la incubación a 94 grados de muestras de heces para lisar células.</td></tr><tr><td>Baño de agua (capaz de calentar a 70 grados)</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td>Para la incubación a 70 grados de muestras de heces&nbsp;</td></tr><tr><td>Etanol (200 pruebas)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>Fluorómetro: Qubit</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q33216</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA Kit de ensayo de amplio rango</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>Q32850</td><td></td></tr><tr><td>EB Buffer o 10 mM Tris pH 8.5</td><td>Qiagen</td><td>19086</td><td></td></tr><tr><td>Imprimaciones específicas para experimentos</td><td>Cualquier proveedor Grado</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR agua</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2X KAPA HiFi HotStart Ready Mix&nbsp;</td><td>Kapa Biosystems</td><td>KK2601</td><td>para amplificación de amplicones (1,25 mL permite 100 rxns).</td></tr><tr><td>Agarosa para ejecutar geles de diagnóstico</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TapeStation de alta sensibilidad D1000 Screen Tape Trace</td><td>Agilent</td><td>5067-5583</td><td>TapeStation o Bioanalyzer Los instrumentos son comunes en Institutional Genomics Cores para analizar la calidad de la biblioteca. Alternativamente, se puede utilizar un bioanalizador DNA1000 chip (Agilent, 5067-1504).</td></tr><tr><td>Agencourt AMPure XP Perlas magnéticas</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63880</td><td>Perlas Magentic para limpieza de PCR: 5 mL limpiarán 250 reacciones de PCR</td></tr><tr><td>Soporte magnético</td><td>Life Technologies</td><td>AM10027</td><td></td></tr><tr><td>Guía de preparación de la biblioteca</td><td>Illumina</td><td></td><td>Illumina. Preparación de la biblioteca de secuenciación metagenómica 16S: Preparación de amplicones del gen de ARN ribosómico 16S para el sistema Illumina MiSeq. https://support.illumina.com/content/dam/illumina-support/documents/documentation/chemistry_documentation/16s/16s-metagenomic-library-prep-guide-15044223-b.pdf.</td></tr><tr><td>Indexación dual única</td><td>Illumina Illumina</td><td>Experiment Manager Software</td><td>Disponible gratuitamente en:</td></tr><tr><td>https://support.illumina.com/sequencing/sequencing_software/experiment_manager/downloads.html Nextera XT 96 Index Kit</td><td>Illumina</td><td>FC-131-1002</td><td>Se utiliza para añadir códigos de barras a los amplicones</td></tr><tr><td>MicroAmp Optical Placa de reacción de 96 pocillos</td><td>Applied Biosystems/ThermoFisher</td><td>N8010560</td><td></td></tr><tr><td>Accesorio de placa de índice TruSeq</td><td>Illumina</td><td>FC-130-1005</td><td></td></tr><tr><td>Sello adhesivo de placa transparente</td><td>Applied Biosystems/ThermoFisher</td><td>4360954</td><td>Applied Biosystems/ThermoFisher Secuenciación de película adhesiva Microamp</td></tr><tr><td>por MiSeq con reactivos v3 y lecturas duales de 300 pb</td><td>Illumina</td><td>MS-102-3003</td><td></td></tr><tr><td>Kit de control PhiX</td><td>Illumina</td><td>FC-110-3001</td><td></td></tr><tr><td>Proteinasa K (600 