Name: Polysome perfilado en Leishmania, las células humanas y testículo de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-08T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 32 s
Description: Aprende el perfilado de polisomas para analizar la síntesis de proteínas en Leishmania, células humanas y tejido de testículo de ratón. Esta técnica revela mecanismos de regulación traduccional en diferentes sistemas biológicos.

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Los autores agradecen Ching Lee ayuda con grabación de audio. La investigación fue apoyada por los fondos de puesta en marcha de la Texas Tech University Health Sciences Center y por el centro de excelencia de Neurociencia traslacional y terapéutica (CTNT) concede reposo PN 2017-05 AKHRJDHW a A.L.K.; en parte por subvenciones de NIH R01AI099380 K.Z. James C. Huffman y Kristen R. Baca eran eruditos CISER (centro para la integración de la madre educación e investigación) y fueron apoyados por el programa.

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<li>Gkogkas, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autism-related+deficits+via+dysregulated+eIF4E-dependent+translational+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Autism-related deficits via dysregulated eIF4E-dependent translational control.</a> Nature. 493 (7432), 371-377 (2013).</li>
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<li>Ishimura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+function.+Ribosome+stalling+induced+by+mutation+of+a+CNS-specific+tRNA+causes+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">RNA function. Ribosome stalling induced by mutation of a CNS-specific tRNA causes neurodegeneration.</a> Science. 345 (6195), 455-459 (2014).</li>
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</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Fraccionamiento polysome por gradiente de sacarosa combinada con ARN y análisis de la proteína de las fracciones es un método poderoso para analizar estado traslacional de mRNAs individuales o el conjunto translatome, así como roles de factores de la proteína de regulación traduccional maquinaria durante el normal estado fisiológico o enfermedad. Polysomal perfilado es una técnica especialmente adecuada para el estudio de regulación traduccional en organismos como trypanosomátidos incluyendo Leishmania donde con...

Regulación de la expresión génica en las células es controlada por mecanismos transcripcionales y postranscripcional y postraduccionales. Avances en la secuenciación del RNA profunda permiten el estudio de los niveles de mRNA de estado estacionario en una escala genoma-ancha en un nivel sin precedentes. Sin embargo, hallazgos recientes revelaron que nivel de mRNA de estado estacionario no se correlaciona siempre con proteína producción1,2. El destino de una transcripción individual es muy complejo y depende de muchos factores como estímulos internos/externos, estrés, etcetera. Regulación de la expresión génica durante la síntesis de proteína proporciona otra capa de control de expresión necesaria para una respuesta rápida en condiciones cambiantes. Polysome (o "polyribosome") de perfiles, la separación y visualización de la traducción activa de ribosomas, es un poderoso método para estudiar la regulación de la síntesis de proteínas. Aunque sus primeras aplicaciones experimentales aparecieron en la década de 19603, polysome perfilado es actualmente una de las técnicas más importantes en la proteína traducción estudios4. MRNAs individuales puede ser traducida en más de un ribosoma a la formación de un polysome. Las transcripciones pueden ser estancadas en los ribosomas con cicloheximida5 y mRNAs que contienen diferentes cantidades de polisomas pueden ser separados en el proceso de fraccionamiento polysome por ultracentrifugación gradiente de sacarosa6,7 , 8 , 9. Análisis de ARN de fracciones polysomal entonces permite la medición de cambios en los Estados traslacionales de mRNAs individuales a escala de todo el genoma y en diferentes condiciones fisiológicas4,7, 10. el método se ha utilizado también para revelar el papel de la 5' UTR y 3' UTR secuencias en el control del ARNm traducción11, examinar el papel de miRNAs en represión traduccional12, descubrir defectos en biogénesis del ribosome13 y entender el papel de las proteínas del ribosoma asociados con enfermedades humanas14,15. Durante la última década, ha surgido un creciente papel para la regulación de la expresión génica durante la traducción que ilustra su importancia en enfermedades humanas. Las pruebas de control traduccional en cáncer, metabólico y enfermedades neurodegenerativas son abrumador15,16,17,18. Por ejemplo, dysregulation de eIF4E-dependiente control traduccional contribuye al autismo relacionadas con déficits15 y FMRP participa en estancamiento de los ribosomas en mRNAs vinculados al autismo14. Así, polysomal de perfiles es una herramienta muy importante para el estudio de defectos en la regulación traduccional en múltiples enfermedades humanas.
Análisis de la proteína de las fracciones polysomal bajo diferentes condiciones fisiológicas analiza la función de los factores asociados a los ribosomas durante la traducción. La técnica de generación de perfiles polysome se ha utilizado en muchas especies incluyendo levaduras, células de mamíferos, plantas y protozoos10,19,20,21. Parásitos protozoos como Trypanosoma y Leishmania presentan limitado control transcripcional de la expresión génica. Sus genomas se organizan en grupos de gen policistrónico que carecen de transcripción regulada por el promotor22. En cambio, expresión génica desarrollo predominante está controlada a nivel de la proteína traducción y estabilidad del mRNA en tripanosomatídeos especies23,24. Por lo tanto, la comprensión de control traduccional en la ausencia de regulación transcripcional es particularmente importante para estos organismos. Perfiles de polysomal es una poderosa herramienta para estudiar la regulación postranscripcional de la expresión génica en Leishmania25,26,27,28.
Los recientes avances en la detección de niveles de los mRNAs por real tiempo cuantitativo PCR (RT-qPCR) y transcriptoma completo de secuenciación de próxima generación, así como tecnologías de proteómica, trae ventajas de perfiles polysomal a un nuevo nivel y resolución. El uso de estos métodos puede ampliarse aún más por el análisis de fracciones individuales de polysomal por la secuencia de RNA profunda combinada con análisis proteómico para supervisar el estado traslacional de las células en una escala genoma-ancha. Esto permite la identificación de nuevos actores moleculares regular traducción bajo diferentes condiciones fisiológicas y patológicas. Aquí, presentamos un universal polysome perfiles de protocolo que se utiliza en tres modelos diferentes: el parásito Leishmania major, células humanas cultivadas y tejidos animales. Presentamos consejos sobre la preparación de lisados de células de diferentes organismos, optimización de condiciones de gradiente, de inhibidores de la Rnasa y aplicación de RT-qPCR, Western blot y electroforesis de RNA para analizar fracciones polysome en este estudio.

