Un modelo de ratón de la obstrucción Intestinal parcial

El objetivo general de este procedimiento quirúrgico es producir de manera confiable y consistente obstrucciones intestinales en ratones que faciliten el estudio de los cambios moleculares y fenotípicos en el tejido gastrointestinal que ocurren en respuesta a las obstrucciones. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo gastrointestinal en torno a los mecanismos celulares que subyacen a los cambios fenotípicos que resultan de la obstrucción intestinal. Las principales ventajas de esta técnica es que es fiable, replicable y rentable.

Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia el tratamiento de la obstrucción intestinal, ya que imitan las condiciones fenotípicas observadas en las patologías humanas causadas por la obstrucción intestinal. Para demostrar este procedimiento estarán Se Eun Ha, un postdoctorado, y Lai Wei, un estudiante graduado, ambos de nuestro laboratorio. Después de confirmar la falta de respuesta al pellizco de los dedos de los pies, aplique ungüento en los ojos del animal y coloque el ratón sobre una almohadilla térmica.

Retirar el vello del abdomen con crema depilatoria y limpiar la piel expuesta con etanol al 70%. Desinfecte el sitio quirúrgico con una solución de povidona yodada y cubra al animal con un papel estéril de 25 por 50 centímetros con una abertura de 2,5 por 2,5 centímetros para el área quirúrgica. Asegure el paño con tiras estériles en los límites de la abertura y la piel y use una hoja de bisturí número 15 para hacer una incisión longitudinal de tres centímetros en la piel.

Con ayuda de pinzas y tijeras quirúrgicas, separe cuidadosamente la piel de la capa musculoperitoneal sin incidir el tejido y localice la línea alba. A continuación, utilice micropinzas y tijeras para cortar dos centímetros a lo largo de la línea alba para exponer la cavidad intraperitoneal y localizar cuidadosamente el ciego. Utilice las micropinzas para mover lenta y suavemente el ciego, el colon proximal y el íleon desde el interior de la cavidad intraperitoneal sobre el paño estéril y humedecer inmediatamente el tejido intestinal con una gasa estéril empapada en solución salina al 0,9%.

Localice el mesenterio entre el íleon y el colon proximal y haga una incisión de un centímetro en el mesenterio paralela y justo debajo del íleon, teniendo cuidado de evitar cortar cualquier vasculatura. Corte longitudinalmente para abrir el vaso mesentérico y use micropinzas para abrir un anillo de silicona esterilizado en autoclave del tamaño adecuado. Inserte un extremo del anillo a través de la incisión y ponga el extremo del anillo en contacto con el primer extremo para devolver el instrumento a su forma original.

Confirme que el anillo está rodeando completamente el íleon y cierre el anillo con una sutura. Las incisiones en el mesenterio deben ser lo suficientemente grandes como para que el anillo quepa, pero lo suficientemente pequeñas como para que no se abran cortesías en los vasos sanguíneos. También asegúrese de que el anillo esté colocado en el íleon, no en el colon.

Vuelva a colocar los intestinos en su ubicación anatómica original y utilice una sutura reabsorbible en un simple punto continuo para cerrar la capa musculoperitoneal a lo largo de la línea alba. Limpie cualquier sangrado con una gasa estéril empapada en solución salina al 0,9% y use una nueva sutura de nailon y una sutura continua simple para cerrar la piel. A continuación, desinfecte el sitio de la herida con povidona yodada e inyecte antibióticos antes de colocar al animal en una puerta de calentamiento con monitoreo hasta que esté completamente recostado.

En este experimento, el intestino delgado se llenó parcialmente y se distendió a los ocho días después de la cirugía de obstrucción parcial y se llenó y distensió completamente a los 13 días después de la cirugía de obstrucción parcial en comparación con los animales de control operados simuladamente. Además, la formación de gránulos fecales en el colon de los ratones del octavo y 13 días posteriores a la cirugía de obstrucción parcial se redujo en comparación con la de los animales de control. La capa de músculo liso del íleon, justo aguas arriba del anillo, se hipertrofió a los ocho días después de la cirugía de obstrucción parcial, y se observó una hipertrofia adicional el día 13.

Las células del músculo liso crecieron a tasas progresivamente rápidas en las tres capas de tejido a los ocho y 13 días después de la cirugía de obstrucción parcial, según lo evaluado por el análisis inmunoquímico, mientras que las células intersticiales de Cajal degeneraron dentro de las capas intra e intermusculares. Los subconjuntos de células alfa positivas del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, también conocidos como células alfa PDGFR, se remodelaron dinámicamente dentro de las capas intermusculares de ratones con obstrucción parcial, con un crecimiento observado ocho días después de la cirugía que se había degenerado para el día 13. Además, las células neuronales también se perdieron significativamente en las regiones inter e intramusculares de los ratones con obstrucción parcial tanto en el día ocho como en el 13 después de la cirugía.

Una vez dominada, esta técnica debe completarse en 30 minutos para garantizar la supervivencia del ratón. Al intentar este procedimiento, es importante tratar el tejido de forma rápida y delicada. Después de este procedimiento, se pueden realizar otros métodos, como las pruebas de tendencia gastrointestinal, para responder preguntas adicionales sobre cómo las obstrucciones alteran el peristaltismo intestinal.

Después de su desarrollo, esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la investigación gastrointestinal exploraran las consecuencias de la obstrucción intestinal en ratones. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo colocar rápida y correctamente un anillo alrededor del íleon del ratón para la creación de una obstrucción parcial intestinal. No olvide que trabajar con herramientas quirúrgicas y agujas puede ser extremadamente peligroso, así que tome las precauciones adecuadas.

Además, asegúrese de usar guantes estériles y practicar técnicas asépticas mientras realiza este procedimiento.