mAU/ml)</td><td>Qiagen</td><td>19131</td><td>Equivalente a 20 mg/ml de proteinasa K. Se suministra con el kit QiaAmp Herramientas de</td></tr><tr><td>análisis de datos</td><td>Qiime</td> Las <td>herramientas del software QIIME</td><td>La instalación puede variar según su sistema y el sitio web de QIIME describe varias opciones (http://qiime.org/install/install.html). Para este estudio, se utilizó el paquete de software MacQIIME 1.9.1 (compilado por Werner Lab, SUNY, http://www.wernerlab.org/software/macqiime</td></tr><tr><td>Step 13.2.</td><td>Qiime</td><td>FastQ Método de unión</td><td>&nbsp;( http://code.google.com/p/ea-utils &nbsp;). &nbsp; Para este estudio se utilizaron extremos pareados de unión múltiple http://qiime.org/scripts/multiple_join_paired_ends.html. Aronesty, E. ea-utils: Herramientas de línea de comandos para el procesamiento de datos de secuenciación biológica. Análisis de expresión, Durham, Carolina del Norte. (2011).</td></tr><tr><td>Paso 13.3.</td><td>Qiime</td><td>De-Novo OTU protocolo de selección</td><td>http://qiime.org/scripts/pick_de_novo_otus.html.</td></tr><tr><td>Paso 13.3.1.</td><td></td><td>Unidades taxonómicas abiertas (OTUs) usando Uclust</td><td>Edgar, R.C. Búsqueda y agrupación en órdenes de magnitud más rápido que BLAST. Bioinformática. 26 (19), 2460-2461, doi:10.1093/bioinformatics/BTQ461 (2010).</td></tr><tr><td>Paso 13.3.1.</td><td>Pynast</td><td>Pynast</td><td>Caporaso, J.G. et al. PyNAST: una herramienta flexible para alinear secuencias con una alineación de plantilla. Bioinformática. 26 (2), 266-267, doi:10.1093/bioinformatics/BTP636 (2010).&nbsp;</td></tr><tr><td>Paso 13.3.1.</td><td>Pynast</td><td>Pynast_Greengenes</td><td>DeSantis, T.Z. et al. Greengenes, una base de datos de genes de ARNr 16S verificada por quimera y un banco de trabajo compatible con ARB. Appl Environ Microbiol. 72 (7), 5069-5072, doi:10.1128/AEM.03006-05 (2006). En este estudio se utilizó la versión 13.3.1 de Greengenes</td></tr><tr><td>. Nota:&nbsp;</td><td>Qiime</td><td>Varias Bibliotecas Divididas http://qiime.org/scripts/multiple_split_libraries_fastq.html</td><td>.</td></tr><tr><td>13.3.1. Nota:&nbsp;</td><td>Qiime</td><td>Pick de novo OTUs script http://qiime.org/scripts/pick_de_novo_otus.html&nbsp</td><td>;</td></tr><tr><td>Paso 13.2.2.</td><td>Qiime</td><td>Cree un archivo de mapeo</td><td>http://qiime.org/documentation/file_formats.html.</td></tr><tr><td>Paso 13.2.2.</td><td>Qiime</td><td>Valida un archivo de mapeo</td><td>http://qiime.org/scripts/validate_mapping_file.html.</td></tr><tr><td>Paso 13.3.3.</td><td>Qiime</td><td>Vincule la OTU a la descripción de la muestra para el archivo de mapeo</td><td>http://qiime.org/scripts/make_otu_network.html.</td></tr><tr><td>Paso 13.3.4.</td><td>Resumir</td> los <td>taxones a través de parcelas</td><td>http://qiime.org/scripts/summarize_taxa_through_plots.html.</td></tr><tr><td>Paso 13.3.5.</td><td>Tabla de resumen del bioma</td> <td>Qiime</td><td>http://biom-format.org/documentation/summarizing_biom_tables.html&nbsp; En este estudio, todas las muestras se rarificaron a 20.000 OTUs seguidas de un análisis utilizando el script de rarefacción alfa en QIIME.</td></tr></tbody></table>