<table><tbody><tr><td>Instruments:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gradient master</td><td>Biocomp Instruments Inc.</td><td>108</td><td></td></tr><tr><td>Fraccionador de gradiente de pistón</td><td>Biocomp Instruments Inc.</td><td>152</td><td></td></tr><tr><td>Coleccionista de fracciones</td><td>Gilson, Inc.</td><td>FC203B</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop One</td><td>Thermo Scientific</td> Microscopio invertido <td>NanoDrop One</td><td></td></tr><tr><td>Nikon</td><td>Nikon ECLIPSE</td><td>Ts2-FL/Ts2</td><td></td></tr><tr><td>2720 Termociclador</td><td>aplicado por Life Technologies</td><td>4359659</td><td></td></tr><tr><td>incubadora de CO2</td><td>Panasonic Healthcare Co.</td><td>MCO-170A1CUV</td><td></td></tr><tr><td>HERATHERM Incubadora Thermo</td><td>Scientific</td><td>51028063</td><td></td></tr><tr><td>Cabina de Seguridad Biológica, clase II, tipo A2</td><td>NuAire Inc.</td><td>NU-543-400</td><td></td></tr><tr><td>Congelador Revco</td><td>Revco Technologies</td><td>ULT1386-5-D35</td><td></td></tr><tr><td>Beckman L8-M Ultracentifuge</td><td>Beckman Coulter</td><td>L8M-70</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Rotor ultracentrífugo SW41</td><td>Beckman Coulter</td><td>331362</td><td></td></tr><tr><td>Rotor de cuchara giratoria</td><td>Eppendorf</td><td>A-4-62</td><td></td></tr><tr><td>Rotor de ángulo fijo</td><td>Eppendorf</td><td>F-45-30-11</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de PCR en tiempo real Quant Studio 12K Flex 285880228</td><td>Applied Biosystems de Life Technologies</td><td>4470661</td><td></td></tr><tr><td>TC20 Contador de células automatizado</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0102</td><td></td></tr><tr><td>Hemacitómetro</td><td>Hausser Scientific</td><td>02-671-51B</td><td></td></tr><tr><td><Software>fuerte&nbsp; </fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>software Triax&nbsp;</td><td>Biocomp Instruments Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td><fuerte>Materiales:</fuerte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Portaobjetos de conteo, doble cámara para contador de células</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga polyclear de tapa abierta, (14 mm x 89 mm)</td><td>Jeringa Seton Scientific</td><td>7030</td><td></td></tr><tr><td>, 5 mL</td><td>BD</td><td></td><td></td>309646</tr><tr><td>Jeringa BD Calibre 3 mL23 Aguja de 1 pulgada</td><td>BD</td><td>10020439</td><td></td></tr><tr><td>Nunclon Delta Placa de superficie, 14 cm</td><td>Thermo Scientific</td><td>168381</td><td></td></tr><tr><td>Nunclon Delta Placa de superficie, 9 cm</td><td>Thermo Scientific</td><td>172931</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene unidad de filtro de flujo rápido de 90 mm, 500 mL, 0,2 aPES</td><td>Thermo Scientific</td><td>569-0020</td><td></td></tr><tr><td>BioLite 75 cm3</ matraces sup></td><td>Thermo Scientific</td><td>130193</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Tubos de centrífuga cónicos de 50 mL</td><td>Thermo Scientific</td><td>339653</td><td></td></tr><tr><td>Chemicals:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizol LS</td><td>Ambion de Life Technologies</td><td>10296028</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP310-500</td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1378-5KG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium's Glucosa media-alta (DMEM)</td><td>Sigma</td><td>D6429-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Suero fetal bovino (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F0926-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina (P/S)</td><td>Sigma</td><td>P0781-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668-019</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco ( DPBS)</td><td>Sigma</td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de magnesio hexahidratado (MgCl2x6H2O)</td><td>Acros Organics</td><td>AC413415000</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de