Name: Protocolo de aguda y crónica pruebas de ecotoxicidad de los killis turquesa Nothobranchius furzeri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-24T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Aprende bioensayos agudos y crónicos en ecotoxicología utilizando Nothobranchius furzeri. Este método evalúa mortalidad, crecimiento y fecundidad para comprender los efectos multigeneracionales de toxicantes ambientales.

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Agradecemos al grupo de la esfera de la UAntwerpen y el Departamento de protección de cultivos de todo el análisis de muestras de agua. Durante este proyecto fue apoyado por el centro de excelencia ' Eco y dinámica socio-evolutiva (PF/10/007) del fondo de investigación de KU Leuven. AFG (11Q0516N) y ESJT (FWO-SB151323) fueron financiados como doctorado y TP (12F0716N) como becario post-doctoral por FWO Flandes (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek).

Todos los métodos aquí descritos han sido aprobados por el Comité de ética de KULeuven.
1. eclosión y mantenimiento General de furzeri N.
<ol><li>Preparar pescado mediano (pH 7) a una temperatura de 14 ° C y añadir agua purificada del tipo II, con añadido sales estandarizados, a una conductividad de 600 μS/cm (24 ° C).</li>
	<li>Seleccione los huevos de la línea de laboratorio GRZ (Gona-Rhe-Zhou) que han sido almacenadas bajo condiciones estandarizadas13. Seleccione los huevos en la etapa DIII (es decir, listo para eclosionar), reconocible por la presencia de ojos dorados9 y suavemente transferirlos con un suave pinzas a un tanque plástico de 2 L (a no más de unos 30 huevos por tanque). Nota: Para tener un número suficiente de organismos de prueba sana, incuban huevos dos veces tantas como el número de larvas de peces requiere.</li>
	<li>Añadir 1 cm del medio pescado a 12 ° C y deje que la temperatura del agua gradualmente convergen a temperatura ambiente (24 ° C)9. Peces eclosionan dentro de las primeras 12 h.</li>
	<li>Después de 24 h, alimentación de las crías una dosis concentrada de recién nacidos Artemianauplii (para más detalles sobre la frecuencia y cantidad de alimentos, consulte el protocolo de cría de Polačik et al. 20169) y aumentar la profundidad del agua a 5 cm de Añadir el medio pescado.</li>
	<li>Después de 36 h, alimentar a las crías otra dosis concentrada de recién nacidos nauplios de Artemia y añadir medio de peces para aumentar la profundidad del agua a 10 cm.</li>
	<li>Incubar los envases de pescado bajo condiciones de temperatura constante (por ejemplo, en una incubadora, sala de clima o baño de agua caliente) bajo un 14 h:10 h régimen de luz: oscuridad.</li>
	<li>Antes del inicio del experimento, contenedores de pescado complejo (sin peces) con la exposición compuesta por relleno con la más alta concentración del medio de exposición y dejarla toda la noche para limitar a la transferencia de sustancias tóxicas en el contenedor en el real experimento.</li>
	<li>48 h después de la eclosión, seleccione sanas larvas flotantes para comenzar el experimento de exposición. Descartar llamados deslizadores de vientre que no pudieron llenar su vejiga natatoria y por lo tanto tener una flotabilidad deteriorada (continuamente se hunda hasta el fondo).</li>
</ol>2. corta duración exposición protocolo
Nota: Los investigadores deberían orientarse para por lo menos 20 repeticiones (20 peces en recipientes separados) por tratamiento. Además de un tratamiento de control total, un control de solvente debe incluirse si la solución del compuesto es preparada usando un solvente. El control solvente debe contener la cantidad de disolvente la concentración de solvente en la mayor concentración de la exposición del mismo.
<ol><li>Preparar los envases experimentales (tarros de cristal de 0,5 L) por los de etiquetado y llenado con el medio de exposición adecuado (diferentes concentraciones de sustancias tóxicas). Añadir el compuesto para obtener la concentración correcta.</li>
	<li>Transferencia de larvas (48 h después de la trama) individualmente a los contenedores (1 pez por el envase para el seguimiento individual). Nota: Los peces exponen individualmente para minimizar los posibles efectos de confusión de la interacción social como la competencia por alimento y agresión. Sin embargo, peces pueden interactuar visualmente de acuerdo a normas éticas para el uso de animales de laboratorio.</li>