un método para definir los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad de microbioma de colon en un modelo de tumor de colon murino

A Method to Define the Effects of Environmental Enrichment on Colon Microbiome Biodiversity in a Mouse Colon Tumor Model

Varios estudios recientes han demostrado los efectos beneficiosos de vivir en un ambiente enriquecido en la mejora de la enfermedad humana. En ratones, enriquecimiento ambiental (EE) reduce tumorigenesis activando el sistema inmune del ratón, o afecta a la supervivencia animal de cojinete de tumor mediante la estimulación de la respuesta de reparación de herida, incluyendo diversidad mejorada del microbioma en el microambiente del tumor. Aquí es un procedimiento detallado para evaluar los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad del microbioma en un modelo de tumor de colon murino. Precauciones con respecto a la cría de animales y consideraciones para la integración de Colonia animal genotipo y ratón se describen, que en última instancia afectan biodiversidad microbiana. Teniendo en cuenta estas precauciones puede permitir la transmisión de microbioma uniforme más y por lo tanto aliviará los efectos del no tratamiento dependiente que pueden confundir los resultados del estudio. Además, en este procedimiento, cambios de la microbiota se caracterizan mediante secuenciación de ADNr 16S del ADN aislado de heces recogidas del colon distal tras enriquecimiento ambiental a largo plazo. Desequilibrio de microbiota intestinal se asocia con la patogenia de la inflamatoria intestinal enfermedad y cáncer de colon, sino también de obesidad y diabetes entre otros. Lo importante, este protocolo para el análisis de EE y microbioma puede ser utilizado para estudiar el papel de la patogenesia de microbioma a través de una variedad de enfermedades donde existen modelos de ratón robusto que puede recapitular la enfermedad humana.

Varios estudios han demostrado que la práctica de la medicina mente-cuerpo mejora los resultados de salud. De manera similar, en ratones, enriquecimiento ambiental mejora los resultados como mayor vida útil y reparación de tumor de la herida6. Por lo tanto, un procedimiento EE fue desarrollado con el objetivo de definir el papel de la microbiota en este fenotipo mientras que primera normalización del microbioma antes de la iniciación del experimento (<strong class=...

Enriquecimiento ambiental (EE) es un entorno de alojamiento de los animales que se utiliza para revelar los mecanismos que subyacen a las conexiones entre el estilo de vida, estrés y enfermedad. Este protocolo describe un procedimiento que utiliza un modelo de ratón de tumorigenesis colon y EE definir específicamente alteraciones en la biodiversidad de la microbiota que puede afectar la mortalidad de animales.

Un método para definir los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad de microbioma de Colon en un modelo de Tumor de Colon murino

Several recent studies have illustrated the beneficial effects of living in an enriched environment on improving human disease. In mice, environmental ...

El objetivo principal de esta publicación es presentar un método para normalizar el microbioma de los roedores. En esta demostración, se analiza el efecto del enriquecimiento ambiental en el microbioma durante la génesis del tumor de colon. Este protocolo muestra cómo la normalización del microbioma antes de una intervención de enriquecimiento ambiental mejora la reproducibilidad experimental.También mostramos cómo reducir el estrés de los animales y mejorar las interacciones utilizando un entorno enriquecido. Aunque nos hemos centrado en el efecto del enriquecimiento ambiental en un modelo de tumor de colon, el método se puede aplicar fácilmente para comprender mejor el papel del microbioma en la etiología de la enfermedad. Coloque las jaulas en condiciones estériles trabajando bajo una campana ventilada.Los controles para este experimento consisten en jaulas convencionales con ropa de cama y tejido de laboratorio para anidar, pero por lo demás carecen de dispositivos de enriquecimiento. Para configurar las jaulas de cría de cachorros o enriquecidas ambientalmente, conecte dos jaulas grandes esterilizadas en autoclave con un túnel asegurado con ojal esterilizado e incluya una plat

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Research

Investigación

JoVE Journal

Cancer Research

Investigación del cáncer

Se demuestra un protocolo en el que la administración del agente genotóxico azoximetano (AOM), seguido por tres ciclos de la sódico pro-inflamatoria agente sulfato de dextrano (DSS) rápida y consistente genera tumores de colon en ratones con similitudes morfológicas y moleculares a las que se observan en la colitis humana asociada a cáncer.

Modelado Colitis asociada a cáncer con azoximetano (AOM) y Sodio sulfato de dextrano (DSS)

Este video describe el protocolo de aislamiento de ADN de muestras de heces de ratones portadores de tumores de colon. El ADN extraído se amplifica mediante PCR y el producto se limpia aún más mediante un enfoque basado en perlas magnéticas. Este método se puede utilizar para determinar el efecto del enriquecimiento ambiental sobre la microbiota del colon y la mortalidad animal.

