Protocolo experimental para el uso de Drosophila como sistema modelo de invertebrado para ensayos de toxicidad en el laboratorio

Este protocolo se puede utilizar para comprender el impacto de los tóxicos en la aptitud física en diferentes etapas de desarrollo y examinar el efecto de la exposición a los contaminantes a lo largo de las generaciones. Para demostrar el procedimiento estarán dos estudiantes de pregrado en mi laboratorio de investigación que forman parte de las comunidades para construir un compromiso activo con los troncos en la Universidad Estatal de Colorado en Pueblo, Hugh Long y Tyler Harvey. Para comenzar a trabajar con un contaminante ambiental de interés, primero determine la dosis letal del 50% del compuesto Drosophilia.

Utilice los métodos establecidos para crear una curva de dosis-respuesta. A continuación, prepare el medio de crecimiento con el compuesto a la concentración deseada. Por ejemplo, agregue el compuesto en la alícuota de agua al hacer medio instantáneo.

Paralelamente, haga el medio de control sin el compuesto agregado. Para establecer el cultivo del cual recolectar animales de experimentación, transfiera los adultos reproductivos al medio de crecimiento utilizando métodos estándar. Estandarizar el número de moscas por vial y evitar el hacinamiento de los adultos.

Luego, incuba las moscas en condiciones estándar durante uno a cuatro días. Después de la incubación, deseche los adultos, dejando atrás los huevos fertilizados para que maduren para la prueba. Luego, devuelva los viales en la incubadora.

La exposición se puede configurar en cualquier etapa del desarrollo. Además, los sujetos experimentales se pueden recolectar en cualquier etapa de desarrollo dependiendo de los objetivos experimentales. Revise diariamente a los animales en desarrollo para identificar el primer signo de la etapa de interés, como las larvas errantes del tercer estadio.

Para probar los efectos de la exposición en la etapa de larvas errantes del tercer estadio, recoja las larvas dentro de una hora después de encenderlas, cuando comienzan a emerger del sustrato alimenticio. A continuación, vierta el agua y mueva las larvas a un pañuelo de laboratorio para eliminar suavemente el exceso de agua. Una vez secas, transfiera las larvas a los tubos apropiados para su recolección.

Para probar los efectos de la exposición en los adultos, recoja los adultos recién cerrados; La anestesia con dióxido de carbono está bien. Asegúrese de recoger las moscas antes de que maduren reproductivamente y comiencen a aparearse. Divida las moscas en grupos específicos para cada sexo y transfiéralas a viales cargados con el medio de control o contaminado experimentalmente para que coincidan con la exposición preexistente.

Más tarde, 24 horas antes de medir los contaminantes en las moscas adultas, transfiera los adultos tanto en el medio de control como en el contaminado a un vial cargado con medio de control para permitir que los adultos eliminen el exceso de medio de sus cuerpos. Después de 24 horas de acicalamiento, las moscas se pueden analizar con el método adecuado. Por ejemplo, los cambios de comportamiento se pueden probar mediante un ensayo de elección de apareamiento.

Con estos métodos, los estudios de los efectos transgeneracionales de la exposición a contaminantes son muy sencillos. Basta con establecer cruces entre adultos expuestos en el medio de control y estudiar los efectos de la exposición a Fnot en su progenie. Este protocolo se utilizó para evaluar la acumulación, eliminación y secuestro de plomo dentro de la misma generación de crías.

Drosophila acumuló fácilmente plomo en diferentes dosis, etapas de desarrollo y escalas evolutivas. Utilizando una exposición multigeneracional, se encontró que la exposición de los padres no se transmite a la primera generación de descendientes adultos. Por lo tanto, utilizando este protocolo, es posible probar las respuestas adaptativas a diferentes escalas evolutivas, así como los efectos transgeneracionales de la exposición.

A continuación, las moscas se criaron desde la etapa de huevo hasta la edad adulta en un medio de control o con plomo y se probaron después de 24 horas de depuración, se probó la preferencia de pareja. Las hembras se criaron en medio con plomo, apareadas preferentemente con machos expuestos al plomo sobre los machos expuestos al control. Por otro lado, los hombres no mostraron el mismo sesgo.

Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo criar y recolectar Drosophila para responder varias preguntas y toxicología. Una vez dominado, este protocolo se puede realizar en uno o dos meses si se realiza correctamente. Al intentar este procedimiento, es importante recordar manipular suavemente las moscas, para no inducir un estrés innecesario.

Después de este procedimiento, se pueden evaluar otras preguntas como preguntas conductuales, genéticas y neurológicas. No olvide que trabajar con contaminantes puede ser extremadamente peligroso y siempre se deben tomar precauciones, como usar equipo de protección personal y preparar contaminantes en una capucha mientras se realiza este procedimiento.