	<li>Seguimiento de la exposición aguda de hasta 2 semanas de duración. Durante ese tiempo, alimentar a los peces ad libitum con nauplios de Artemia dos veces al día, 7 días a la semana.</li>
	<li>Actualizar el medio día para mantener la calidad del agua y para minimizar los efectos potenciales de la degradación de compuestos. Monitorear variables de agua (niveles de oxígeno disuelto deben superar el 80%, conductividad debe estar comprendida entre 600 y 700 μS/cm, pH entre 7.8 y 8.2 y dureza (como CaCO3) entre 350 y 450 mg/L, que se encuentra dentro del rango de condiciones óptimas de crianza para furzeri N. 9). Tomar muestras de agua antes y después de refrescar el medio para determinar las concentraciones reales de compuesto.</li>
	<li>Criterios de valoración<ol>
<li>Ver peces para mortalidad, estrés (e.g. comportamiento aberrante: natación boca abajo) o enfermedad diariamente (mañana, tarde). Consulte la publicación de Shedd et al. (1999) 12 para más detalles sobre la observación de la mortalidad, el estrés o la enfermedad.</li>
		<li>Calcular LC50 valores basados en la mortalidad usando curvas de dosis-respuesta (Ritz y Streibig, 2005) en diferentes puntos temporales. Utilice la función de drm en el paquete de República Democrática del Congo en R v3.2.3 (equipo de núcleo de desarrollo R, 2016) o métodos estadísticos similares.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. crónica de la exposición protocolo
Nota: Apuntar a un mínimo de 25 peces o condición en el inicio del experimento, para reducir al mínimo las posibilidades de una proporción de sexos sesgada y para acomodar la mortalidad potencial de fondo debido a causas naturales (es decir. mortalidad relacionada con la edad).
<ol><li>Eclosión (ver sección 1)</li>
	<li>Fase I (2 días post eclosión-16 días post eclosión)<ol>
<li>Seguir el protocolo como se describe en 2.1-2.4</li>
		<li>Como durante la segunda fase del experimento, el medio se degrada a lo largo de la semana (no refresco, ver más abajo). Almacenar la cantidad necesaria del medio durante una semana en grandes contenedores inertes para permitir similar degradación del compuesto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fase II (16 días post eclosión-final)<ol>
<li>Preparar L 2 les frascos de vidrio experimental por formación de complejos con el compuesto. Llene los frascos con el medio de la exposición correcta y agregar un tubo de aire para airear la jarra. Pescado de casa individual en estos frascos para el resto del experimento. Permiten la interacción visual dar cabida a normas éticas.</li>
		<li>Actualizar el medio una vez por semana. Transferencia de los peces con una red a un nuevo frasco conteniendo el mismo medio de exposición. Tomar muestras de agua cada día durante una semana para controlar la degradación del compuesto en cada tratamiento de concentración. Calcular una curva de degradación para cada tratamiento si son estresores múltiples pruebas (por ejemplo, la toxicidad de un compuesto en diferentes temperaturas). Medir parámetros abióticos (pH, temperatura, oxígeno % disuelto, conductividad) tres veces por semana.</li>
		<li>De 2 días post eclosión (dph) hasta 23 dph, alimentar a los peces dos veces al día, 7 días a nauplios de Artemia ad libitum de la semana. Del dph 24 - 37 dph, complementar la dieta ad libitumArtemia con larvas de Chironomus picaditas. De 38 dph en, alimentar a los peces dos veces al día, 7 días por semana ad libitum congelado larvas de Chironomus .</li>
	</ol>
</li>
	<li>Criterios de valoración<ol>
<li>Compruebe diariamente pescado de mortalidad, el estrés o la enfermedad12.</li>
		<li>Para determinar el crecimiento, medir el tamaño del cuerpo sobre una base semanal (9 dph - 16 dph - 21 dph -...) mediante la transferencia de peces a una placa Petri con medio de su depósito. Tomar 4-5 fotos de tamaño calibrado de los peces desde arriba (a una altura fija) y analizar digitalmente utilizando un programa de medición espacial (e.g. ImageJ). Nota: Para peces adultos, utilice una placa de Petri superior para minimizar el estrés de manejo manteniendo todos los peces sumergidos durante todo el proceso de medición.</li>
		<li>Para la maduración hombre, visualmente peces diariamente para la coloración de dph 15 adelante. Compruebe las aletas para primeros signos de coloración nupcial (característica sexual secundaria). Uso el primer día en que esto es visible como un proxy para el tiempo de maduración hombre.</li>
