Un modelo murino Syngeneic bioluminiscente y fluorescente ortotópico de cáncer de próstata andrógeno-dependiente y resistente a la castración

El objetivo general de este procedimiento es realizar una inyección intraprostática de células cancerosas murinas para inducir la formación de tumores ortotópicos singénicos que puedan modelar tanto el cáncer de próstata dependiente de andrógenos como el resistente a la castración. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del cáncer de próstata, como qué impulsa el desarrollo del cáncer de próstata y qué tratamientos funcionan mejor para eliminar estos tumores. Las principales ventajas de esta técnica son que los tumores ortotópicos son genéticamente más complejos, se desarrollan en un microambiente tumoral clínicamente representativo y pueden ser modificados genéticamente antes de la inyección.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia del cáncer de próstata humano, ya que los tumores ortotópicos responden a las terapias de manera similar a la observada en pacientes humanos. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de los dedos de los pies, aplique ungüento en los ojos del ratón y afeite todo el pelaje del abdomen del animal. Esterilice la piel expuesta con tres rondas de exfoliante quirúrgico usando almohadillas estériles no adherentes seguidas de toallitas estériles con alcohol.

Cuando la piel esté seca, coloque el ratón en posición supina sobre una superficie limpia sobre una almohadilla térmica directamente debajo del objetivo de un microscopio quirúrgico limpio. Y cubra al animal con una cortina estéril con un pequeño agujero cortado sobre el abdomen. Realice una incisión de un centímetro en la piel externa y la musculatura abdominal interna a lo largo de la línea media del abdomen superior al pene y las glándulas prepuciales.

Localice una de las vesículas seminales bilaterales y los lóbulos de la próstata anterior adjuntos, que suelen ser posteriores, laterales y ligeramente superiores a la vejiga. Pídale a un asistente que mezcle la solución de células cancerosas MIC-CAP Matrigel con un pipeteo suave y que aspire lentamente 30 microlitros de células en una aguja de calibre 28 conectada a una jeringa de 50 microlitros. Luego, con las pinzas de tejido Graefe, levante suavemente la punta de una vesícula seminal para crear tensión en el tejido sin perforar la vesícula e inserte con cuidado el bisel de la aguja paralelo al eje largo del lóbulo prostático anterior. Inyecte lentamente todo el volumen de células en el lóbulo, seguido de una retracción lenta de la aguja para evitar fugas.

Una inyección exitosa será aparente por una congestión del lóbulo prostático anterior. Mantenga con cuidado y de manera constante la vesícula seminal y el lóbulo prostático inyectado fuera del ratón durante aproximadamente 30 segundos para permitir que el Matrigel se solidifique parcialmente dentro del lóbulo. Use un aplicador estéril con punta de poliéster para recolectar cualquier fuga de solución celular en el abdomen para prevenir el desarrollo de tumores no ortotópicos.

Una inyección intraprotésica precisa es fundamental para el desarrollo de tumores no ortotópicos. Tener especial cuidado para evitar perforar la vesícula seminal, inyectar lentamente la suspensión de células cancerosas y recoger cualquier fuga celular aumentará el éxito de este procedimiento. Ahora, regrese suavemente la vesícula seminal y el lóbulo inyectado al abdomen sin ejercer presión sobre el lóbulo y reemplace los tejidos externalizados.

Utilizando suturas de aguja de corte inverso absorbibles 5-0 vicryl, cierre la musculatura abdominal interna con puntos continuos seguidos de un cierre de la piel abdominal externa con puntos interrumpidos utilizando suturas de aguja de corte inverso no absorbibles de monofilamento de nailon 4-0. A continuación, administre analgesia postoperatoria y coloque al ratón en una jaula sin cama a mitad de camino sobre una almohadilla térmica con monitorización hasta la recuperación completa. La transfección estable de las células Myc-CaP para la luciferasa de luciferasa de luciérnaga y la expresión de mCherry permite que los tumores de próstata sean seguidos por bioluminiscencia y fluorescencia no invasivas in vivo.

Aquí se muestran tumores representativos diseccionados del abdomen el día 30 después de la inyección intraprostática. Con la técnica adecuada, el volumen y el peso del tumor se pueden registrar con un error estándar relativamente pequeño, aunque se espera cierta variabilidad entre las masas tumorales pequeñas y grandes. Las células cancerosas murino inyectadas por vía intraprostática también se pueden analizar mediante inmunohistoquímica para detectar la presencia de células T CD3 positivas infiltrantes del tumor u otras células inmunitarias de interés.

Además, este modelo proporciona un criterio de valoración objetivo de supervivencia, ya que la gran masa tumoral primaria causa ascitis abdominal hemorrágica y/o disminución del acicalamiento de la deambulación y/o piloerección. La castración tres días después de la inyección intraprostática da como resultado una regresión tumoral robusta, seguida de una eventual recurrencia tumoral después de aproximadamente 30 días, representativo del cáncer de próstata resistente a la castración. La disección y el análisis histológico de los tumores de cáncer de próstata resistentes a la castración no revelan diferenciación neuroendocrina, ya que los tumores mantienen niveles altos de receptores de andrógenos y son negativos para el marcador neuroendocrino sinaptofisina.

Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 20 a 30 minutos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar administrar analgésicos pre y postoperatorios y realizar todas las cirugías con técnica estéril y con la ayuda de un asistente quirúrgico. Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos como la inmunohistoquímica, la citometría de flujo y la evaluación del volumen y el peso del tumor y la supervivencia de los animales para responder preguntas adicionales sobre las respuestas a las inmunoterapias y otras terapias experimentales.

Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo inyectar células de cáncer de próstata en el lóbulo anterior de la próstata de ratones para una eventual castración quirúrgica y análisis de regresión y recurrencia tumoral. No olvide que trabajar con células cancerosas puede ser extremadamente peligroso y hay precauciones como usar el equipo de protección personal correcto, siempre se debe tomar mientras se realiza este procedimiento.