potasio (KCl)</td><td>Sigma</td><td>P9541-500G</td><td></td></tr><tr><td>Nonidet P 40 (NP-40)</td><td>Fluka (Sigma-Aldrich)</td><td>74385</td><td></td></tr><tr><td>Rnasina recombinante Inhibidor de la ribonucleasa</td><td>Promega</td><td>N2511</td><td></td></tr><tr><td>Heparina sal de sodio</td><td>Sigma</td><td>H3993-1MU</td><td></td></tr><tr><td>cOmplete Mini inhibidores de la proteasa sin EDTA</td><td>Roche Diagnostics</td><td>11836170001</td><td></td></tr><tr><td>Glycogen</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0551</td><td></td></tr><tr><td>Water</td><td>Sigma</td><td>W4502-1L</td><td></td></tr><tr><td>Cicloheximida</td><td>Sigma</td><td>C7698-1G</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformo</td><td>Fisher Scientific</td><td>194002</td><td></td></tr><tr><td>Dithiotreitol (DTT)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP172-5</td><td></td></tr><tr><td>Bromuro de etidio</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP-1302-10</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminotetraacético disódico deshidratado (EDTA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>S316-212</td><td></td></tr><tr><td>Optimem</td><td>Life Technologies</td><td>22600050</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrocloruro de puromicina</td><td>Sigma</td><td>P8833-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Fisher Scientific</td><td>S5-3KG</td><td></td></tr><tr><td>Solución de tripsina-EDTA</td><td>Sigma</td><td>T4049-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Hgh Capacidad de ADNc Transcriptasa Inversa Kit</td><td>Biosystems aplicados por life technologies</td><td>4368814</td><td></td></tr><tr><td>Power SYBR Green PCR Master Mix</td><td>Biosystems aplicados por life technologies</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144SI-212</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP26324</td><td></td></tr><tr><td>Hidróxido de potasio (KOH)</td><td>Sigma</td><td>221473-500G</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo anti-RPL11</td><td>Abcam</td><td>ab79352</td><td></td></tr><tr><td>Anticuerpo de proteína ribosómica S6 (C-8)</td><td>Santa Cruz Biotechnology Inc.</td><td>sc-74459</td><td></td></tr><tr><td>1xM199</td><td>Sigma</td><td>M0393-10X1L</td><td></td></tr><tr><td>cloruro de litio</td><td>Sigma</td><td>L-9650</td><td></td></tr><tr><td>Dimetilsulfóxido (DMSO)</td><td>Fisher Scientific</td><td>D128-500</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de carga de gel II</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM8546G</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure Agarose</td><td>Thermo Scientific</td><td>16500-100</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tricloroacético (TCA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A322-100</td><td></td></tr><tr><td>SuperSignal West Pico PLUS sustrato quimioluminiscente</td><td>Thermo Scientific</td><td>34580</td><td></td></tr><tr><td>Formaldehído</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP531-500</td><td></td></tr><tr><td>Dodecil Sulfato de sodio (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L5750-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF)</td><td>Sigma</td><td>P7626-5G</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Adenosina 5&prime;-trifosfato sodio sódico hidrato (ATP)</td><td>Sigma</td><td>A1852-1VL</td><td></td></tr><tr><td>Citosina 5'-trifosfato sódico sódico hidrato (CTP)</td><td>Sigma</td><td>C1506-250MG</td><td></td></tr><tr><td>Uridina 5'-trifosfato sal trisódica hidratado (UTP)</td><td>Sigma</td><td>U6625-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Guanosina 5'-trifosfato hidrato de sal sódica (GTP)</td><td>Sigma</td><td>G8877-250MG</td><td></td></tr><tr><td>SP6 ARN polimerasa</td><td>NEB</td><td>M0207S</td><td></td></tr><tr><td>pirofosfatasa</td><td>Sigma</td><td>I1643-500UN</td><td></td></tr><tr><td>Espermidina</td><td>Sigma</td><td>S0266-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