		<li>Pareja peces no sexadas con machos del mismo grupo de tratamiento o no experimental varones tres veces por semana de 30 dph a partir para determinar el tiempo de maduración femenina (el día que se deposita el primer huevo). Para ello, utilizar el protocolo de desove en 3.4.5.</li>
		<li>De fecundidad, pareja madura las hembras con los machos maduros 3 veces / semana desde 30 dph, dentro de sus tratamientos mediante un esquema de cruce.<ol>
<li>Preparar un tanque de desove (1 L) para cada pareja, por medio de la exposición del hombre acuario con sustrato de desove (arena fina < 500 μm).</li>
			<li>Transferir el macho y la hembra en el tanque de desove y que puedan desovar durante dos horas. Minimizar la actividad humana o perturbación alrededor de los recipientes de desove durante este proceso.</li>
			<li>Luego, suavemente transferencia de peces hacia sus envases originales de la vivienda, sin mezcla innecesaria del agua, que se giran los huevos en el sustrato de desove.</li>
			<li>Filtrar los huevos por el sustrato de desove que vierte sobre una malla de 500 μm. Contar los huevos y transferirlas (usando pinzas suaves) a húmedo musgo de turba en platos de Petri9,14.</li>
			<li>Retirar los huevos muertos diariamente. Después de una semana, seal el Petri dish con película y almacenar en una temperatura controlada incubadora a 28 ° C y una 14:10 h luz: oscuridad del ciclo de desarrollo inmediato a la fase DIII (es decir, listo para eclosionan después de aproximadamente tres semanas). Para el almacenamiento a largo plazo, almacenar los huevos a 17 ° C en oscuridad constante que huevos de entran en la fase latente y permanecerán viables durante varios años. Cuando reclutamiento de peces de estos huevos latentes para experimentos, transferir los huevos latentes a 28 ° C condiciones con 14:10 h luz: oscuridad del ciclo durante aproximadamente tres semanas permitir el desarrollo a la fase DIII.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Medir el máximo térmico crítico (CTmax) (una medida de rendimiento15) de peces adultos.<ol>
<li>Utilizar un baño de agua que se calienta a un ritmo constante de 0,33 ° C/min y en la que se circula continuamente el agua. Añadir varios acuarios de 1 litro para cada pez individual. Nota: Dadas las limitaciones de espacio en el baño de agua, es necesario trabajar en varias series. Diferencias de potencial en condiciones entre series deben tenerse en cuenta al realizar el análisis estadístico mediante la inclusión de 'series' como un factor aleatorio.</li>
			<li>Iniciar el juicio mediante la adición de los peces del acuario cuando el agua en el acuario haya alcanzado la temperatura experimental de cría de los pescados (generalmente 28 ° C). Controlar la temperatura en los acuarios de 1 L de la bañera CTmax cada 5 minutos usando un termómetro digital (escala de 0.1 ° C).</li>
			<li>Termina el juicio cuando el pez es incapaz de mantener una posición dorso-ventral o comienza crispando mucho16,17. Medir la temperatura en el acuario de 1 L, que es la temperatura máxima crítica. Transferir el pescado a su vivienda experimental para la recuperación.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Medir el peso (precisión de 0,1 mg) de los peces en el último día del experimento acariciando seca y transfiriendo en un barco de pesaje. Nota: Todos los peces deben medirse cuatro horas después de la última alimentación para normalizar el peso del alimento en el tracto intestinal.</li>
		<li>Eutanasia el pescado utilizando 0.1% Tricaine.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Protocolo de exposición transgeneracional
Nota: Para medir los efectos transgeneracionales de contaminantes en N. furzeri, siga el protocolo de la exposición crónica se ha señalado anteriormente para la primera generación.
<ol><li>Dos veces por semana, comprobar el desarrollo de los huevos producidos (es decir, la segunda generación) a 28 ° C 14:10 condiciones de ciclo de h luz: oscuridad mediante la inspección de las cajas Petri para los embriones en la fase DIII (ver Polačik et al. 20169). Cuando más de 50 repeticiones de cada tratamiento los padres están completamente desarrolladas, portilla les siguiendo el protocolo en 1.1.</li>
	<li>Exponer el pescado sano, boyante a exactamente la misma configuración y tratamiento como el pez de paterno.</li>
</ol>

