Hepatectomía parcial lobulado: Un modelo quirúrgico para regeneración hepática morfológico

El objetivo general de este procedimiento quirúrgico es inducir la regeneración morfológica del hígado mediante hepatectomía lobulillar parcial. Este método puede responder a preguntas clave en los campos de la biología de las células madre y la medicina regenerativa sobre la regeneración morfológica del hígado y las células madre específicas del hígado. Las principales ventajas de esta técnica son que es mínimamente invasiva y no requiere agresiones químicas ni cauterización.

Antes de tocar a los animales, frote la ropa de cama de la jaula de la madre sobre los guantes. Luego, transfiera todos los cachorros y algo de ropa de cama de la jaula de la madre a una jaula vacía encima de una almohadilla térmica. A continuación, coloque un cachorro bajo un microscopio de disección.

Después de confirmar el nivel adecuado de sedación por falta de respuesta al pinzamiento de los dedos del pie, utilice una pequeña gasa para desinfectar la pared abdominal posterior del animal con betadine. Use tijeras y pinzas de microdisección para hacer una incisión de medio centímetro en el clavicular medio izquierdo inmediatamente debajo de la caja torácica. Use las pinzas para separar suavemente la piel.

A continuación, haga una segunda incisión más profunda en la cavidad peritoneal y utilice el borde romo posterior de las tijeras y pinzas de microdisección para aplicar una suave presión lateral a ambos lados del abdomen, forzando el vértice del lóbulo izquierdo fuera de la cavidad peritoneal. Cuando el ápice izquierdo del lóbulo izquierdo sea visible, amputar la cantidad experimental apropiada de tejido del lóbulo y colocar el tejido en un tubo de 1,5 mililitros de PBS en hielo. Con un trozo de gasa enrollado, regrese suavemente el lóbulo izquierdo a la cavidad peritoneal.

Retire la gasa cuando se detenga el sangrado y humedezca el sitio quirúrgico y el área circundante con una gasa empapada con PBS. Cierre el sitio quirúrgico con suturas y un punto de sutura. Luego, pase suave pero completamente una gasa empapada en PBS sobre el cachorro y el sitio de la herida, asegurándose de que no quede sangre o betadine.

Permita que el cachorro se recupere cerca de las gasas expuestas a las heces y la orina de la madre. Cuando todos los cachorros hayan sido hepatectomizados, devuelva todos los animales y la ropa de cama a la jaula de la madre. Después de pesar los lóbulos, fije las muestras de tejido en paraformaldehído al 2% durante una hora a temperatura ambiente.

Al final de la fijación, transfiera los tejidos a moldes de congelación individuales que contengan un medio de temperatura de corte óptimo para congelar sobre hielo seco. Y adquiera secciones de 7 a 10 micrómetros de cada lóbulo utilizando cualquier criostato estándar. Revise a los cachorros diariamente durante al menos 56 días para confirmar que sus heridas permanecen cerradas e inyecte analgesia 24 y 48 horas después de la cirugía.

En el punto final experimental apropiado, coseche y pese el hígado de cada cachorro en el bloque. A continuación, separe cuidadosamente cada lóbulo individual en su inserción proximal y compare la masa del lóbulo izquierdo amputado con la masa de todo el hígado para determinar el grado de regeneración en cada lóbulo. La regeneración sutil del lóbulo izquierdo se puede observar de 7 a 14 días después de la cirugía y a menudo se observa una regeneración completa después de 56 días.

No hay diferencias significativas en las áreas de hepatocitos en el hígado regenerado reveladas por el análisis histológico. Además, las inyecciones de EdU en ratones neonatos indican un aumento significativo en el número de células proliferantes en el lóbulo izquierdo lesionado en regeneración en comparación con los controles no lesionados, lo que sugiere que la proliferación celular contribuye a la regeneración del lóbulo izquierdo en los recién nacidos. Sin embargo, la hepatectomía en ratones juveniles postnatales de día 14 da como resultado una disminución de la regeneración en el lóbulo izquierdo con una mayor compensación de los lóbulos no lesionados.

Lo que indica que a los 14 días la respuesta de la lesión a la resección aguda cambia de la regeneración específica del lóbulo a la compensación global. Una vez dominada, esta técnica se puede completar en 15 minutos si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante tener el mayor cuidado posible para no causar estrés adicional a la madre o a los cachorros.

Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como hepatedas seriadas o lesiones hepáticas crónicas, para evaluar mejor el potencial regenerativo del hígado. Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la biología de células madre exploraran la regeneración hepática en el ratón neonatal. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo completar una amputación controlada específica del lóbulo del hígado de ratón neonatal.

No olvide que trabajar con isoflurano es extremadamente peligroso y siempre se deben tomar precauciones como una mascarilla y guantes al realizar este procedimiento.