polysome perfilado en leishmania, las células humanas y testículo de ratón

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Expresión de la proteína adecuada en el momento adecuado y en las cantidades adecuadas es la base de la función normal de la célula y la supervivencia en un entorno rápidamente cambiante. Durante mucho tiempo, los estudios de expresión génica fueron dominados por la investigación a nivel transcripcional. Sin embargo, los niveles de estado estacionario de mRNAs no se correlacionan bien con la producción de proteínas, y la traducción de los mRNAs varía grandemente dependiendo de las condiciones. En algunos organismos, como el parásito Leishmania, la expresión de proteínas está regulada principalmente a nivel traslacional. Estudios recientes demostraron que dysregulation de traducción de proteínas se asocia con cáncer, metabólico, neurodegenerativas y otras enfermedades humanas. Polysome perfilado es un poderoso método para estudiar la regulación de la traducción de proteínas. Permite medir el estado traslacional de mRNAs individuales o estudiar traducción en una escala genoma-ancha. La base de esta técnica es la separación de polisomas, ribosomas, sus subunidades y mRNAs gratis durante la centrifugación de un citoplásmico lisado a través de un gradiente de sacarosa. Aquí, presentamos un universal polysome perfiles protocolo utilizado en tres modelos diferentes - parásito Leishmania major, células humanas cultivadas y tejidos animales. Las células de Leishmania crecen libremente en suspensión y células humanas cultivadas crecen en monocapa adherente, mientras que el testículo del ratón representa una muestra de tejido animal. Así, la técnica se adapta a todas estas fuentes. El protocolo para el análisis de fracciones polysomal incluye la detección de los niveles de mRNA por RT-qPCR, proteínas por Western blot y análisis de ARN ribosómico mediante electroforesis. El método puede ampliarse aún más por la examinación de mRNAs de asociación con el ribosoma a nivel de transcriptoma por RNA-seq profunda y análisis de proteínas ribosoma asociados por espectroscopía de masas de las fracciones. El método se puede ajustar fácilmente a otros modelos biológicos.

En este estudio, describimos la aplicación de la técnica de generación de perfiles polysomal en tres fuentes diferentes: parásito Leishmania major, células humanas cultivadas y testículo de ratón. Las células de Leishmania crecen libremente en el medio líquido en suspensión células humanas cultivadas crecen en monocapa adherente en las placas y el testículo de ratón representa una muestra de tejido. El método se puede ajustar fácilmente a otros tipos de células cultivada...

El objetivo general de la técnica de generación de perfiles polysome es análisis de actividad traslacional de mRNAs individuales o transcriptoma mRNAs durante la síntesis de proteínas. El método es importante para los estudios de regulación de la síntesis de proteínas, activación de la traducción y represión en salud y múltiples enfermedades humanas.

Polysome perfilado en Leishmania, las células humanas y testículo de ratón

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

El objetivo general de esta técnica es estudiar la participación de los ARNm individuales con los polisomas durante la traducción. El perfil de polisomas es una tecnología poderosa para estudiar la participación del ARNm con ribosomas y polisomas. La técnica es importante para los estudios de la regulación de la síntesis de proteínas, la activación de la traducción y la represión.Aquí nuestro equipo presenta las técnicas para el fraccionamiento polisomal y el análisis de fracciones en el ejemplo de tres organismos. Parásito Leishmania major, células humanas cultivadas y un tejido animal. Este enfoque consta de cuatro pasos principales, preparación del lisado, preparación del gradiente de sacarosa y ultracentrifugación, fraccionamiento de polisomas y recolección de muestras.Análisis de las fracciones. Las células de diferentes fuentes se recogen, se lavan y se lisan en tampón de lisis mediante el paso a través de una aguja o un homogeneizador Dounce. La centrifugación se utiliza para eliminar los restos celulares que clarifican el lisado.Un gradiente continuo de sacarosa se forma mediante la mezcla de soluciones de sacarosa al 10% y al 50% en un generador de gradientes. El lisado se

polysome-profiling-in-leishmania-human-cells-and-mouse-testis

Research

Investigación

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Un ensayo parásito-rescate y la transformación con células THP1...