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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este trabajo describe un nuevo bioensayo usando Nothobranchius furzeri, un organismo modelo emergente, para estudiar al individuo y combina efectos a largo plazo de sustancias tóxicas y otros estresores. Los protocolos presentados fueron aplicados con éxito para medir la sensibilidad de las especies a una gran variedad de sustancias tóxicas (cobre, cadmio, 3, 4-dicloroanilina y clorpirifos). Debido a su rápido ciclo de vida, este modelo vertebrado permite evaluación de subletales y efectos transgeneracionales de...

Perfiles de sensibilidad de una gran variedad de especies a sustancias tóxicas estratégicamente seleccionados han sido descritos1 para la legislación de alcance europeo (registro, evaluación, autorización y restricción de productos químicos). Pruebas de toxicidad aguda o a corto plazo se utilizan principalmente para este propósito ya que dan una indicación rápida de la sensibilidad de una especie. Sin embargo, en su ambiente natural, los organismos están expuestos durante períodos mucho más prolongados y ciclo de vida completo o incluso varias generaciones podrían ser afectado2. Además, organismos en ambientes contaminados por lo general están expuestos a más de un factor estresante a la vez, que puede interactuar con los demás, posiblemente dando por resultado efectos sinérgicos3. Por lo tanto, concentraciones seguro calculado estresor agudo, solo en base a las pruebas de toxicidad pueden subestimar los riesgos reales impuestos por sustancias tóxicas en ambientes naturales. Por lo tanto, es conveniente también estudiar los efectos crónicos y multigeneracionales de concentraciones subletales de sustancias tóxicas en un contexto ambientalmente relevante como defendido por la Comisión Europea4,5 y la USEPA (United Agencia de protección ambiental de los Estados)6,7. Especialmente en la investigación vertebrada, los costes en términos de mano de obra, tiempo y dinero son altos cuando se realizan estudios de exposición crónica y múltiples generaciones debido a la vida útil relativamente larga de los vertebrados frente a los organismos modelo de invertebrado. Por lo tanto, es aconsejable elegir el organismo de modelo más apropiado de pescado, dependiendo de la pregunta de investigación. Además, una amplia gama de especies de vertebrados debe estar disponible para poner a prueba la generalidad de las respuestas a través de especies para poder adaptar reglamentos basados en las especies más sensibles. Por ahora, hay una necesidad de desarrollar nuevos protocolos eficientes con especies de vertebrados modelo caracterizados por ciclos de vida cortos para bajar los costos de realizar exposiciones crónicas y multigeneracionales en vertebrados7,8.
Los killis turquesa Nothobranchius furzeri es un interesante modelo de pescado para utilizar en tales experimentos de exposición a largo plazo debido a su tiempo de maduración corta y ciclo de vida (tiempo de generación menor de 4 semanas9). Esto significa que se pueden estudiar dentro de un marco de tiempo corto comparado con otros modelos de pescado7extremos ecológicamente relevantes como tiempo de maduración y fecundidad. Además, estos peces producen huevos resistentes a la sequía, latentes que permanecen viables durante varios años cuando se almacena bajo condiciones estándar, eliminando así la necesidad de una cultura continua9. En estudios ecotoxicológicos, esto también implica replicar peces pueden todos ser tramados en el momento exacto de la misma, resultando en sincronía de tiempo para todos los animales, incluso entre lotes de huevos producidos en diferentes épocas. Aconsejamos utilizar el laboratorio cepa GRZ para realizar experimentos de exposición. Esta variedad funciona bien bajo condiciones de laboratorio, es homocigótica (excepto los cromosomas sexuales) y el genoma es bien caracterizado10,11.
En estudios ecotoxicológicos, es importante seleccionar el rango de concentraciones de ensayo apropiado. Varios métodos complementarios pueden utilizarse para este fin. La gama de concentración nominal puede basarse en la sensibilidad de una especie relacionada, como Nothobranchius guentheri12. Por otra parte, la gama puede basarse en la sensibilidad de los modelos estándar de peces, como el pez cebra (Danio rerio)2 que tiene una sensibilidad comparable a la mayoría de sustancias tóxicas (Philippe et al. (en revisión)). En combinación, con dos de estas opciones, deberá realizarse un experimento Rangefinding para seleccionar el rango de la concentración nominal. Para el análisis agudo, investigadores deberían apuntar para los tratamientos de concentración con 100% de mortalidad, mortalidad intermedia y 0% de mortalidad después de 24 h de exposición a la sustancia tóxica. Para pruebas crónicas, es recomendable ejecutar el Rangefinding experimento durante dos semanas verificar si mortalidad larvaria en la condición con las concentraciones más altas de la prueba no exceda del 10% durante este período de referencia.
El protocolo puede servir como base para realizar la exposición aguda y crónica a contaminantes transmitidas por el agua en N. furzeri, examinar los posibles efectos de los estresores a nivel individual y celular. También puede ser utilizado para realizar investigaciones multi-estresor para dar cabida a una mayor relevancia ecológica, mezcla de diferentes compuestos tóxicos o estudiar los efectos interactivos entre la contaminación y otros factores de estrés naturales (p. ej. depredación) o antropogénico factores de estrés (p. ej. calentamiento debido al cambio climático).