Aislamiento de ADN microbiano en heces: estudio del efecto del enriquecimiento ambiental en la diversidad del microbioma en un modelo de tumor murino

En este video, describimos un procedimiento quirúrgico para generar un bucle de colon proximal de ratón o un segmento pcLoop seguido de una inyección intraluminal de marcadores fluorescentes en el segmento para estudiar la permeabilidad epitelial intestinal.

Generación de un modelo de asa de colon proximal en ratón: un procedimiento quirúrgico para generar asa de colon proximal y medir la permeabilidad intestinal mediante la detección de marcadores fluorescentes en suero después de la inyección intraluminal

Este vídeo muestra un procedimiento de trasplante de microbiota fecal en un ratón con deficiencia de interleucina-10 e inflamación del colon. Los microbios fecales colonizados en el intestino liberan metabolitos secundarios, lo que provoca la liberación de citocinas antiinflamatorias y reduce la inflamación del colon.

Evaluación de los efectos del trasplante de microbiota fecal en un ratón con deficiencia de interleucina-10

Describimos métodos para la monitorización longitudinal de la eficacia de terapias para el tratamiento de patologías colónicas en ratones utilizando un endoscopio rígido. Este protocolo se puede utilizar fácilmente para la caracterización de la respuesta terapéutica de un tumor individual en ratones vivos y también para el seguimiento de una posible recaída de la enfermedad.

Evaluación no invasiva de la eficacia de nuevas terapias para Intestinal Patologías recurriendo a imágenes de Endoscópica serie de ratones vivos

El enriquecimiento ambiental para ratones requiere una configuración compleja y desafiante, así como técnicas integrales de manejo y manejo para asegurar efectos metabólicos y anticancerígenos robustos en los ratones. Este protocolo proporciona procedimientos detallados para reproducir los efectos mencionados anteriormente en ratones.

Un Protocolo para ratones Viviendas en un ambiente enriquecido

Los tratamientos actuales de las enfermedades inflamatorias intestinales (EII) tienen como objetivo aliviar los síntomas de la enfermedad, pero pueden causar efectos secundarios graves. Por lo tanto, las estrategias alternativas están siendo investigados en modelos animales con colitis. A continuación, explicamos cómo se analizan los efectos beneficiosos de los suplementos de la dieta en los signos clínicos de la EII en un modelo de este tipo colitis.

Analizar los efectos beneficiosos de los suplementos nutricionales sobre las funciones epitelial intestinal de barrera durante Experimental Colitis

En este artículo, presentamos un protocolo para establecer el modelo de ratón de colitis inducida por sodio, pseudo-germen, sulfato de dextrano libre de antibióticos, para investigar el papel de la microbiota intestinal en la regulación de los efectos positivos del Bacillus cereus sobre la colitis.

Investigación de los efectos paliantes de la administración de Bacillus cereus en la colitis a través de la modulación de la microbiota intestinal

Describimos un protocolo que detalla el aislamiento de criptas colónicas murinas para el desarrollo de colonoides tridimensionales. Los colonoides establecidos se pueden diferenciar terminalmente para reflejar la composición celular del epitelio del huésped antes de recibir un desafío inflamatorio o ser dirigidos a establecer una monocapa epitelial.

Estudio de los efectos epiteliales de la inflamación intestinal in vitro en colonoides murinos establecidos

Este protocolo describe los pasos necesarios para la colonización de ratones con pks+ Escherichia coli en condiciones no inflamatorias, así como métodos no invasivos para la validación de la colonización y evaluación de la expansión de pks+ E. coli en heces.

Colonización con pks+ Escherichia coli de Murina en condiciones no inflamatorias

Aprende a evaluar los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad del microbioma intestinal en un modelo de tumor de colon murino. Este protocolo mejora la reproducibilidad experimental mediante la normalización previa del microbioma.

Un método para definir los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad de microbioma de Colon en un modelo de Tumor de Colon murino (Video) | JoVE Journal

Un método para definir los efectos del enriquecimiento ambiental sobre la biodiversidad de microbioma de Colon en un modelo de Tumor de Colon murino

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