A Parasite Rescate y Transformación de ensayo para la detección antileishmanial contra intracelular<em&gt; Leishmania donovani</em&gt; Amastigotes en THP1 Humanos aguda línea celular de leucemia monocítica

Aquí, se describe un método para analizar los cambios en la iniciación de la traducción de ARNm de células eucariotas en respuesta a condiciones de estrés. Este método se basa en la separación de velocidad en gradientes de sacarosa de la traducción de los ribosomas de los ribosomas no traducir.

Análisis de la Traducción Iniciación Durante condiciones de estrés por polisoma Profiling

La capacidad de las células para adaptarse al estrés es crucial para su supervivencia. La regulación de la traducción del ARNm es una de esas estrategias de adaptación, que proporciona una regulación rápida del proteoma. Aquí, proporcionamos un protocolo estandarizado de perfiles de polisomas para identificar ARNm específicos que se traducen selectivamente en condiciones de estrés.

Evaluación del selectivo ARNm traducción en células de mamífero por polisoma perfiles

Este protocolo describe un método fácil para extraer y fraccionar transcripciones de tejidos vegetales sobre la base del número de ribosomas unidos. Permite una estimación global de la actividad de traducción y la determinación del estado de traducción de ARNm específicos.

Un método fácil para la planta de perfiles de polisomas

Aquí presentamos un protocolo para realizar polysome perfilado en el corazón de ratón perfundido aislado. Se describen métodos para la perfusión del corazón, polysome perfiles y análisis de las fracciones polysome mRNAs, miRNAs y el proteoma polysome.

Proteómicos y miRNA análisis de polisomas de corazón de ratón aislados después de Langendorff la perfusión

Aquí, presentamos un protocolo eCLIP para determinar los principales objetivos de ARN de los candidatos a RBP en Testis.

Método de inmunoprecipitación de reticulado mejorado (eCLIP) para la identificación eficiente de ARN ligado a proteínas en Testis del ratón

Aquí presentamos un método de secuenciación de ARNm de una sola célula multiplexado para perfilar la expresión génica en tejidos embrionarios de ratón. El método de secuenciación de mRNA de una sola célula basada en gotas (scRNA-Seq) en combinación con estrategias de multiplexación puede perfilar celdas individuales de varias muestras simultáneamente, lo que reduce significativamente los costos de reactivos y minimiza los efectos experimentales por lotes.

Multiplexed Single Cell mRNA Sequencing Analysis of Mouse Embryonic Cells

El desarrollo del cerebro de los mamíferos requiere un control adecuado de la expresión génica a nivel de traducción. Aquí, describimos un sistema de perfilado de polisoma con una plataforma de degradado y fraccionamiento de sacarosa fácil de ensamblar para evaluar el estado traslacional de los ARNM en el cerebro en desarrollo.

Análisis de la traducción en el cerebro del ratón en desarrollo utilizando perfiles de polisoma

Este protocolo describe cómo generar un perfil de polisoma sin utilizar generadores de gradiente automatizados o sistemas de fraccionamiento de gradiente.

Perfilado de polisomas sin fabricantes de gradiente ni sistemas de fraccionamiento

En este trabajo se describe la metodología utilizada para generar cepas de L. panamensis y L . donovani que expresan el gen de eGFP como un transgén integrado estable utilizando el sistema pLEXSY. Los parásitos transfectados se clonaron limitando la dilución, y se seleccionaron los clones con la mayor intensidad de fluorescencia en ambas especies para su posterior uso en ensayos de detección de fármacos.

Desarrollo de cepas de especies de Leishmania con expresión constitutiva de eGFP

En este trabajo presentamos una evaluación longitudinal de hámsters dorados infectados por vía intraperitoneal (IP) o intragingival (IG) con L. infantum-Luc mediante imagen bioluminiscente y por PCR. Los hámsters fueron evaluados 1 día después de la infección (1 dpi), 1 semana después de la infección (8 dpi) y 3 semanas después de la infección (22 dpi) y se les practicó la eutanasia a los 50dpi y 8 meses después de la infección.

In vivo Imágenes de hámsters infectados con Leishmania infantum mediante inoculación gingival de amastigotes axénicos que expresan luciferasa

Aprende el perfilado de polisomas para analizar la síntesis de proteínas en Leishmania, células humanas y tejido de testículo de ratón. Esta técnica revela mecanismos de regulación traduccional en diferentes sistemas biológicos.

Polysome perfilado en Leishmania, las células humanas y testículo de ratón

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