<table><tbody><tr><td>agua purificada Tipo 1 (mili Q)</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sea Salt</td><td>Instant Ocean</td><td></td><td></td>Tanque</tr> de <tr><td>plástico</td><td>SAVIC</td><td></td><td>Siempre separado material para tratamientos de control y toxicidad Tanque de</td></tr><tr><td>plástico de 1L (desove)</td><td>Avamoplast</td><td></td><td>Siempre material separado para el control y los tratamientos de toxicidad</td></tr><tr><td>redes Aqua</td><td>bilzen</td><td></td><td>Material siempre separado para tratamientos de control y toxicidad</td></tr><tr><td>Tarros de vidrio de 2L</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>Material siempre separado para tratamientos de control y toxicidad</td></tr><tr><td>Tarros de vidrio de 0,5L</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>Material siempre separado para los tratamientos de control y toxicidad</td></tr><tr><td>Huevos de Artemia</td><td>Quirónomo</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ocean Nutrition Ocean Nutrition</td><td></td><td>congelados</td></tr><tr><td>tricaine</td><td>Sigma aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>placas de Petri</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Pipetas VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Pinzas MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td></td><td></td></tr><tr><td>500 &micro; tamiz de malla m</td><td>/</td><td></td>tubo de <td></td></tr><tr><td>microcentrífuga de fabricación propia (2 ml)</td><td>MARCA</td><td></td><td>Para almacenar pescado en frascos</td></tr><tr><td>de vidrio para</td> congelador <td>Sigma aldrich</td><td></td><td>Para análisis de agua</td></tr><tr><td>barco de pesaje</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jiffy 7c pellets</td><td>Jiffy</td><td></td><td></td></tr> baño <tr><td>de agua</td><td>Gilac</td><td></td><td>para</td></tr><tr><td>nitrógeno líquido Ctmax</td><td>Termómetro digital Air Liquide</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Testo AG</td><td>testo 926</td><td></td></tr><tr><td>HETO Calentador térmico</td><td>Anker Schmitt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Balanza calibrada</td><td>Mettler-Toledo AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cámara</td><td>/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>plataforma para cámara</td><td>/</td><td></td><td>Fabricación propia</td></tr><tr><td>Kit multiparamétrico</td><td>HACH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Congelador (-80 ° C; C)</td><td>Panasonic Ultra low temperature freezer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Número de catálogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Fysio</td>homogeneisation buffer VWR <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>0.1&nbsp; M TRIS&ndash; HCl, pH 8.5, 15&nbsp;% polivinil pirrolidona, 153&nbsp; y micro; M MgSO4&nbsp; y 0,2&nbsp;% Triton X-100</td></tr><tr><td>cloroformo:metanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>tripalmitato de glicerilo</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>amiloglucosidasa</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7420</td><td></td></tr><tr><td>reactivo de ensayo de glucosa</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G3293</td><td></td></tr><tr><td>Biorad colorante proteico</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de microtitulación de 96 pocillos</td><td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>384 placas de microtitulación</td><td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 ml tubos de vidrio</td><td>Fiers</td><td></td><td>Para el análisis de grasa</td></tr><tr><td>2,5 ml Tubos eppendorf Homogeneizador</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ultra-turrax Fotoespectrómetro TP 18/10</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Infinite M200 Calentador TECAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>para tubos de vidrio</td><td>Centrífuga Hach COD REACTOR</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Centrífuga Eppendorf 5415 R</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Bumako</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protocolo de aguda y crónica pruebas de ecotoxicidad de los killis turquesa nothobranchius furzeri

Protocol for Acute and Chronic Ecotoxicity Testing of the Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

Los killis Nothobranchius furzeri es un organismo modelo emergente en el campo de la ecotoxicología y ha demostrado su aplicabilidad en las pruebas de ecotoxicidad aguda y crónica. En general, la sensibilidad de las especies a los compuestos tóxicos es en la gama, o más, que otras especies modelo.
Este trabajo describe los protocolos de bioensayos agudos, crónicos y multigeneracionales de efectos individuales y combinados estresor en N. furzeri. Debido a su tiempo de maduración corta y ciclo de vida, este modelo vertebrado permite el estudio de como tiempo de maduración y fecundidad dentro de cuatro meses. Ensayos de exposición de todo el ciclo de vida transgeneracional se pueden realizar en tan poco como 8 meses. Puesto que esta especie produce huevos que son resistentes a la sequía y permanecer viable durante años, el cultivo in situ de las especies no es necesario pero los individuos pueden ser reclutados cuando sea necesario. Los protocolos están diseñados para medir rasgos de historia de vida (mortalidad, crecimiento, fecundidad, peso) y máximo térmico crítico.

Los resultados de la exposición aguda de N. furzeri a diferentes concentraciones de cobre, calcula como 2.5.2, mostrar las relaciones cleardose-respuesta (figura 1). Hay un aumento en la mortalidad con el aumento de concentración de sustancias tóxicas. Valores de LC50 disminuyen con el tiempo, lo que significa que con la disminución de las concentraciones, más tiempo pasa antes de 50% de la matriz de repeticiones. Para los resultados detal...

En este trabajo describimos un bioensayo agudo, crónico y multigeneracional para estudiar los efectos de los estresores individuales y combinados en los killis turquesa Nothobranchius furzeri. Este protocolo está diseñado para estudiar características de historia de vida (mortalidad, crecimiento, fecundidad, peso) y máximo térmico crítico.

Protocolo de aguda y crónica pruebas de ecotoxicidad de los killis turquesa Nothobranchius furzeri

The killifish Nothobranchius furzeri is an emerging model organism in the field of ecotoxicology and its applicability in acute and chronic ecotoxicity ...

El objetivo general de este experimento es estudiar los efectos de los tóxicos en el killi turquesa Nothobranchius furzeri. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo de la ecotoxicología, como los efectos a largo plazo de los factores estresantes en rasgos importantes de la historia de vida, ya sea el tiempo de maduración, el crecimiento o la fecundidad. La principal ventaja de este experimento es que utilizamos un vertebrado con un ciclo de vida muy rápido, lo que resulta en experimentos eficientes en tiempo y costo.Estos killis son modelos ideales para estudiar el impacto de los efectos a largo plazo y multigeneracionales de los factores estresantes. En última instancia, contribuirán a una mejor comprensión del impacto ambiental de los tóxicos. Aunque este método puede proporcionar nuevos conocimientos sobre los efectos combinados de los tóxicos y la temperatura, también se puede aplicar a otros factores estresantes como la radiación UV, la privación de alimentos y las alteraciones del PH.Es difícil trabajar con killis, porque son un nuevo sistema modelo en ecotoxicología, y porque su sensibilidad a muchos contaminantes aún se desconoce. Desarrollamos la id

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Este estudio se refiere al desarrollo y la estandarización de un protocolo metodológico para determinar el valor a largo plazo (14 días) toxicidad letal ejercida por las sustancias químicas, aguas residuales industriales o de aguas residuales y líquidos de muestras ambientales en el crustáceo de agua...

A largo plazo Prueba de toxicidad letal con el Crustáceo Artemia franciscana</em

La medición de los impactos de los contaminantes ambientales en el comportamiento de los peces es a menudo subjetiva y desafiando particularmente cuando se trata de efectos sub-letales. Se describen métodos que incluyen la tecnología de video para cuantificar el comportamiento natatorio de la vida temprana etapa de esturión blanco (Acipenser transmontanus) durante y después de 96 horas la exposición aguda a varias concentraciones de cobre.

La cuantificación de Natación de peces comportamiento en respuesta a la exposición aguda acuosa de cobre usando asistida por ordenador y vídeo digital Análisis de Imágenes

Los compuestos alteradores endocrinos (EDC) representan un riesgo considerable para el medio ambiente acuático. plantas de tratamiento de aguas residuales municipales son los principales contribuyentes a la potencia estrogénica de las aguas superficiales. La metodología proporcionada en este documento permite una evaluación de la eficacia e idoneidad de los procesos de tratamiento de aguas residuales con respecto a la eliminación de la EDC.

El uso de una batería de químicos y ecotoxicológicos Métodos para la Evaluación de la eficacia de procesos de tratamiento de aguas residuales para quitar potencia estrogénica

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Este trabajo describe un nuevo protocolo para evaluar la ecotoxicidad de contaminantes, incluyendo contaminantes emergentes como nanomateriales, utilizando la bacteria marina Vibrio anguillarum . Este método permite determinar la CL 50 , o mortalidad, la concentración que causa una disminución del 50% en la cultivabilidad de las bacterias, después de una exposición de 6 h.

Método ecotoxicológico con bacterias marinas<em&gt; Vibrio anguillarum</em&gt; Evaluar la Toxicidad Aguda de los Contaminantes Ambientales

Vivienda de laboratorio de turquesa killis pueden ampliarse a la casa y eficientemente recaudar miles de peces individuales en un sistema de filtración de agua centralizado, utilizando la misma infraestructura que se utiliza para las instalaciones estándar de pez cebra. Aquí detallamos una lista de procedimientos estandarizados que permiten killis eficiente mantenimiento.

Un protocolo de laboratorio vivienda de turquesa killis (Nothobranchius furzeri)

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Metodologías ecotoxicológicas para evaluar biomarcadores a diferentes escalas en anuros neotropicales

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Ensayos de citotoxicidad con líneas celulares de pez cebra

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Evaluación de la Neurotoxicidad en Danio rerio Adulto mediante una Batería de Pruebas de Comportamiento en un Tanque Único

Este protocolo describe un procedimiento de cribado de fármacos en larvas de pez cebra 3-7 días después de la fecundación, seguido de una evaluación morfológica.

Cribado de moléculas pequeñas y pruebas de toxicidad en larvas de pez cebra en fase inicial

Aprende bioensayos agudos y crónicos en ecotoxicología utilizando Nothobranchius furzeri. Este método evalúa mortalidad, crecimiento y fecundidad para comprender los efectos multigeneracionales de toxicantes ambientales.

Protocolo de aguda y crónica pruebas de ecotoxicidad de los killis turquesa Nothobranchius furzeri

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